JJF
山西省地方计量技术规范
JJF（晋）59—2021
实时荧光定量聚合酶链反应分析仪
校准规范
Calibration Specification of Real-Time Fluorescent Quantitative Polymerase Chain Reaction Analyzer
2021-09-15发布
2021-12-15实施
山西省市场监督管理局 发布 JJF（晋）59—2021
实时荧光定量聚合酶链反应
JJF (晋） 59-2021
分析仪校准规范
Calibration Specification of Real-Time Fluorescent Quantitative Polymerase Chain
Reaction Analyzer
归口单位：山西省市场监督管理局
主要起草单位：大同市综合检验检测中心
参加起草单位：北京林电伟业电子技术有限公司
本规范技术条文由起草单位负责解释 JJF（晋）59-2021
本规范主要起草人：
管立江（大同市综合检验检测中心）
任小虎（大同市综合检验检测中心）
宋亚琳（大同市综合检验检测中心）参加起草人：
王芬（大同市综合检验检测中心）
姚文军（大同市综合检验检测中心）
薛诚（北京林电伟业电子技术有限公司）
闫闻（大同市综合检验检测中心） JJF（晋）59-2021
目录
引 言
1. 范围. 2. 引用文件. 3. 术语. 4概述.
3
5 计量特性，
4
6校准条件
.4
7校准项目和校准方法
....5
8 校准结果表达
9 复校时间间隔..
11
附录A荧光定量PCR仪校准原始记录参考格式
.13
附录B荧光定量PCR仪校准证书内页参考格式.
.16
附录C温度偏差和阈值循环数示值误差测量结果的不确定度评定示例...7 JJF（晋）59-2021
引言
本规范依据JJF1001-2011《通用计量术语及定义》、JJF1071-2010 《国家计量校准规范编写规则》起草，其中测量不确定度的评定按照JJF1059.1-2012 《测量不确定度评定与表示》进行。
本规范采用了JJF1527-2015 5《聚合酶链反应分析仪校准规范》、 YY/T1173-2010《聚合酶链反应分析仪》相关术语定义和技术内容。
本规范为首次制定
II JJF（晋）59-2021
实时荧光定量聚合酶链反应分析仪校准规范
1.范围
本规范适用于实时荧光定量聚合酶链反应分析仪的校准。
2.引用文件
YY/T1173-2010《聚合酶链反应分析仪》 JJF1527-2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》 JJF1101-2019《环境试验设备温度、湿度参数校准规范》 凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；不注日期的引用文
件，其最新版（包括所有的修改版）适用于本规范。 3.术语 3.1聚合酶链反应 3.2聚合酶链反应是一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的方法，由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成。[YY/T1173-2010，术语和定义3.1] 3.3聚合酶链反应分析仪 3.4基于聚合酶链反应（PCR）技术原理，模拟DNA或者RNA的复制过程，在模板、引物、聚合酶等存在的条件下，特异扩增已知序列，对其进行检测分析的仪器设备。[YY/T1173-2010术语和定义3.2] 3.5实时荧光定量聚合酶链反应分析仪
可以实现DNA或者RNA的扩增，并根据PCR过程中荧光染料释放的荧光强度的变化对扩增产物量进行定量分析的仪器设备。 3.6温度偏差
在温度参数校准循环程序中，实时荧光定量PCR分析仪均热块设定温度与所有采样测量孔温度平均值之差。 3.7温度均匀度
在温度参数校准循环程序中，实时荧光定量PCR分析仪均热块所有采样测量孔温度平均值的最大值与最小值之差。 3.8温度最大过冲量
在温度参数校准循环程序中，荧光定量PCR仪均热块温度升高或降低至设定值过程中，所有采样测量孔温度超出设定值的最大幅度
1 JJF（晋）59-2021
3.9平均升温速率
在温度参数校准循环程序中，实时荧光定量PCR仪均热块升温过程中，所有采样测量孔单位时间上升的平均温度值。[YY/T1173-2010术语和定义3.4] 3.10平均降温速率
在温度参数校准循环程序中，实时荧光定量PCR仪均热块降温过程中，所
有采样测量孔单位时间下降的平均温度值。[YY/T1173-2010术语和定义3.5] 3.11荧光染料 3.12短波长激发光激发后，能够释放出可见光的试剂。[YY/T1173-2010术语和定义3.12] 3.13荧光强度精密度 3.14均热块测量孔在同一荧光条件下荧光强度重复测量值的一致性。[YY/T 1173-2010术语和定义3.14] 3.15阈值循环数 3.16均热块测量孔内的荧光信号到达指数扩增时经历的循环周期数。主要的计算方式是以扩增过程前3到15个循环的荧光值的10倍标准差为阈值，当荧光值超过阅值时的循环数则为阅值循环数。[YY/T1173-2010术语和定义3.15] 3.17阙值循环数精密度
均热块测量孔在同一荧光条件下阈值循环数重复测量的一致性。 3.13熔解温度
全总DNA双螺旋结构降解一半时的温度称为熔解温度。 3.14熔解曲线
PCR过程中均热块测量孔的荧光强度（纵坐标）与温度（横坐标）形成的曲线。 3.15熔解温度漂移
实时荧光定量PCR仪校准时，根据熔解曲线计算的熔解温度值与光学模拟器熔解温度设定值之差。 3.16峰值强度
熔解曲线上熔解温度对应的荧光强度。
3.17通道峰值强度一致性
熔解曲线上，所有采样测量孔峰值强度的变化趋势。
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