研究报告
中国酿造
2017年第36卷第7期
总第305期
芽孢杆菌LWM1的分离鉴定及其对蜡样芽孢杆菌的抑制作用朱大恒'刘丽'喻锐赵再再'朱利利程方'刘雨松'吴诗佳'张莉”席宇*（1.郑州大学生命科学学院河南郑州4500002.河南工业大学生物工程学院河南郑州450002
·27.
摘要从土堰样品中分离出10株芽孢杆菌（Bacillusspp.），以蜡样芽孢杆菌（Bacilluscereus)为指示菌株采用牛津杯扩散法筛选出一株具有较强抑菌活性的菌株LWM1。综合形态学、生理生化试验、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)及 16SrDNA基因序列同源性分析菌株LWMI被初步鉴定为一株解淀粉芽孢杆菌（Bacilusamyloliquefaciens）并研究了其在马铃薯葡萄糖水(PDW)和营养肉汤培养基(NB)中发酵上清液对蜡样芽孢杆菌的抑制效果。结果表明PDW培养基更有利于菌株LWM1生长
和抑菌物质产生。因此,可利用PDW培养基为主要底物大规模发酵制备菌株LWM1的抑菌物质。关键词芽孢杆菌分离鉴定抑菌活性
中图分类号Q815
文章编号：0254-5071(2017)07-0027-05
doi:10.11882/j.issn.02545071.2017.07.007
Isolation and identification of Bacillus LWMl and its inhibition effect on Bacillus cereus ZHU Daheng', LIU Li, YU Rui', ZHAO Ranran', ZHU Lili', CHENG Fang', LIU Yusong', WU Shijia', ZHANG Li, XI Yu'*
(1.Schoof of Life Sciences, Zhengzhou University, Zhengzhou 450000, China,
2.College of Biological Engineering, Henan University of Technology, Zhengzhou 450002, China)
Abstract :10 strains of Bacillus spp. were isolated from soil samples. Using Bacillus cereus as the indicator strain, strain LWM1 with strong antibacte rial activity was isolated by Oxford cup diffusion method. Combined with morphological, physiological and biochemical tests, matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) and 16S rDNA gene sequence analysis, strain LWM1 was preliminarily identified as Bacillus amyloliquefaciens. The inhibition effect of the femented supernatant fluid of strain LWM1 in PDW and NB medium on Bacillus cereus was researched. The results showed that PDW medium was more favorable for the growth of strain LWM1 and the production of inhibitive substance. Therefore, the inhibitive substance of strain LWM1 could be prepared by large-scale fermentation with PDW medium as the main substrate Key words Bacillus spp-; isolation,; identification; antibacterial activity
蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)是环境中常见的食源性致病菌之一在食品的生产加工过程中被引入到人体(24)，部分菌株可通过产生呕吐毒素、溶血素和肠毒素等物质危害人体健康。食品加工过程中蜡样芽孢杆菌极易通过形成生物膜而提高其粘附能力和抵抗力例同时生物膜也可为其他有害微生物提供良好的定殖场所导致设备不易清洗污染的菌体不易清除进而产生潜在食品安全问题。鉴于芽孢具有较强抵抗力采用理化方法防控蜡样芽孢杆菌的危害时操作繁琐成本较高因此研究开发高效针对蜡样芽孢杆菌的抑菌剂对保障食品质量安全和人类健康具有重要意义]。目前利用植物源抑菌剂植物提取物113-14] 和植物精油[1S-17])抑制蜡样芽孢杆菌的研究较多而微生物源抗菌剂仅有少量利用乳酸菌抑制蜡样芽抱杆菌或去除其毒素(181例的报道利用芽孢杆菌的研究开发甚少(3)。芽孢杆菌能产生多种高效抑菌物质，目前芽孢杆菌的多个菌株已被成功开发为生物杀菌剂(2)。而且作为一种理想的胞
收稿日期2017-03-17
外分泌型微生物芽抱杆菌发酵产物中抑菌物质更有利于提取和纯化。因此选育高抑菌性能的芽孢杆菌菌株已成为当前生物杀菌剂领域的研发热点
本研究对从土壤中筛选的一株对蜡样芽孢杆菌抑菌活性较高的菌株通过形态学、生理生化试验、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laserdesorption/ ionization time-of-flight mass spectrometry MALDI-TOF MS) 及16SrDNA基因序列同源性分析对分离菌株进行了鉴定并初步研究了分离菌株发酵上清液对蜡样芽孢杆菌的抑制作用，旨在为开发绿色环保抗菌剂提供技术支持，
1材料与方法 1.1材料与试剂
1.1.1菌种及培养基
蜡样芽孢杆菌(Bacilluscereus)(菌株编号为ATCC11778)：由河南省疾病预防控制中心提供菌种保藏于营养琼脂(nutrientagarNA)斜面培养基。营养琼脂培养基(NA）、营
基金项目国家自然科学基金项目（31401918）国家级大学生创新创业训练计划资助项目（201610459070）
作者简介朱大恒（1965-），男教授，博士研究方向为微生物发酵工程*通讯作者席宇(1976-）男进师项士研究方向为微生物发酵与优化
?1994-2018 China Academic Journal Electronic Publishing Housc, All rights reserved. http://wvw.cnki.net