JJF
贵州省地方计量技术规范
JJF（黔）60-2021
荧光定量聚合酶链反应分析仪校准规范 Calibration Specification of Fluorescent Quantitative Polymerase
Chain Reaction Analyzer
XXXX-XX-XX发布
XXXX-XX-XX实施
贵州省市场蓝督管理局 J发布 JJF（黔）XX—2021
荧光定量聚合酶链反应
JJF(黔)60—2021
分析仪校准规范
Calibration Specification of Fluorescent
Quantitative Polymerase Chain Reaction Analyzer
归口单位：贵州省市场监督管理局
主要起草单位：贵州省计量测试院
参加起草单位：贵阳市第一人民医院
北京林电伟业电子技术有限公司
本规范委托贵州省计量测试院负责解释 JJF（黔）XX—2021
本规范主要起草人：
周选超（贵州省计量测试院）赵才贤（贵州省计量测试院）谢小艳（贵州省计量测试院）
参加起草人：
张磊 （贵州省计量测试院）韩成 （贵州省计量测试院）黎 洪（贵州省计量测试院）王博（贵阳市第一人民医院）李征 （北京林电伟业电子技术有限公司） JJF（黔）XX—2021
目 髪录
引言
(I) (1) (1) (1) (2) (3) (3) (3) (4) (4) (4) (4) (10) (10) (10) (11) (12) (15) (16)
范围. 2 引用文件. 3 术语和定义， 4 概述 5 计量特性. 6 校准条件. 6. 1 环境条件 6.2 测量标准及其他设备 7 校准项目和校准方法， 7. 1 校准项目 7.2 校准方法 8 校准结果表达与处理. 8. 1 校准记录 8.2 校准结果的处理 9 复校时间间隔. 附录A 校准记录格式附录B 校准证书内页格式附录C 温度示值误差和G值示值误差的测量不确定度评定示例：
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引言
本规范依据JJF1071-2010《国家计量校准规范编写规则》和JJF1001-2011 《通用计量术语及定义》、JJF1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》编制。 其计量特性和校准方法参照了JJF1527-2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》 YY/T1173-2010《聚合酶链反应分析仪》、SN/T2102.2-2008/IS0/TS20836:2005 《食源性病原体PCR检测技术规范.第2部分：PCR仪性能试验要求》
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荧光定量聚合酶链反应分析仪校准规范
1范围
本规范适用于荧光定量聚合酶链反应分析仪的校准。
2 引用文件
本规范引用了下列文件： JJF1527-2015聚合酶链反应分析仪校准规范 YY/T1173-2010聚合酶链反应分析仪 SN/T2102.2-2008/IS0/TS20836:2005食源性病原体PCR检测技术规范
第2部分：PCR仪性能试验要求
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本规范。
3术语
3.1聚合酶链反应polymerasechainreaction，PCR
一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的方法，由变性一退火一
延伸三个基本反应步骤构成。 3.2温度最大过冲量temperaturemaximumshoot
仪器均热快温度升高或降低至设定值过程中，所有采样孔温度超出设定温度值的最大幅度。 3.3荧光染料fluorochrome
由短波长激发光激发，释放出可见光的试剂。 注：常见的荧光染料有FAM、HEX、TexasRed、VIC、Cy3、ROX等。
3.4荧光强度检测精密度precisionoffluorescenceintensity
对多个检测孔在同一荧光条件下重复荧光强度测量，其测量值的一致性。 3.5阈值循环数C(Cp）cyclethresholdcycle，crossingpoint
实时监测扩增过程中，反应管内的荧光信号到达指数扩增时经历的循环周期数。主要的计算方式是以扩增过程前3～15个循环的荧光值的10倍标准差为阈值，当荧光值超过阈值时的循环数则为值循环数（C），简称C值。
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3.6C值精密度precisionofthresholdcycle
对多个测量孔在同一荧光条件下重复C值测量，其测量值的一致性。 3.7熔解温度melttemperature
总的DNA双螺旋结构降解一半时的温度，简称Tm值，不同序列的DNA，Tm值不同。 3.8熔解温度漂移melt temperaturebias
同一熔解温度在不同通道发生漂移形成多峰的现象，熔解温度值与光学标准器熔解温度设定值之差。 3.9熔解曲线meltcurve
PCR扩增反应过程中，均热快采样孔的荧光强度与温度形成的曲线。
3.10峰值高度peakheights
熔解曲线上扩增产物的熔解温度对应特征峰的高度。 3.11通道峰值高度一致性channelpeakheightconsistency
不同采样孔在同一熔解温度对应峰值高度的一致性。
3.12线性灵敏系数linearsensitivityfactor
表征熔解曲线线性变化灵敏程度具体化参数。
4概述
荧光定量聚合酶链反应分析仪（fluorescentquantitativepolymerase chainreactionanalyzer，以下简称荧光定量PCR仪）为在PCR反应体系中加入荧光基因，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的仪器。荧光定量PCR分析仪主要通过仪器内部热循系统的升降温变化，使得脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid，DNA）或核糖核酸（RibonucleicAcid，RNA）片段得以复制扩增，仪器光学系统采集伴随DNA或 RNA扩增产生的荧光信号，并对荧光信号进行分析转化、数学运算后，得到扩增和熔解曲线。
通常荧光定量PCR仪由温度控制系统、光学系统和控制系统组成，常见的荧光定量PCR仪有32孔、48孔、96孔等，其中96孔使用最广泛。荧光定量PCR 仪检测原理图见图1。
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