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HPLC法测定肾衰宁胶囊中丹参酮IIA的含量
张显杰
(哈药集团三精制药有限公司，黑龙江哈尔滨150000)
摘要：日的建立HPLC法测定肾表宁胶囊中丹参酮IIA的含量方法。方法：采用迪马Cis柱(250×4.6mm,5μm)为色语柱；乙睛-0.01%磷酸溶液（70:30）为流动相；流速0.9mL-min；柱温25%℃C；检测波长270mm；样量10μ1。结果：该方法丹参酮IIA在60.76μg mL-~607.60μg*mL-的浓度范围内具有良好的线性关系，R=0.9999；平均回收率为99.79%，RSD(%)=0.40%。结论：本方法准确，可靠，重复性好，能够用于肾衰宁胶衰的含量控制。
关键词：肾衰宁胶囊；丹参酮IIA;HPLC
肾衰宁胶囊是由丹参、大黄、太子参、黄连等10味中药加工制成的中药复方制剂，其有益气健脾，活血化察，通瞻泄浊的功效，可用于牌失运化，察浊阻滞，升降失调所引起的腰痛瘦倦，面色菱黄，恶心吐，食欲不振，小便不利，大便粘滞及多种原因引起的慢性肾功能不全等症。丹参为处方中君药，为了更好的控制本品质量，建立了肾衰宁胶囊中丹参有效成分丹参酮IIA的含量测定方法，并对建立的方法进行了专属性、线性、重复性、精密度、回收率、检测限等方面的方法学验证考察。其体试验内容如下：
1对照品及试药来源
高效液相色谱仪：Walers2695。试剂、试药：乙睛为色谱纯；磷酸为分析纯：水为纯化水。对照品：丹参酮IA对照品（中检所，批号： 110766200518)。样品：肾衰宁胶囊(市售样品，规格：035g*24s)。
2色谱条件
色谱柱：迪马Cs(250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙睛0.01%磷酸溶液（7030）；检测波长为270mm；流速：0.9mL-min-；柱温：25℃；进样量t:10μ1。
3对照品溶液、供试品溶液的制备
3.1对照品溶液的制备：取丹参酮IIA对照品10mg，精密称定，置 100ml棕色量瓶中，加90%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。（每1ml 含丹参酮II,0.1mg)
32供试品溶液的制备：取本品20粒，将内容物混合均匀，研细，取约1.5g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入90%甲醇50ml，密塞，称定重量.加热回流45分钟，取出，放冷，再称定重量，用90%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得
3.3阴性样品溶液的制备：接处方制备阴性样品。接"32"项下方法制备缺丹参的阴性样品溶液。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μ1,注人液相色谱仪，即得。
4专属性试验
取阴性样品，按阴性样品溶液制备方法处理，照上述色谱条件，精密量取10μ1注入液相色谱仪，记录色谱图，结果表明在与丹参酮IIA对照品相应的保留时间处无色谱峰，表明处方中其他成分及辅料对测定无干扰，本方法专属性良好。
5线性关系考察
精密称取丹参酮II，对照品25.12mg.置25ml棕色量瓶中，加90% 甲醇溶解并稀释至刻度，掘匀，作为对照品储备液。分别精密量取上述对照品储备液各05、1.25、25.5.0.7.5ml，分别置25ml棕色量瓶中，用90%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得不同浓度的对照品溶液，照上述色谱条件，分别精密吸取10±1,注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度(C为坐标，峰面积(A）为纵坐标，对丹参酮IIA进行线性回归，见表1。回归方程为： A=2615.5C+74671R=0.99997;结果表明，丹参酮II，在20.10μg mL-"-301.44μg*mL-浓度范围内线性关系良好。
6精密度试验
取线性关系考察项下浓度为10048±g*mL"的对照品溶液，照上述色谱条件，精密吸取10±1.注人液相色谱仪，记录色谱图，连续进样6次，考察峰面积，见表2。结果表明，对照品溶液连续测定6次的相对标准偏差小于20%，精密度良好
7重复性试验
取同一批次样品，按供试品溶液制备方法配制6份相同浓度的供试品溶液，照上述色谱条件，精密吸取101，注人液相色谱仪，记录色谱图，见表3。结果表明，重复性试验相对标准偏差小于20%，本法测定丹参酮 IIA的重复性良好。
8回收率试验精密称取丹参网I对照品配
10.12mg，置100ml 棕色量瓶中，加90% 甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品原液。精密量取对照品原液08ml、1.0ml 12ml各3份（分别相当于075g样品中丹参酮ⅡI含量的 80% ,100% ,120% ), 分别置圆底烧瓶中，再分别加入0.75g样品，精密称定，精密加人90%甲醇 50ml,密塞，称定重量，加热回流45分钟，取出，放冷，再称定重量，用90%甲醇补足减失的重量，摇勾滤过，取续滤液，
编号 89(*%) 综图积
编号 1
1 4
平的蓝 FSD (%)
编号平 BSD %)
表1线性关系测定结果
auo 548
soan 131.45
e, 383841
20,96 93048
表2精密度测定结果
净国权 264133 20417 28421 28923 2945 20321 eatst,
表3重复性测定结果
合量 (agg*) 343 34 343 34 34 346 34
301,a Tsn
作为低、中、高浓度供试品溶液。取丹参酮I对照品适量，精密称定，加 90%甲醇容解并稀释制成每1ml中约含01mg的溶液，作为对照品溶渡按上述色谱条件，分别精密量取对照品落液与供试品溶液各10L1，注人液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算回收率。结果表明，各浓度下丹参酮II.的平均回收率在98~102%之间，9个回收率数据的相对标准偏差小于20%，该方法准确可靠，误差在允许的范用围内。
9检测限及定量限
精密量取丹参酮IIA对照品溶液，用90%甲醇逐步稀释成一定浓度的溶液，按上述色谱条件进行测定，记录色谱图，信赚比为3时，检测限为 5.0ng*mL-;信噪比为10时，定量限为16.6ng*mL-。
10结论
经过方法学验证试验结果表明，该方法准确、规范，适用于肾衰宁胶囊中丹参酮Ⅱ的质量控制。具有分离效果好、准确、回收率高等优点。
11讨论
11.1曾参考药典方法采用乙睛-0.02%磷酸溶液(7030)为流动相，但由于磷酸极性较大，丹参酮Ⅱ，出峰较快，与其他成分峰分离较差，所以采用乙睛-001%磷酸溶液(7030)为流动相系统，减小了流动相极性，出峰慢此，峰形达到了对称因子要求，分离度符合要求。112采用超声波超声处理样品，测得样品中丹参酮Ⅱ的含量没有回流提取含量高，所以采用热回流的方法提取效果好
参考文献
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[3]中华人民共和国药典(一部(S)北京：化学工业出版社,2010:70-71.[4中华人民共和国药典(一部(S)北京：化学工业出版社,2010374-375