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高效液相色谱法测定奥沙利铂含量
刘锦辉
(哈药集团生物工程有限公司.黑龙江哈尔滨150025)
科技论坛
摘要：目的：采用高效液相色谱法建立奥沙利铂含量测定方法。方法：十八烷基硅烷键合硅胶色谱往；流动相为磷酸溶液一乙睛(99： 1)；检测波长为210mm；流速为1.0ml/min。结果；本方法准确度试验、践性范图试验、重复性、中间精密度、进样精密度试验均符合方法学试验要求。供试品落液在室温条件下5小时内稳定。结论：该测定方法操作简便、准确度高、精密度高，可作为奥沙利销的含量测定方法，以控制其原料质量
关键词：高效液相色谱法；奥沙利铂；含量测定;方法学；稳定性；准确度；线性范图
奥沙利铂为继顺铂，卡铂之后，由法国SanofiWinthrop公司开发，并于1996年首次在法国上市的第三代铂类抗癌药物，奥沙利铂联合方案2004年被FDA批准为治疗晚期结肠癌的一线方案，对卵巢癌.淋巴瘤，非小细胞肿瘤也有一定的疗效。中国药典2010年版未收录该药。本文建立了奥沙利铂的反相高效激相色谱法(RP-HPLC)含量测定方法，为奥沙利铂的进一步研究提供了可靠的分析方法及理论依据。
1仪器与试药
Agilent1260高效液相色谱仪;DikmaC色谱柱（4.6mm× 250mm5μm）；MS105型精密电子天平（梅特勒）；奥沙利铂对照品（批号：100584-200902，含量为100.0%，中国食品药品检定研究院）奥沙利铂原料药自制）：磷酸、乙睛均为色谱纯，氢氧化钠为分析纯，水为注射用水
2含量测定方法
2.1色谱条件与系统适用性试等
色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：磷酸溶液(取 10%磷酸溶液06ml，加水稀释成1000ml，用氢氧化钠溶液或磷酸调节 PH值至3.0)-乙睛(99:1)，检测波长为210mm;流速为1.0ml/min;柱温 30℃;进样量20μl
2.2测定法
取本品10mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取20μ1注人液相色谱仪，记录色谱图，另取奥沙利对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。
3方法学试验
参照拟定的高效液相色谱法进行含量测定，并对该方法进行方法学研究。
3.1准确度试验
取已知含量的供试品、奥沙利铂对照品，配制80%、100%、120%测试浓度溶液各3份，按加样回收率测定法测定，结果见表1。
结果表明：含量测定平均回收率为100.14%，RSD为077%(n=9),准确度试验符合测定要求。
3.2线性范围试验
储备液的制备：称取奥沙利铂对照品10mg，置50ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，据摇匀.作为储备液。精密量取上述溶液3ml、4ml、5ml、 6ml、7ml，分别置10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，作为线性试验溶液。分别精密量取20μ1,注人液相色谱仪，记录色谱图。以奥沙利舶浓度与相应峰面积计算线性回归方程，y=13308x+102.5，相关系数r=09991。
由以上结果可以看出，奥沙利铂浓度在006mg/ml-0.14mg/ml范围内，浓度与峰面积之间具有良好的线性关系。
3.3重复性试验
取供试品，照含量测定项下方法试验，重复测定6次，计算其平均值。结果表明：按该含量测定方法对奥沙利铂进行含量测定，6次测定的平均含量为标示量的10058%，RSD为071%（n=6)，平行性好，重复性试验符合测定要求，
3.4溶液稳定性试验
取供试品，照含量测定项下方法试验，每隔1小时测定一次，共测定 5次，计算其平均值。结果表明：奥沙利铂平均含量为标示量的10044%， RSD为036%(n=5),供试品溶液在室温条件下5小时内稳定。
表1准确度试验结果
供试品量（mg）加入量（mg）
10.01 corot 10.10 zoror toror 10.08 10.02 rorot 10.05
6.05 6.11 6.04 10.05 9.95 10.12 14.20 14.01 14.05
3.5进样精密度试验
测得量(mg) 1r91 16.02 16.28 20.11 20.31 20.10 24.05 24.11 24.06
平均回收率RSD(%)
加样回收
率(%) T00.31 99.26 100.87 100.20 101.60 99.50 99.30 100.37 99.83
(%)
100.14
0.77
取供试品，照含量测定项下方法试验，精密量取20±1,注人液相色谱仪，连续进样6次。结果表明：奥沙利铂测得峰面积RSD为046%（n=6)，该方法进样精密度良好。
36中间精密度试验
取供试品，照含量测定项下方法试验，变动因素为不同日期，不同人员。计算其平均值以及相对标准偏差RSD，考察该测定含量方法的精密度。结果表明：奥沙利铂平均含量为标示量的100.18%，RSD为041%(n=6)，该测定方法中间精密度良好。
3.7定量限
取32线性范用围试验中对照品储备液，分别进行梯度稀释，制备成模度浓度的对照品溶液，分别进样20μ1直至信噪比S/N=10时浓度进行计算，测得结果该高效液相色谱含量测定方法下奥沙利铂的定量限为 8ng
4样品含量测定
取三批奥沙利铂原料供试品，分别精密称定约10mg，置100ml量瓶中，加水溶解并移释至刻度，摇勾，作为供试品溶液，精密量取20μ1注人液相色谱仪，记录色谱图，另取奥沙利铂对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算。三批供试品含量测定结果分别为99.8%，100.2%，100.3%。拟定本品含量限度为980%~1020%之间，三批供试品含量测定结果均符合规
定
5讨论
建立的高效液相色谱法通过准确度试验、线性范围试验、重复性试验、落激稳定性试验、进样精密度试验、中间精密度试验及定量限等方法学试验，表明我们拟定的高效液相色谱法奥沙利铂含量测定方法具有准确、可靠、灵敏度高等特点，可有效控制奥沙利铂的含量。
参考文献
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4任鹏,孙坚形,沈云五等反相高效液相色谱法测定奥沙利铂的含量仍抗感染病学,2(1)24
作者简介：刘锦辉(1986，3-)，女，黑龙江哈尔滨市，本科，助理工程师