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法测定蜂胶口腔膜中白杨素的含量
HPLC
左琳孟凤拖
（哈药集团三精制药有限公司，黑龙江哈尔滨150000）
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要：日的：建立HPLC法测定蜂胶口腔膜中白杨素的含量方法。方法：采用Cs柱(250x4.6mm,5μm)色语柱；甲醇—0.5%磷酸溶液报
（64：36）为流动相；流速1.0mL+min"；程温30℃；检测波长268nm。结果：该方法在7.5950μg*mL--75.9500μg*mL浓度范图内具有良好的线性关系，R=0.99998；平均回收率为99.62%，RSD(%)=0.40%。结论：该方法准确、可行，适用于蜂胶口腔膜的质量控制方法。
关键词：峰胶口腔膜；白杨素;HPLC
蜂胶口腔膜具有清热止痛，用于复发性口疮的功效，为了控制蜂胶口腔膜的质量，对其处方中蜂胶中的有效成分白杨素用HPLC法进行了含量测定，结果满意。我们建立了HPLC法测定蜂胶中白杨素的含量，对蜂胶口腔膜进行了很好的质量控制，并对建立的方法进行了专属性、线性、精密度、重复性、回收率等方面的方法学验证考察。具体试验内容如下：
1试药及来源
对照品来源：白杨素对照品（中国药品生物制品检定所)；样品：蜂胶口腔膜(市售样品，规格：每片1em×1.3em);试剂、试药：甲醇为色谱纯；水为超纯水；其它试剂为分析纯。
2仪器及色谱条件
仪器：高效液相色谱仪Agilent1260；
色谱柱：Cx柱（250×
4.6mm，5μm）；流动相：甲醇—0.5%磷酸溶液（64:36）；柱温：30℃；流速： 1.0mL-min"；检测波长：268nm。
3对照品溶液、供试品溶液的制备
3.1对照品溶液的制备：取白杨素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含白杨素30ug的溶液，即得。
32供试品溶液的制备：取本品20片，精密称定，剪碎，精密称取适量(约相当于白杨素40mg)，置圆底烧瓶中，加入75%乙醇溶液30ml，称重，于水浴中加热回流提取1.5h，放冷，再称定重量，用75%乙醇溶液补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置50ml量瓶中，加人 75%乙醇溶液稀释并定容，作为供试品溶液。
4专属性试验
取不含蜂胶的阴性样品，按供试品溶液制备方法处理，照上述色谱条件，精密量取10=L注入液相色谱仪，记录色谱图，结果表明在与白杨素对照品相应的保留时间处无色谱峰，表明处方中各原辅料对测定无干扰，本方法专属性良好。
5线性关系考察
精密称取白杨素对照品15.19mg，置50mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。分别精密量取上述对照品贮备液各0.25、0.5、1.0、1.5、2.5mL.分别置10mL量瓶中用甲醇稀释至刻度，摇勾，照上述色谱条件，分别精密吸取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，对白杨素进行线性回归，见表1。回归方程为：y=66.95x+10.139
R=0.99998。结果表明.白
杨素在7.5950μg*mL-~75.9500μg*mL-浓度范围内线性关系良好。
6精密度试验
取线性试验关系考察项下浓度为30.3800μg*mL的对照品溶液，照上述色谱条件，精密吸取10±L.注人液相色谱仪，记录色谱图，连续进样6次，考察峰面积，见表2。结果表明，连续测定6次的相对标准偏差小于2.0%，精密度良好。
7重复性试验
取同一批次样品，按供试品溶液制备方法配制6份相同浓度的供试品溶液，照上述色谱条件，精密吸取10μL,注入液相色谱仪，记录色谱图。见表3。结果表明，重复性试验相对标准偏差小于20%，本法测定白杨素含量的重复性良好
8回收率试验
分别精密称取白杨素对照品约16mg.20mg、24mg（分别约相当于 1.5g中白杨系含量的80%、100%、120%）各3份，分别加人1.5g样品共 9份，置阴底烧瓶中，加人75%乙醇溶液30ml称重，于水中加热回流提取1.5h，放冷，再称定重量，用75%乙醇溶液补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1ml，置50ml量瓶中，加人75%乙醇溶液稀释并定容，作为供试品溶液。对照品溶液制备同前。按上述色谱条件，分别精密
编号
浓(度 (μg *l*)
峰面积
级号-n 平均痛
naga o 品典
号% 20% 12% 平均回收率 BSS
改时间(小) 蜂面想
表1线性关系测定结果
2
1 7. 5950 529.8
15. 1900 1014.6
3
30.3800 2035.4
45. 5700 3073.9
表2精密度测定结果国城贸贸商司表3重复性测定结果
表4回收率测定结果
并品中自新势 (g)
州军限#理您
加人自份素期量 ar
联能联器领公限
得自新素的量
r 精公 0.
蓝酸欢吸明明质欢
表5含量测定溶液稳定性试验结果
8
12
75.9500 509.1
99.39 9
RSO(%)
1933. 41939. 61936.5
1935. 11937.21936. 60. 12
吸取上述两种溶液10止L.注入液相色谱仪，记录色谱图，计算回收率。见表4.结果表明，各浓度下的白杨索平均回收率均在98~102%之间，9 个回收率数据的相对标准偏差小于2.0%，该方法准确可靠，误差在允许的范围内。
9溶液稳定性考察
照含量测定方法制备供试品溶液，于室温放置0、2.4、8、12小时，精密量取不同时间的溶液10μL,分别注人液相色谱仪中，记录主峰的峰面积。结果见表5。由表可见，峰面积相对标准偏差小于2.0%，8小时内本品，含量测定溶液稳定。
10结论
该测定方法准确、可行，适用于蜂胶口腔膜中白杨素的含量测定。 11讨论
考察温浸、超声、回流提取方法，回流方法测得的样品含量最高，回收率好。溶剂考案过甲醇，50%乙醇、75%乙醇，95%乙醇，试验结果表明 75%乙醇作落剂回收率最高。
参考文献
[1]中华人民共和国药典(一部[M}北京：化学工业出版社,2010:336.
[2]焦连庆,于敏.HPLC测定蜂胶中白杨素的含量中成药,2005,(8) 961962
[3]王小平,白吉庆,林励,清建国,卢占列.HPLC测定不同产地峰胶中白杨素的含量四川中医,2009,5:5556.