研究报告
中国酿造
2018年第37卷第5期
总第315期
·97.
罗汉果内生菌中产环糊精葡萄糖基转移酶菌株的筛选及产酶条件优化
张昌志'范彩琴龙楚媚’付强’赵丰丽2*
（1.广西师范大学生命科学学院广西桂林5410062.珍稀危动植物生态与环境保护教育部重点实验室广西桂林541006）摘要从罗汉果内生菌中筛选高产环期精葡萄糖基转移酶(CGTase)的菌株进行菌种鉴定并对其产醇条件进行优化。利用CGTasc 快速筛选法从罗汉果内生菌中筛选获得一株高产CGTase的菌株编号为ND-6经形态学和分子生物学鉴定其为一株解淀粉芽孢杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）。通过单因素和正交试验优化得到其产CGTase条件为1.0%环糊精作碳源，1.0%蛋白陈作氮源初始pH
值为8.0装液量70mL/250mL发酵温度40%。在此优化条件下菌株所产CGTase酶活达到9753U/mL是优化前的1.43倍关键词罗汉果内生菌环糊精葡萄糖基转移醇产酶条件优化
中图分类号：TQ925
文章编号：0254-5071(2018)05-0097-06
doi:10.11882/j.issn.02545071.2018.05.019
Screening of cyclodextrin glucosyltransferase-producing strains from endophytic bacteria in
Siraitiagrosvenoriiandoptimizationofitsenzyme-producingconditions
ZHANG Changzhi, FAN Caiqin', LONG Chumei', FU Qiang', ZHAO Fengli2
(1.College of Life Science, Guangxi Noma/ University, Guilin 541006, China; 2.Key Laborafory of Ecology of Rare and
osoeaooaoeeae
Abstract :The high cyelodextrin glucosyltransferase (CGTase)-producing strains from endophytic bacteria in Siraitia grosvenorii was screened and identified, and its enzyme-producing conditions were optimized. Using CGTase rapid screening method, a strain with the high enzyme activity was obtained and named ND-6, and the strain was identified as Bacillus amyloliquefaciens by morphology and molecular biology. Through single facton and orthogonal experiments, the optimum CGTase-producing conditions were using cyclodextrin 1.0% as carbon source and peptone 1.0% as nitro-gen source, initial pH 8.0, loading volume 70 ml/250 ml, and fermentation temperature 40 °C. Under the optimal conditions, the CGTase activity of the strain could be up to 9 753 U/ml, which was 1.43 times higher than that of before optimization.
Key words Siraitia grosvenori; endophytic bacteria; cyclodextrin glucosyltransferase; enzyme-producing conditions; optimization
罗汉果(Siraitiagrosvenori)是我国特有珍贵药用和甜料植物，为葫芦科多年生藤本植物主要分布于广西北部山区,具有润肠通便、抗氧化、抗癌、免疫调节围、降血糖、止咳祛痰等功效。近年来罗汉果苷IE、罗汉果苷IIIE、罗汉果苷VI、罗汉果苷V等11种苷成分已在罗汉果的果实中提取获得。罗汉果者都具有相似的者元都以罗汉果醇为苷元骨架,葡萄糖为糖基供体不同之处在于C,和Cs位置上所连的葡萄糖基团的数目和连接方式。李典鹏等利用薄层色谱分析研究发现苦味的苷IIE、苷II主要存在于果龄30d果实中30d和40d分别发现了苷III、IV甜苷V直到70d时才出现且在85d其含量才达到最高反映出了随着果实的成熟苦苷转化为甜苷。TANGQ等报道50～70d 甜苷V急剧积累期果实中调控罗汉果苷元糖基化的二磷酸尿核苷葡萄糖基转移酶（uridinediphosphateglucosyltrans-feraseUGT)基因表达水平大幅上调说明罗汉果随着果实的成熟苦苷转化为甜苷的过程中葡萄糖基转移酶发挥
收稿日期2018-03-09
修回日期2018-04-26
基金项目程林市科学研究与技术开发计划项目（20171015-2）
着重要的作用也说明罗汉果中含有葡萄糖基转移酶
到目前为止在世界各地陆续发现了可以产环糊精葡萄糖基转移酶(cyclodextrin glucosyltransferaseCGTase)的菌株根据采样地点的不同特性一般可分为两种，一种是从极端环境取样如碱性土壤、沙土]、海洋、湖泊]、火山、油井等。第二种是从底物富集地取样从含高浓度淀粉的土壤中分离筛选目的菌株如玉米、木薯叫、大豆、土豆、甘蔗、黄豆、南瓜等的种植地以及淀粉工厂原料废物[6-1]。本研究从罗汉果内生菌入手从中筛选出高产环糊精葡萄糖基转移酶的菌株进行鉴定在此基础上采用单因素和正交试验方法对该内生菌的产酶发酵条件进行优化,以期利用CGTase酶法改性罗汉果苦味苷、改变罗汉果苦味皂苷上葡萄糖基团数目、从根本上解决苦果和苦苷的有效利用等问题奠定基础。
1材料与方法 1.1材料与试剂
作者简介张昌志(1991-）,男硕士研究生研究方向为生物化学与分子生物学、
*通讯作者赵丰丽(1961-）女教授颈士研究方向为功能性食品、发酵食品及生物活性成分
?1994-2018 China Academic Journal Electronic Publishing House, All rights reserved.
http://www.cnki.net