JJF
中华人民共和国国家计量技术规范
JJF1527—2015
聚合酶链反应分析仪校准规范
Calibration Specification for Polymerase Chain Reaction Analyzers
2015-09-15实施
2015-06-15发布
有 国家质量监督检验检疫总局发布 JJF1527—2015
聚合酶链反应分析仪校准规范
JJF1527-2015
Calibration Specification
for Polymerase Chain Reaction Analyzers
归口单位：全国生物计量技术委员会主要起草单位：中国计量科学研究院参加起草单位：上海市计量测试技术研究院
广东省计量科学研究院天津市计量监督检测科学研究院
本规范委托全国生物计量技术委员会负责解释 JJF1527—2015
&
本规范主要起草人：
高运华（中国计量科学研究院）参加起草人：
张丽萍（上海市计量测试技术研究院）尹 强（广东省计量科学研究院）田昀（天津市计量监督检测科学研究院）保志娟（广东省计量科学研究院）吴建英 （上海市计量测试技术研究院） JJF1527-2015
目 髪录
引言 1 范围· 2 引用文件 3术语... 3.1聚合酶链反应· 3.2 聚合酶链反应分析仪· 4 概述.. 5 计量特性· 6 校准条件： 6.1# 校准设备及标准物质.
(I) (1) (1) (1) (1) (1) (1) (1) (2) (2) (2) (2) (2) (4) (5) (6) (6) (7) (9) (10) (12) (14) (15)
校准项目和校准方法
72
7. 1 校准条件： 7. 2 温度示值误差、温度均匀性校准 7.3升降温速率校准 7. 4 定量PCR仪样本示值误差、样本线性的校准 8 校准结果表达·.·
复校时间间隔附录A 标准物质的准备及配制附录B PCR反应体系的配制附录C 温度示值误差校准结果的不确定度评定模型附录D 样本示值误差结果的不确定度评定模型附录E 校准原始记录参考格式附录F 校准证书（内页）参考格式
9
·
.. JJF1527—2015
引言
本规范的编制基于聚合酶链反应分析仪主要技术参数实验测试，参考了JJF1030- 2010《恒温槽校准规范》、SN/T2102.1—2008/ISO22174：2005《食源性病原体PCR 检测技术规范第1部分：通用要求及定义》、SN/T2102.2—2008/ISO20836：2005 《食源性病原体PCR检测技术规范第2部分：PCR性能试验要求》、YY/T1173- 2010《聚合酶链反应分析仪》等文件
本规范为首次发布。
IⅡ JJF15272015
聚合酶链反应分析仪校准规范
1范围
本规范适用于模块加热的聚合酶链反应（PCR）分析仪计量性能的校准，对于其他类型的PCR仪，可参照本规范执行。
2引用文件
本规范引用了下列文件： GB/T6682—2008分析实验室用水国家标准 YY/T1173一2010聚合酶链反应分析仪凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；凡是不注日期的引用文
件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本规范。 3术语 3.1聚合酶链反应polymerasechainreaction，PCR［YY/T1173--20103.1]
一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的方法，由变性一退火一延伸三个基本反应步骤构成。 3.2聚合酶链反应分析仪polymerasechainreactionanalyzer[YY/T1173—20103.2]
基于PCR（聚合酶链反应）技术原理，模拟DNA或RNA的复制过程，在模板、 引物、聚合酶等存在的条件下，特异扩增已知序列，对其进行检测分析的仪器设备。 4概述
聚合酶链反应分析仪是基于PCR技术原理，模拟DNA或RNA的复制过程，在模板、引物、聚合酶等存在的条件下，特异扩增已知序列，对其进行检测分析的仪器设备，包括定性PCR仪和定量PCR仪两类。定性PCR通常由样品载台、热循环部件、 控制部件和电源部件等部分组成。定量PCR仪主要由样品载台、热循环部件、控制部件、光学检测部件、电源部件、计算机及应用软件等部分组成。 5计量特性
计量特性见表1。
表1聚合酶链反应分析仪计量特性
项目温度示值误差温度均匀度平均升温速率
定型PCR仪
定量PCR仪
+ + +
+ + +
1 JJF1527—2015
表1（续）定型PCR仪
定量PCR仪
项目平均降温速率样本示值误差样本线性
+
+ + +
注：十为校准项目；一为非校准项目。
6 校准条件
仪器使用允许的环境条件，测量过程中应测量和记录环境的温度、相对湿度。
6.1校准设备及标准物质 6.1.1 温度校准装置
由若千个 （通常为15个）精密温度传感器、数据采集分析模块组成，测温范围 (0~120 C 温度校准装置测量不确定度且需要通过计量检定。 6.1.2 标准物质
校准时 小应采用国内外有证标准物质 包括： 质粒DNA标准物质、 核糖核酸标准物质，其特性 主量值（拷贝数10°copig/L，相对扩展不确定度5%）。 6.1.3 电子 天平
精度≤0. 01mg, 直需要通过计量检定 6.1.4 移液器
规格： ul 10μL、100μL、200、1000L，且需要通过计量检定校准前按照附录A配制校准时使用的溶液。 校准项目和校准方法校准条件
7
7.1
校准前需将PCR仪开机预热30min 7.2温度示值误差、温度均性校准 7.2.1将PCR仪及温度校准装置各部件连接完好，在温度传感器表面上涂抹适量的导热油，按图1所示将温度传感器置于PCR仪（96孔）加热模块设定孔中，其他型号的 PCR仪可参照图1进行测试。
2 JJF1527—2015
11 12
0
000000000 000 000000000000 00060006000 000000000000 000600090060 000000000000 000000000000
C
D
P
G
000000000009
图1温度传感器布点示意图
7.2.2参照送校单位提供的PCR仪说明书设定温度控制程序，如表2所示，不能设定 30℃为温控程序起点的PCR仪，温控程序参照表2进行设定。
表2PCR仪温度控制程序标准程序表
设定温度点 30 ℃ 95 ℃ 30℃ 90 ℃ 50 ℃ 70 ℃ 60 °℃ 30 ℃
步骤 1 2 3 4 5 6 7 8
设定温度持续时间
1 min 3min 2 min 3min 3min 3min 3 min 1 min
7.2.3 启动温度校准装置，记录整个数据采集过程并保存。 7.2. 4 温度示值误差校准结果按公式（1）和公式（2）计算：
ATa=T,-T。
(1) (2)
1ST
T,
0
式中： △Ta - 温控装置工作区域内温度示值误差，℃； T。- 温控装置工作区域内设定温度值，℃； T。所有测温传感器测量值的平均值，℃； T。第i个温度传感器测定值，℃。
7.2. 5 温度均匀度校准结果按公式（3）计算：
(3) 3
ATu=Tmax-Tmin