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HPLC-ELSD法测定硫酸庆大霉素含量的方法改进
国立娟
（黑龙江江世药业有报公司，黑龙江哈尔滨150000）
摘要：本文用高效液相法对硫酸庆大霉素缓释片中的硫酸庆大霉素的进行了含量测定。固定相为：依利特hypersilBDSC18色谱往(4.6*250*5u）,0.2mol/L的乙酸-甲醇(93:7)为流动相，涤移管温度为110摄氏度；载气流建为2.6ml/min;硫酸庆大害素在10~400μg mL-范围内呈良好的线性关系。硫酸庆大霉素的平均回收率为99.3%。本法简便、重现性好、回收率高，可用于硫酸庆大露素缓释片中硫酸庆大霉素的含量测定。
关键词：硫酸庆大霉素缓释片；硫酸庆大露素；测定
硫酸庆大霉素为氨基糖献类广谱抗生素，对绿脓杆菌、肺炎杆
峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.81%。结果表明，本
菌、克雷伯菌属、大肠埃希菌、产气杆菌、肠杆菌属、变形杆菌属、沙
实验精密度良好。
雷菌属、铜绿假单胞菌及变形杆菌等革兰阴性菌和金葡菌等作用较强。硫酸庆大霉素的作用机制是与细菌核糖蛋白体亚单位上的特异性蛋白牢固结合，干扰核糖蛋白体功能，阻止蛋白质合成，并引起翻译信使核糖核酸(mRNA)上密码的错误而合成无功能蛋白质-)。硫酸庆大霉素适用于治疗敏感细菌所致败血症、脑膜炎、脑室炎、下呼
2.6重现性试验
分别称取同批硫酸庆大霉素缓释片样品6份，分别制备成供试品，按色谱条件测定含量，并计算样品的RSD值为0.83%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.7稳定性试验
吸道感染、肠道感染、盆腔感染、腹腔感染、皮肤软组织感染、复杂性
取供试品溶液，分别在0.0.5小时，1.0小时，1.5小时，2.0小时，
尿路感染等。测定硫酸庆大霉素的方法较多但精密度性较低3-6。本
4.0小时精密吸取供试品溶液注人液相色谱仪，进样测定，供试品硫
文用高效液相法对硫酸庆大霉素缓释片中的硫酸庆大素的进行了含量测定。
1仪器与试药
1.1仪器：高端试剂级超纯水机(HO-50）郑州华新电气公司；莱伯泰科LC600高效液相色谱仪（北京莱伯泰科仪器股份有限公司）； 10L-50L大型旋转蒸发仪(北京赛美思仪器设备有限公司)； TU-1901/TU紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司);HN-6AL功率可调超声波清洗（上海汗诺仪器有限公司)； ZAM3000ELSD蒸发光散射检测器（北京温分分析仪器技术开发公司);BT赛多利斯电子天平（北京五洲东方科技发展有限公司)； JMLABOTW系列通用水浴槽（优莱博技术（北京）有限公司）； PH-660高精度实验室酸度计（上海禾工科学仪器有限公司），
1.2试药：乙睛（台州市椒江阳春化工有限公司）、乙酸（东莞市乔科化学有限公司)、磷酸（常州市武进区前黄华茂化工有限公司）、甲醇（佛山市南海江顺化学制品厂）、三乙胺（广州市卡期斯化工科技有限公司）、四氢呋嘴（台州市江阳春化工有限公司）、冰醋酸（佛山市南海江顺化学制品厂）、磷酸氢二铵（广州市卡朋斯化工科技有限公司)。
2含量测定
2.1色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。色谱柱为依利特hypersilBDSC18色谱柱(4.6*250*5u);以 0.2mol/L的乙酸-甲醇(93:7)为流动相，漂移管温度为110摄氏度；载气流速为2.6ml/min。理论板数按硫酸庆大毒素峰计算应不得低于2000
2.2供试品溶液的制备
取硫酸庆大霉素缓释片适量，精密称定至容量瓶内，加适量流动相超声20分钟，放凉，用流动相定容，过0.45μm的滤膜，即得。
2.3对照品溶液的制备
精密称取硫酸庆大霉素对照晶约5mg：置10毫升棕色容量瓶中，用流动相超声波振荡溶解并用流动相稀释至刻度，摇匀，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇勾，即得(每1mL溶液中含硫酸庆大霉素50μg)。
2.4标准曲线的制备
制备浓度为 10μg*mL-",20μg*mL-",40μg*mL-",80μg*mL-"、 160μg*mL-",240μg*mL*,320μg*mL-",400μg*mL-"的对照品溶液，分别精密吸取10μL注人HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值的对数A(μg)为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，硫酸庆大霉素对照品在10-400μg"mL-范围内线性关系良好。
2.5精密度试验
精密吸取硫酸庆大霉素对照品溶液10μL重复进样6次，测定
酸庆大霉素峰面积积分值的RSD为0.96%。结果表明硫酸庆大需素在4.0小时内稳定。
2.8阴性干扰试验：按处方除硫酸庆大霉素的原辅料，按方中比例和制备工艺方法制成明性制剂，用以上选定的测定条件进行吸收曲线绘制，观察在与硫酸庆大霉素相同的保留时间处是否存在吸收峰，结果：在选定条件下测得的阴性液吸收曲线在与硫酸庆大素相同保留时间处不存在吸收峰，表明选定的条件测定硫酸庆大霉系无干扰，其有较强的专属性。
2.9回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的硫酸庆大霉素对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液.测定含量(同时测定样品含量).计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%，RSD为0.96%，
2.10样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定硫酸庆大霉素缓释片三批样品中硫酸庆大霉素的含量，结果三批样品的含量分别为标示量的 100.5% ,99.8%,100.3%。
3讨论
分别考察0.2mol/L的乙酸-甲醇(93:7),0.2mol/L的乙酸-甲醇（80:20)，水-甲醇-磷酸（10:90:0.01）.乙腈-甲醇-四氢呋腩-水(30:15:35：20).水-甲醇-乙腊-冰醋酸(10:60:30：0.1)，甲醇-水三乙胺(70：30：0.2)不同比例的流动相.结果以0.2mol/L的乙酸-甲醇(93:7)为流动相.供试品各蜂分离效果最好.故选用0.2mol/L的乙酸-甲醇(93:7)为流动相。本实验方法是一种简便、准确、安全的测定硫酸庆大霉素缓释片含量的方法。硫酸庆大霉素缓释片中硫酸庆大毒素的含量应为标示量的95-105%。
参考文献
[1]段尧,易宜昌,聂中越.硫酸庆大寒素缓释片的制备及其体外释放度的试验研究[].中国现代应用药学,2006(S1)
[2]刘勇,董伟,卓如意,唐琴,孙患良.靶向硫酸庆大霉素结合物的制备和免疫原性研究[动物医学进展,2008(6)
[3]程青,卢文庆,最素云.硫酸庆大露素聚乳酸微球的制备及其体外缓释度的测定[]南京师大学报(自然科学版),2006(02)
[4]习玲玲,朱岩.反相离子对色谱-脉冲安培电化学法测定硫酸庆大零素中各组分含量U)分析化学,2006(12)
[5]李传响,马鸣晓,刘红,硫股庆大亨素薄层快违鉴别方法的深讨[J] 中国药事,2006(8)
[6]李则,衰汀.硫酸庆大霉素含量测定方法研究进展[1].实用药物与格床,2005(2)