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摘
HPLC法测定叶酸片中叶酸的含量
赵鑫
（哈药集团三精制药股份有限公司，黑龙江哈尔滨150000）
要：日的：建立HPLC法测定叶酸片中叶酸含量方法。方法：采用Cis柱(250x4.6mm，5μm）色语柱；A液：0.10mol-L-KH;PO.+5%乙
晴，B液：70%乙晴水溶液，梯度洗脱为流动相；柱温35；检测波长270nm。结果：该方法在9.4380μg*mL--84.9416μg*mL-求度范图内具有良好的线性关系，R=0.99998；平均回收率为99.69%，RSD(%)=0.66%。结论：该方法准确、可行，适用于叶酸片质量控制方法。
关键词：叶酸片；叶酸；高效液相色谱法
Abstract: Objective:To establish an assay of detemination of Folie Acid Tablets by HPLC.Method:HPLC was carried out on a Cs(250x4.6mm,5-m)column;The mobile phase consisted of A solution(0.10mol-L-potassium dihydrogen phosphate and 2%acetonitrile ) and B solution (60%acetonitrile).The column remained at 30C and the detection wave length was 26Onm.Results:The standard curve was in good linearity in the range of 9.4380μgmL-84.9416μg*mL- ,R=0.99998 for detemination of its related substances. The average recov
e and can be used for the quality
ery rate was 99.69% with RSD of 0.66%.Conclusion:The method is accurate and reliable
controlof
Folic Acid Tablets.
Key words: Folic Acid Tablets;:Folate;HPLC
1实验仪器与试药
仪器：高效液相色谱仪；试药：叶酸对照品(中国药品生物制品检定所)；实验样品(市售样品)；乙睛为色谱纯；其它试剂为分析纯。
2色谱条件
色谱柱：Cl柱（250×4.6mm5μm）；流动相：A液：0.10mol L-KH,PO+5%乙晴：B液：70%乙睛水溶液；按照下列梯度进行：（表1)；检测波长：270nm;进样量：10μL
3对照品溶液、供试品溶液的制备
3.1对照品溶液的制备：准确称取10.0mg叶酸对照品，置100mL 棕色容量瓶中，加1mol-L-1盐酸溶液50mL溶解后，放冷，用水稀释至刻度.摇匀.精密量取5mL置10mL棕色容量瓶中，用混合液（1mol-L-盐酸与水按1:1配比稀释至刻度，摇勾
32供试品溶液的制备：取本品50片.研细，取约2.0g.精密称定，置100mL棕色容量瓶中，加1mol-L-盐酸50mL，置80℃水浴中加热5 分钟，振播使溶解，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液
4线性关系考察
精密称取对照品12.95mg，置50mL棕色容量瓶中，加入1mol-L-盐酸25mL溶解后，放冷，用水稀释至刻度，摇勾，作为对照品储备液。分别精密量取上述对照品储备液各1.0、3.0.5.0、7.0.9.0mL，分别置25mL 棕色容量瓶中，用混合液(1mol-L*盐酸与水按1:1配比)稀释至刻度，摇勾，照上述色谱条件，分别精密吸取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，对叶酸进行线性回归，见表2
回归方程为：y=20.661x+0.445
R=0.99998
结果表明，叶酸在9.4380μg*mL-~84.9416μg*mL-浓度范围内线性关系良好。
5精密度试验
取线性试验项下浓度为47.1898客L-的对照品溶液，照上述色谱条件，精密吸取10μL，注人液相色谱仪，记录色谱图，连续进样6次，考察峰面积，见表3。
结果表明，连续测定6次的相对标准偏差小于2.0%，精密度良好。 6重复性试验
取同一批次样品，按供试品溶液制备方法配制6份相同浓度的供试品溶液，照上述色谱条件，精密吸取10L，注人渡相色谱仪，记录色谱图。见表4。
结果表明，重复性试验相对标准偏差小于2.0%，本法测定叶酸含量的重复性良好。
7回收率试验
按处方比例分别精密称取对照品约4.39mg，5.49mg.6.59mg（相当于2.0g样品中叶酸含量的80%、100%，120%）各3份，分别加入相应的辅料，置100mL棕色容量瓶中，加1mol-L-盐酸50mL,置80℃水浴中加热5分钟，振摇使溶解，放冷，用水稀释至刻度，摇匀.滤过，取续滤液作为供试品溶液。对照品溶液制备同前。按上述色谱条件，分别精密吸取上述两种溶液10止L.注入液相色谱仪，记录色谱图，计算回收率。见表5。
3 4 4
ieis
表1
m*min)
1.00 1.00
表2
编号(PmL)
峰面积
8号 1 RSD (%)
务 n 4 n o 平均置 RSD (%)
8号中高
率购回收事(%) RSD%(n=9)
9.4385 198.1
42 100.0 100.0 8 100.0
线性关系测定结果
83139 582.3
3 47.1898 9m.5
表3精密度测定结果
66.0657 1360
医港选管控淀基表4重复性测定结果
f00g
18952 1.08
表5回收率测定结果
eY(ing)
的的的检时有处
9的 fog.)
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100.@ 顾明
8.% 2。. 0
84.9416 1759.2
99.94 99,35 99.77
结果表明，各浓度下的叶酸平均回收率均在98102%之间，9个回收率数据的相对标准偏差小于2.0%，该方法准确可靠，误差在允许的范围内。
8讨论
保健食品功效成分检测方法中测定叶酸采用酶解法，价格昂贵，检验成本高，而且实验过程繁项，不易控制，本方法采用1mol-L-"盐酸溶液溶解样品，实验步骤简单，方法学验证试验表明该方法准确、灵敏。
参考文献
[1厦璃车宝泉张盐,周立券.RP-HPLC测定复方硫酸亚铁叶酸片中叶酸的含量药物分析杂质，2006,41(23)1835.