JJF
中华人民共和国国家计量技术规范
JJF1527—2015
聚合酶链反应分析仪校准规范
Calibration Specification for Polymerase Chain Reaction Analyzers
2015-09-15实施
2015-06-15发布
国家质量监督检验检疫总局发布 JJF1527—2015
聚合酶链反应分析仪校准规范
JJF 1527—2015
Calibration Specification
for Polymerase Chain Reaction Analyzers
归口单位：全国生物计量技术委员会
主要起草单位：中国计量科学研究院
参加起草单位：上海市计量测试技术研究院
广东省计量科学研究院天津市计量监督检测科学研究院
本规范委托全国生物计量技术委员会负责解释 JJF1527—2015
本规范主要起草人：
高运华 （中国计量科学研究院）参加起草人：
张丽萍（上海市计量测试技术研究院）尹强（广东省计量科学研究院）田昀（天津市计量监督检测科学研究院）保志娟（广东省计量科学研究院）吴建英 （上海市计量测试技术研究院） JJF1527—2015
目
录
引言范围..
(IⅡ) (1) (1) (1) (1) (1) (1) (1) (2) (2) (2) (2) (2) (4) (5) (6) (6) (7) (9) (10) (12) (14) (15)
1
2引用文件. 3术语· 3.1 聚合酶链反应 3.2聚合酶链反应分析仪 N
概述· 5 计量特性 6
校准条件 6.1校准设备及标准物质 7校准项目和校准方法…··· 7. 1 校准条件.. 7. 2 温度示值误差、温度均匀性校准 7.3升降温速率校准· 7. 4 定量PCR仪样本示值误差、样本线性的校准 8
校准结果表达· 9 复校时间间隔· 附录A标准物质的准备及配制附录B PCR反应体系的配制附录 C 温度示值误差校准结果的不确定度评定模型附录D 样本示值误差结果的不确定度评定模型附录E 校准原始记录参考格式附录F 校准证书（内页）参考格式
- JJF1527—2015
引言
本规范的编制基于聚合酶链反应分析仪主要技术参数实验测试，参考了JJF1030 2010《恒温槽校准规范》、SN/T2102.1一2008/ISO22174：2005《食源性病原体PCR 检测技术规范第1部分：通用要求及定义》、SN/T2102.2一2008/ISO20836：2005 《食源性病原体PCR检测技术规范第2部分：PCR性能试验要求》、YY/T1173 2010《聚合酶链反应分析仪》等文件
本规范为首次发布。
Ⅱ JJF1527—2015
聚合酶链反应分析仪校准规范
1范围
本规范适用于模块加热的聚合酶链反应（PCR）分析仪计量性能的校准，对于其他类型的PCR仪，可参照本规范执行。
2引用文件
本规范引用了下列文件： GB/T6682一2008分析实验室用水国家标准 YY/T1173一2010聚合酶链反应分析仪凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；凡是不注日期的引用文
件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本规范。 3术语 3.1聚合酶链反应polymerasechainreaction，PCR［YY/T1173—20103.1]
一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的方法，由变性一退火一延伸三个基本反应步骤构成。 3.2聚合酶链反应分析仪polymerasechainreactionanalyzer［YY/T1173—20103.2]
基于PCR（聚合酶链反应）技术原理，模拟DNA或RNA的复制过程，在模板、 引物、聚合酶等存在的条件下，特异扩增已知序列，对其进行检测分析的仪器设备，
4概述
聚合酶链反应分析仪是基于PCR技术原理，模拟DNA或RNA的复制过程，在模板、引物、聚合酶等存在的条件下，特异扩增已知序列，对其进行检测分析的仪器设备，包括定性PCR仪和定量PCR仪两类。定性PCR通常由样品载台、热循环部件、 控制部件和电源部件等部分组成。定量PCR仪主要由样品载台、热循环部件、控制部件、光学检测部件、电源部件、计算机及应用软件等部分组成。
5计量特性
计量特性见表1。
表1聚合酶链反应分析仪计量特性
项目温度示值误差温度均匀度平均升温速率
定性PCR仪
定量PCR仪
+ + +
+ + +
1 JJF1527—2015
表1(续) 定性PCR仪
定量PCR仪
项目平均降温速率样本示值误差样本线性
+
+ + +
注：十为校准项目；一 为非校准项目。
6 校准条件
仪器使用允许的环境条件，测量过程中应测量和记录环境的温度、相对湿度。
6.1校准设备及标准物质 6.1.1温度校准装置
由若干个（通常为15个）精密温度传感器、数据采集分析模块组成，测温范围（0～120）℃，温度校准装置测量不确定度≤0.1℃，且需要通过计量检定。 6.1.2标准物质
校准时应采用国内外有证标准物质，包括：质粒DNA标准物质、核糖核酸标准物质，其特性量值（拷贝数≥1o”copies/uL，相对扩展不确定度≤5%）。 6.1.3电子天平
精度≤0.01mg，且需要通过计量检定。 6.1.4移液器
规格：2uL、10L、100uL、200uL、1000uL，且需要通过计量检定。 校准前按照附录A配制校准时使用的溶液。
7校准项目和校准方法 7.1校准条件
校准前需将PCR仪开机预热30min。 7.2温度示值误差、温度均匀性校准 7.2.1将PCR仪及温度校准装置各部件连接完好，在温度传感器表面上涂抹适量的导热油，按图1所示将温度传感器置于PCR仪（96孔）加热模块设定孔中，其他型号的 PCR仪可参照图1进行测试。
2 JJF1527—2015
0 11 12
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00000000006 0 00000000006 0000000000 000000000009
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G
图1温度传感器布点示意图
7.2.2 参照送校单位提供的PCR仪说明书设定温度控制程序，如表2所示：不能设定 30℃为温控程序起点的PCR仪，温控程序参照表2进行设定。
表2PCR仪温度控制程序标准程序表
步骤 1 2 3 4 5 6 > 8
设定温度点 30℃ 95℃ 30 ℃ 90℃ 50℃ 70 ℃
设定温度持续时间
1 min 3 min 2 min 3 min 3 min 3 min 3 min 1 min
60 ℃ 30 ℃
7.2.3 启动温度校准装置，记录整个数据采集过程并保存。 7.2.4 温度示值误差校准结果按公式（1）和公式（2）计算：
(1) (2)
△Ta=T-T
1" n i1
T
式中： △Td Ts 温控装置工作区域内设定温度值，℃； T。 一所有测温传感器测量值的平均值，℃；
温控装置工作区域内温度示值误差，℃；
第i个温度传感器测定值，℃。
T; 7.2.5温度均匀度校准结果按公式（3）计算：
(3) 3
△T,=Tmax -Tmir