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2012 Vol.31 No.7 Serial No.244
China Brewing
琼胶酶高产海洋细菌QM42的发酵条件优化
王宁，严孝强，杜宗军*
（山东大学海洋学院，山东盛海264209）
Research Report
摘要：通过单因素试验和正交试验对琼胶酶高产海洋细菌QM42发酵条件进行了优化，经过发酵培养试验，确定优化培养基组成；蛋白膝浓度5.0g/L、酵母粉浓度0.50g/L、琼胶浓度3.0g/L；在培养初始pH值为7.0、装液量50mL/150mL、培养盐度50g/L，29℃条件下发醇48h，租酶液酶活力达到627.65U/mL
关键词调：琼胶酶：发酵条件：优化：正交试验
中图分类号：Q93-335
文献标识码：A
文章编号：02545071(2012)07008604
Optimizationoffermentationconditionsforagarase-producingmarinebacteriumQM42
WANG Jining, YAN Xiaoqiang, DU Zongjun*
(College ofMarineScience,Shandong UniversityatWeihai,Weihai264209, China)
Abstract: The fermentation conditions of an agarase-producing marine bacterium QM42 were optimized by single factor text and orthogonal test, Re-sults showed that the optimal culture medium consisted of 5.0g/L peptone, 0.50g/L yeast extract and 3.0g/L agar. The optimal environmental condi-tions were as followed: temperature 29°C, the initial pH value 7.0, the salinity 50g/L, liquid medium volume 50ml in 150ml shake flask and fermenta tion time 48h. Under such eonditions, agarase activity reached 627.65U/ml.
Key words: agarase; fermentation conditions; optimization; orthogonal experiment
琼胶(agar)为一种亲水性多糖，是由琼脂糖(agarose）和硫琼胶(agaropectin）组成的混合物。目前对琼胶的利用主要还是侧重于其凝胶性以及不易降解的性质方面。与琼胶相比，琼胶寡糖的应用前景更为广阔，经济价值也更高，琼胶酶降解琼胶糖生产的琼寡糖产品已广泛应用于食品业，化妆品业和医药工业，具有十分广阔的发展前景。
利用琼胶酶降解琼胶是制备低聚糖的一个重要途径，
由于其具有专一性，可选择性地酶切特定链的特定位置，且反应条件温和，降解流程易于控制，并且属于绿色环保的技术，这有利于寡糖的规模化制备，使解法在多糖降解中的应用日益增加。
在产琼胶酶细菌中海洋细菌有着很重要的地位。海洋微生物生产琼胶酶已有报道，1902年首次从海水中分离到能分解琼胶的细菌一琼胶假单胞菌。从那以后，人们已经从海水系统中分离到了多种琼胶分解菌，包括Pseudomonas（假单胞菌属）、Pseudoalteromonsa（假交替单胞菌属）、 Streptomyces（链霉菌属）、Alteromonas（交替单胞菌属）、 Microscilla、Vibrio（弧菌属）、Cytophaga（噬纤维菌属）等。
本文对产琼胶酶高产菌株海洋细菌QM42的产酶条件进行了优化研究，确定了产酵菌株的最佳培养条件，为琼胶酶的深入研究、开发应用以及琼胶低聚糖的进一步工
业化生产提供了一定的理论基础。 1材料与方法
1.1材料 1.1.1菌种
收稿日期：2012-03-19
基金项目：山东大学威海分校第六届科研立项项目（A11023）
实验中所用海洋细菌QM42是本实验室分离鉴定的海洋细菌新属新种，2009年发表，俞名为中华黄海杆菌
(Gilvimarinus chinensis)。 1.1.2培养基成分
液体发醇培养基各成分质量分数：琼脂0.5%，蛋白陈 0.5%，酵母粉0.1%，柠檬酸铁0.01g/1000mL，pH7.2~7.8，海水配制。
种子培养基各成分质量分数：蛋白陈0.5%，酵母粉0.1%，柠橡酸铁0.01g/1000mL.pH7.2~7.8，海水配制。
2216E海洋细菌培养基各成分质量分数：琼脂1.8%，蛋白陈0.5%，酵母粉0.1%，柠檬酸铁0.01/1000mL，pH7.2~7.8
海水配制。121℃、20mim灭菌倒板。 1.2方法
1.2.1菌株的化
将菌株从保种管中取出，划线接种于固体培养基上，
于28℃培养，视其生长情况接种3代进行驯化。 1.2.2种子液制备
将菌株接种于种子培养基中，28℃播瓶培养72h。 1.2.3发酵培养
在150mL三角瓶中接入60mL液体发酵培养基，取种子液1mL接入液体发醇培养基中，于28℃、150r/min播瓶培养 72h后取适量发酵液5000r/min离心10min，测上清液酶活力。 1.2.4酶活力的测定
采用3，5-二硝基水杨酸法测定酶活力。操作步骤如下：用磷酸缓冲液(pH7.2)配制浓度为1%的琼胶溶液，在40℃
作者简介：王军宁(1991-)，女，辽宁朝阳人，本科生，研究方向为药学；社宗军*，副教授，通讯作者。