JJF
中华人民共和国国家计量技术规范
JJF1817—2020
核酸分析仪校准规范
Calibration Specification for Nucleic Acids Analyzers
2020-01-17发布
2020-04-17实施
国家市场监督管理总局发布 JJF1817—2020
核酸分析仪校准规范 Calibration Specification for
JJF 1817—2020
Nucleic Acids Analyzers
归口单位：全国生物计量技术委员会
主要起草单位：中国计量科学研究院
凯杰企业管理（上海）有限公司
参加起草单位：中国农业科学院
本规范委托全国生物计量技术委员会负责解释 JJF1817—2020
本规范主要起草人：
董莲华 （中国计量科学研究院）高运华（中国计量科学研究院）曹燕（凯杰企业管理（上海）有限公司）
参加起草人：
隋志伟（中国计量科学研究院）
李亮（中国农业科学院）
王晶（中国计量科学研究院） JJF1817—2020
目 录
引言 1 范围 2 引用文件 3 术语和计量单位·
(Ⅱ) (1) (1) (1) (1 ) (1) (1) (1) (2) (2) (2) (2) (2) (2) (3) (3) (4) (4) (5) (6) (7) (8)
概述·· 计量特性·
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5. 1 示值误差…. 5.2 重复性· 5.3片段浓度线性· 6 校准条件. 6.1 环境条件. 6.2校准用标准物质和校准设备校准项目和校准方法
...
7 7. 1
示值误差 7. 2 重复性 7.3浓度线性 8 校准结果表达
复校时间间隔. 附录A校准用试剂和溶液配制及使用方法附录B校准原始记录参考格式附录 C 校准证书内页参考格式附录D浓度示值误差的不确定度评定示例
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..
- JJF1817—2020
引言
本规范的编制基于对核酸分析仪主要技术参数测试的基础，依据JJF1071一2010 《国家计量校准规范编写规则》、JJF1059.1一2012《测量不确定度评定与表示》的规定进行制定
本规范为首次发布。
Ⅱ JJF1817—2020
核酸分析仪校准规范
1范围
本规范适用于基于凝胶电泳原理对核酸片段的长度和浓度进行分析的核酸分析仪的
校准，适用的核酸片段的长度范围为（100～1000）bp，对于超出此片段长度范围的核酸分析仪的校准，可参照本规范执行。本规范不适用于平板电泳仪和遗传分析仪的校准。
2 引用文件
本规范号用了下列文件： JJF1265一2010生物计量术语及定义凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；凡是不注日期的引用文
件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本规范。
3术语和计量单位
3.1片段长度fragmentlength
表示核酸片段的大小，以核苷酸数目（nt）或碱基对数目（bp）为单位。
3.2碱基对（bp）basepair
核酸中两条链间的配对碱基。如腺嘌呤-胸腺嘧啶（A-T）对、腺嘌呤-尿嘧啶（A- U）、鸟嘌岭-胞嘧啶（G-C）对、鸟嘌呤-尿嘧啶（G-U）对等。碱基对数目是表征DNA 或双链RNA的长度。
［JJF1265—2010，4.41]
4概述
核酸分析仪（以下简称分析仪）是基于凝胶电泳技术原理，将不同大小的双链核酸片段进行分离，在荧光染料存在的条件下，荧光染料嵌人双链核酸中发出荧光，对荧光信号进行检测分析的仪器，可根据各核酸片段的电泳时间和荧光信号值进行定性、定量分析。分析仪通常由进样器、毛细管/微芯片、荧光检测光学部件、微电路控制部件、 计算机及应用软件组成，可用于单个和多重PCR片段、限制性内切酶消化的DNA等片段长度和浓度的分析。
5计量特性 5.1示值误差
片段长度示值误差和片段浓度示值误差。
5.2重复性 JJF1817—2020
片段长度重复性和片段浓度重复性
5.3片段浓度线性 6校准条件 6.1环境条件
实验室环境应当满足分析仪安装的要求，不得存在强烈的机械振动和电磁干扰，校准时实验室温度应当控制在（15～30）℃，相对湿度不大于80%，并确保校准过程中环境温度变化小于3℃。 6.2校准用标准物质和校准设备 6.2.1标准物质
应采用国内外有证标准物质，如DNA片段标准物质，片段浓度≥4Ong/uL，相对
扩展不确定度≤5%（k=2），片段长度范围（100～1000）bp。 6.2.2校准用试剂和溶液
按照附录A配制校准用试剂和标准溶液。根据被校准仪器型号选择配套的试剂盒。 校准用标准物质保存在一20℃，配套试剂盒保存在4℃。 6.2.3移液器
量程范围（110）uL、（10～100）μL，经检定合格。
7 校准项目和校准方法
校准前将低温保存的标准物质及配套试剂提前拿出冰箱，平衡30min后按照附录
A配制及使用标准溶液。打开仪器，预热10min。 7.1示值误差 7.1.1校准板的准备
参照试剂盒说明书，用移液器将示值误差校准用标准溶液加入到校准板中。若校准板为3×4孔的芯片模式，按照表1所示准备校准板；若校准板为12联排管模式，按照表2所示准备校准板；其他模式的校准板可参照表1和表2准备，空白用一级水代替标准溶液。
表1校准板为3×4孔的芯片模式时的加样排布
孔号 1~3 4~6 7~9 10~12
样品标准溶液标准溶液标准溶液空白
标准溶液标准溶液标准溶液标准溶液
标准溶液标准溶液标准溶液空白
2 JJF1817—2020
表2 校准板为12联排管模式时的加样排布
孔号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 样品 标准 标准 标准 标准 标准 标准 标准 标准 标准 标准 空白 片段长度
溶液 溶液 溶液 溶液 溶液 溶液 溶液 溶液 溶液 溶液注：片断长度标准品为配套试剂盒内的长度标准品。
标准品
7.1.2片段长度示值误差
参照仪器说明书，将准备好的校准板置于分析仪内进行测量。记录10次片段长度测定值，按式（1）计算片段长度示值误差。
(1)
△Cbp =Cbp-Cbps
式中： ACbp—片段长度示值误差，bp; Chp一片段长度测量的算术平均值（保留整数），bp； Cbps一片段长度标准值，bp。
7.1.3片段浓度示值误差
参照仪器说明书，将准备好的校准板置于分析仪内进行测量。记录10次片段浓度测定值，按式（2）计算片段浓度示值误差。
△Ccon =Ccon -Ccons
(2)
式中： ACcon 片段浓度示值误差，ng/uL； on———片段浓度测量的算术平均值，ng/μL； Ccons 片段浓度标准值，ng/μL。
7.2重复性
参照7.1.1的加样方式，重复测量10次标准溶液的片段长度和片段浓度，按式（3)分别计算相对实验标准偏差，作为片段长度重复性和片段浓度重复性。
(X; -Xx)2 n
N
1
X 100%
(3)
RSD
X
式中： RSD 相对实验标准偏差，%； X；第i次DNA标准物质的片段浓度或片段长度测得值，ng/μL或bp; x—n次片段浓度或片段长度测得值的算术平均值，ng/μL或bp;
n—测量次数。
7.3浓度线性 7.3.1校准板的准备
参照试剂盒说明书，用移液器将配制好的0.1ng/uL、1ng/uL、4ng/uL、10ng/uL、 40ng/μL的DNA片段浓度线性标准溶液加人到校准板中，每个浓度加样2次，按表1或表
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