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高效液相色谱法测定大黄中番泻苷A含量
李纯
（哈尔滨圣泰生物制药有限公司，黑龙江哈尔滨150000）
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摘要：建立反相高效液相色谱法测定大黄中番泻苷A的含量。方法：采用奥泰公司Cu色诱柱(220mm×4.6mm，5μm)，四氢呋哺水-醋酸(15：85:1.5)为流动相，检测波长为365nm，流速为1.0ml/min，柱温为30℃。番泻苷A在10~100μg*mL-范图内呈良好的线性关系。番泻苷A平均回收率分别为99.5%。结论：本法简使便、准确，可用于大黄中番泻苷A的含量测定。
关键词：番泻苷A；含量；测定
制成每毫升含10、20、30、40、50、60、70、80、90、100微克的溶液。分
大黄是多种要科大黄属的多年生植物的合称，为萝科植物掌叶
别精密上述溶液吸取10μL，注人液相色谱仪，依照2.1项下的色谱
大黄、唐古特大黄或药用大黄的根茎。中国用大黄于医药有悠久历史，具有泻热通肠、凉血解毒，逐癌通经的功效。大黄常用于实热便
条件测定，记录色谱峰。以峰面积(Y)为纵坐标，对照品进样量(X)为
秘、泻不爽、湿热黄疽、目赤、咽肿、痛肿疗疮、癌血经闭、跌扑损伤
5横坐标，绘制标准曲线。结果表明，番泻苷A在10~100μg*mL-范 <围内呈良好的线性关系。
等。日华子本草》记载：“通宜一切气，调血脉，利关节，泄塑滞、水气，四肢冷热不调，温瘙热痰，利大小便，并敷-切疮痛毒。”大黄
2.6重现性试验
中含有大黄酚-1-葡葡糖试、大黄素-6-葡萄糖武（Emodin--6monoglucoside）、大黄酚（Chrysophanol）、大黄素（Emodin）、大黄酸 8-葡葡糖武（Rhein-8monoglucoside）、大黄素甲醚（Physcion）、芦荟大黄素（Aloe=emodin）、大黄酸（Rhein）、芦荟大黄素-8-葡萄糖（Aloeemodin8monoglucoside）、儿茶精（Cate-chin）、大黄四聚素(Tetrarin)等成份。大黄具有泻下、抗胃及十二指肠溃病、止血、降低总胆固醇、降低甘油三酯、降低低密度脂蛋白、抗感染、利胆、保肝、促进胰液分泌、抑制膜酶活性、抗病原微生物、抗炎、解热、免疫调
称取同一批的番泻苷A样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.62% 结果表明此方法的重现性良好。
2.7准确度试验
取对照品适量，精密称取已知含量的样品9份，置量瓶中，分别精密加人番泻昔A对照品，按项下方法制备成80%100%、120%。取模拟样品照”含量测定”项下方法试验，计算回收率为99.5%，
1RSD为0.66%。
节、抗衰老抗氧化等作用。本文采用高效液相法对大黄中的番泻苷 A的进行了含量测定。
1仪器与试药
1.1仪器：HX-06超声波清洗器(武汉恒信世纪科技有限公司）；赛多利斯PM2.5分析天平MSA2.7S-0CE-DM(广州市深华生物技术有限公司);RU超纯水机（上海同田生物技术有限公司）;UV-8000 双光束大屏幕扫描型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司);PC200-G50恒温水浴(赛歇飞世尔科技（中国)有限公司) LC3100高效减相色谱仪(安徽皖仪科技股份有限公司）；天星进样瓶清洗机TX-500型（北京天星科仪科技有限公司）。
1.2色谱柱：奥泰公司C18色谱柱（220mm×4.6mm，5μm）。 1.3对照品：番泻A
1.4试剂：醋酸钠（山东浩中化工科技有限公司）、四氢呋喃（山东丰仓化工集团有限公司）、甲醇（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）、磷酸二氢铵（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）、冰醋酸（山东浩中化工科技有限公司）、三乙胺（武汉市伟琪博星生物科技有限公司）、乙睛（山东浩中化工科技有限公司）。
1.5试药：大黄 2测定方法确定 2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下1-。流动相：四氢呋
2.8样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定掌叶大黄、唐古特大黄、药用大黄 3种大黄三批样品。
样品名称第一次测定含量
量第二次测定含量第三次测定含量
荤叶大黄唐古特大黄药用大黄
0.4mglg 2.1mg/g 1.1mgg
03mg/g 22mg/g 12.mg/g
0.4 mg/g 22 mg/g 09 mg/s
平均含量 0.4 mg/g 22 mg/g 1.1 mg/g
3讨论
分别考察甲醇-水-冰醋酸(20：80:0.5),乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱[0min(18%A)+24min(22%A)→+26min(26%A)→+30min(32%A)→50min(33.5%A)→55min(38%A),流速为1.0mL/min,甲醇水-磷酸(50：50:0.1),甲醇-水-冰醋酸(40：60：0.5),甲醇水(80:20,含0.1%三乙胺),四氢呋哺-水-醋酸(15：85:1.5)不同比例的流动相，结果以四氢呋嘴-水-醋酸(15：85:1.5)为流动相为流动相，供试品各峰分离效果最好.故选用四氨呋哺一水-醋酸(15： 85：1.5)为流动相为流动相。本实验采用高效液相法效果好、方法简便、快捷、准确、专属性好，可用于大黄中番泻昔A的含量测定。
参考文献
[1]涨村,李丽，肖永庆,林娜,刘春芳，田国芳,陈东东.HPLC法同时测定大黄不同来源药材中2个蕙醒苷类成分的含量[药物分析杂志，
天2010(01)
[2]李建生,刘教霞,王冬,刘柯,梁生旺,孙捷,苏静，李宁,郭晓燕.大黄苷
腩-水-醋酸(15：85：1.5)为流动相，检测波长：365nm，流速：1.0m min"。柱温：30℃。理论板数按番泻苷A峰计算应不得低于2500。
2.2对照品溶液的制备
元联合溶检对血检检塞性脑缺血大鼠微血管基底膜损伤的保护作用[]中国中药杂志,2010(21)，
[3]张村,李丽，肖永庆,林娜,刘春芳，田国芳，陈东东大黄不网饮片中.2
取在60℃减压干燥4小时的番泻昔A对照品适量，精密称定，
个蕙醒苷类成分的比较研究[]、中国中药杂志,2009(22)
加流动相制成每Iml含50μg的溶液，即得。
2.3供试品落液的制备
取本品适量，粉碎，精密称定，加60毫升1%碳酸氢钠溶液超声
[4]何正显,信玉琼,陈明.大黄的化学成分、药理作用及其在临床急症
中的应用[J].中国中医急症,2007(02)
处理0.5小时，放冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量1%碳酸氢[5]李丽，张村，肖永庆,陈东东，田国芳，王云.大黄药材中苯丁酮及二苯
钠溶液分次洗涤容器和残渣，洗液滤人同一量瓶中，加1%碳酸氢钠溶液至刻度，摇匀，即得。
2.4精密度试验
精密称取番泻苷A对照品适量，加流动相使溶解，制成浓度为 50μg*mL-1的供试品溶液。照上述色谱条件，精密吸取10μ,连续进样6次，记录峰面积。结果，RSD=0.61%，表明本方法精密度良好。
2.5对照品的线性考察
精密称取适量番泻苷A对照品，加人流动相溶液使溶解分别配万方数据
乙烯类成分的含量测定[],北京中医药大学学报,2010(10)。