研究报告
中国酿造
2012年第31卷第6期
总第243期
新疆酿酒葡萄中内生放线菌的分离与初步鉴定
祁付云，吕新蓬，颜海燕，周红，刘娅*（石河子大学食品学院，新聚石河子832003）
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摘要：采用组织块分离法分别从新强酿酒葡的根、基、叶中分离内生放线菌，共分离出14株不同的放线菌，其中根部的数量明显多于叶片和基部；菌株经形态和生理生化鉴定，初步确定分属于链霉菌属和诺卡氏菌属，并以链霉菌属居多，占总菌数的78.57%。关键调：酿酒葡萄：内生放线菌：分离；初步鉴定
中图分类号：TS261.1
文献标识码：A
文章编号：02545071(2012)06-007702
Isolation and primary identification of Endophytic actinomycete in Xinjiang wine grape
QI Fuyun, LV Xinlian, YAN Haiyan, ZHOU Hong. LIU Ya*
(College of Food Science, Shihezi University, Shihezi 832000, China)
tupaoeasaeueifxosaestasooog eosrmaaoeaoosensoe strains were obtained. The results suggested that E. actinomycete was predominantly in roots, much more than that from stems and leaves which occupied 64.29% of total isolated strains. Through physiological, biochemical, and morphological analysis, they were primarily identified as Strepto myces, which occupied 78.57%, and Nocardia.
Key words: wine grape; Endophytic actinomycete; isolation; primary identification
植物内生放线菌作为一类开发潜力巨大的新型微生物资源，能产生许多重要的生理活性物质，如抗生素、植物生长促进剂、植物生长抑制剂以及具有新特性的酶类等。利用工业化对内生放线菌进行发酵不仅可以实现天然活性化合物大规模、低成本、无污染的生产，同时不受环境的影响，而且可以突破植物资源遗乏、再生周期长等限制。世界上大约有300000种植物，在如此众多种类的植物当中人们仅仅研究了几百种植物的内生菌。在已经研究的植物当中，几乎每种植物都具有丰富的内生菌存在，很多植物的内生菌是新属或者新种，因此还有巨大的内生菌资源宝库等待开发利用。目前植物内生菌的开发和研究主要集中在热带、亚热带和温带地区，大多数植物的内生菌还没有得到开发。新疆地处祖国西部边睡，多样化的气候和环境条件势必造成新疆葡帮内生放线菌资源的特异性和多样性，因此，有望在新疆酿酒葡萄中筛选出新属或新种的放线菌。
1材料与方法 1.1材料
酿酒葡萄：新疆石河子市新强天珠葡萄酒厂提供，品种为赤霞珠。
无水乙醇、次氯酸钠、盐酸、氧氧化钠均为分析纯。 1.2 培养基
高氏一号培养基：用于内生放线菌的分离、纯化和保藏。明胶液化试验培养基，牛奶激固与陈化试验培养基，
淀粉水解测定培养基，纤维素酶活测定培养液，硫化氢产生测定培养基，碳源利用试验培养基：用于放线菌的鉴定。
收稿日期：2012-03-08
基金项目：新覆石河子大学高层次人才启动项目(RCZX20101)
1.3主要仪器
超净工作台，恒温培养箱，光学显微镜，高压灭菌锅等。
1.4方法 1.4.1取样
2011年4月至2011年9月，分春、夏、秋三个季节，在新疆天珠葡萄酒厂试验田分别采集葡覆的根、茎、叶和果实作为分离材料。将所采样品分别装入无菌瓶内，即刻运往
实验室进行后续表面消毒及分离纯化操作。 1.4.2样品的表面消毒
将采集到的上述样品在自来水下用流动水洗净，滤纸吸干表面。然后在超净工作台内，将分离材料先用95%vol的乙醇浸泡1.5min，无菌水冲洗，吸水后用10%的次氟酸钠浸泡3min，用无菌水冲洗3遍，将最后一遍冲洗的无菌水用移液枪取0.5mL移入高氏-号培养基上，作为表面消毒的对照。用无菌刀片将表面消毒后的样品切成1cm的小段，贴于培养
基表面，每个样品做2个培养血做重复，28℃避光培养。 1.4.3内生放线菌的分高纯化
取切口处新长出的菌丝，及时转移至新鲜的高氏1号培养基上，待菌落出现后，根据菌落的形态、颜色的差异以及长出时间的不同，分别挑取不同的菌落转接于新的培养
基上，重复划线分离操作，直至得到纯菌落。 1.4.4葡萄内生放线菌的初步鉴定
形态鉴定：在高氏--号固体培养基上采用平皿插片法培养，28℃培养14d，肉眼观察气丝、基丝和色素颜色，每2d、 5d、7d、14d取下插片，置载玻片上，在光学显微镜下观察内
作者简介：祁付云（1987-），女，河南人，在读硕士研究生，研究方向为农产品加工与览减；刘姬*，副教投，通讯作者。