JJF
中华人民共和国国家计量技术规范
JJF1838—2020
遗传分析仪校准规范
Calibration Specification for Genetic Analyzers
2020-07-02发布
2021-01-02实施
国家市场监督管理总局发布 JJF1838—2020
遗传分析仪校准规范
JJF 1838—2020
Calibration Specification
for Genetic Analyzers
归口单位：全国生物计量技术委员会主要起草单位：中国计量科学研究院
公安部物证鉴定中心
本规范委托全国生物计量技术委员会负责解释 JJF1838—2020
本规范主要起草人：
高运华 （中国计量科学研究院）王 晶（中国计量科学研究院）赵兴春（公安部物证鉴定中心）刘冰（公安部物证鉴定中心) 王 乐 （公安部物证鉴定中心） JJF1838—2020
目 录
引言 1 范围 2
(Ⅱ) (1) (1) (1) (1) (1) (1) (2) (2) (2) (2) (3) (3) (3) (4) (5) (7) (9)
引用文件 3 概述·· 4 计量特性 5校准条件. 5.1环境要求 5.2校准用标准物质及设备 6校准项目和校准方法
基线漂移和基线噪声.. 6.2 定性（定量）重复性 6.3 通道差异 6.4 检测限
6.1
校准结果表达· 复校时间间隔·
7
8
附录A检测限测量结果的不确定度评定示例附录B校准原始记录参考格式附录 C 校准证书（内页）参考格式
- JJF1838—2020
引言
本规范依据JJF1071一2010《国家计量校准规范编写规则》的要求编制，起草中参考了JJG964一2001《毛细管电泳仪》。
本规范为首次发布。
Ⅱ JJF1838—2020
遗传分析仪校准规范
1范围
本规范适用于基于毛细管电泳原理的遗传分析仪的校准，其他类型的遗传分析仪可参照本规范执行。
2引用文件
本规范引用了下列文件： JJG964一2001毛细管电泳仪凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；凡是不注日期的引用文
件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本规范。
3概述
遗传分析仪（以下简称仪器）主要由毛细管电泳设备、控制及数据分析的计算机工作平台及样品编号输入、设备控制及数据收集的软件和数据分析软件组成，可进行片段多态性分析工作，包括微卫星DNA分析、片段长度分析（STR）、比较基因型分析、 单核苷酸多态性（SNP）研究，还能够完成对基因序列的测定或比较测序等工作。进行 DNA片段分析时，采用不同标记的引物对样品基因组进行PCR扩增，并进行毛细管电泳，扩增产物按照（片段长度）分子量大小进行区分，通过与分子量内标及所设立的等位基因标准物进行自动比对，以数学形式给出基因分型结果，并直接反映出STR位点等位基因中核心序列的重复次数。进行测序分析时，采用双脱氧核苷酸末端终止法，对不同标记的ddNTP的ATCG四种核苷酸通过检测器进行信号收集。仪器具有较为全面的DNA片段长度分析和基因测序功能，能给使用者提供相应的分析数据，供法医 DNA分析、临床诊断和研究使用。
4计量特性
4.1基线漂移 4.2基线噪声 4.3定性（定量）重复性 4.4通道差异 4.5检测限 5木 校准条件 5.1 环境条件
仪器使用允许的环境条件，温度：（15～35）℃、相对湿度：（10～80）%。开机预热
1 JJF1838—2020
30min后进行校准，校准过程中测量并记录环境的温度、相对湿度。 5.2校准用标准物质及设备 5.2.1校准用标准物质
5-羧基-X-罗丹明（5-carboxy-X-rhodamine：5-ROX）荧光修饰标记DNA片段长度标准物质［片段长度：（100～400）bp，浓度值及不确定度范围：（0.020μg/g土 0.006ug/g）～（2.0ug/g1.1ug/g），包含因子k=2。 5.2.2校准用设备
移液器；最大量程2uL、10uL、100uL、200uL、1000uL，且需要检定合格。 直角三角尺：分度值1mm，且需要检定合格。
6校准项目和校准方法
将仪器各部分连接好，开机，并通过自检，各指示器正常工作。
6.1基线漂移和基线噪声
以电阻率为18MQ·cm（25℃）的蒸馏水为样本进行电泳，配制方案见表1。记录基线45min，基线漂移用45min内基线偏离起始点最大信号值（RFU/45min）表示。选取基线中噪声最大峰的最高值（Hmx，RFU）、最低值（Hmin，RFU），按公式（1）计算基线噪声（N。）。用仪器检测器自身的物理量（RFU）作为单位，用三角尺测量相关值。多通道的遗传分析仪，以基线漂移和基线噪声最大的泳道作为仪器的基线漂移和基线噪声指标。
表1遗传分析仪校准电泳样本配制方案
试剂甲酰胺内标
用量/μL 8. 9 0. 1
1
标准物质/电阻率为18.2MQ·cm蒸馏水
(1)
Na=Hmax-Hmin
式中： Na—基线噪声; Hmax——基线中噪声最大峰的最高值，RFU; Hmin—基线中噪声最大峰的最低值，RFU。 6.2定性（定量）重复性
将质量分数为（0.3～2）ug/g的荧光标记DNA片段长度混合标准物质作为样本进行进样，配制方案见表1。用仪器自身分析软件导出并记录每个毛细管道片段DNA 标准物质（如：300bp片段DNA标准物质）原始测量谱图的相对迁移时间和峰面积，连续测量5次。按公式（2）计算片段DNA标准物质的相对迁移时间和峰面积的标准偏差，以各泳道中相对迁移时间相对标准偏差最大的作为仪器定性测量重复性，以峰面积相对标准偏差最大的作为仪器定量测量重复性。 JJF1838—2020
(X; -x)2 n-1
1 X 100% x
定性(定量)
(2)
式中：定性（定量) 定性（定量）重复性；
X; 第讠次测得的迁移时间或峰面积； X n次测量结果的算术平均值； i- 测量序号；
-
测量次数。
n
6.3通道差异
用仪器自身分析软件导出并记录6.2中每个毛细管管道DNA片段的原始测量谱图的峰面积，取5次测量平均值。按公式（3）计算相对标准偏差作为通道差异。
(X; -x) 2 n- 1
1
冰道差异
X100% X
(3)
式中：冰道差异 泳道差异：
X; 第i个泳道测得的迁移时间或峰面积； X n次测量结果的算术平均值； i——测量序号； n- 测量次数。
6.4检测限
将质量分数约为（0.02～0.3）ug/g的荧光标记DNA片段长度标准物质作为样本，配制方案见表1，连续进样3次，用仪器自身分析软件导出并记录片段DNA标准物质原始谱图的峰高（也可打印出峰图，以基线为基点，用直角三角尺测量峰高），计算峰高的算术平均值。
检测限按公式（4）计算。
(4)
D=2Hno/H
式中： D 检测限（最小检测质量分数），ug/g； Hn- 噪声峰高，RFU；
样品的质量分数，ug/g； H 样品峰高，RFU。
0
7 校准结果表达
校准记录应尽可能详尽地记载测量数据和计算结果，推荐的校准记录格式见附录 B。仪器测量结果的测量不确定度应按JJF1059.1的要求评定，不确定度评定示例见附
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