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高效液相色谱法测定地黄中梓醇及毛蕊花糖苷的含量
昊涛
（黑龙江瑞格制药有限公司，黑龙江庆安152400）
摘要：本文采用高校液相测定了地黄中梓醇和毛篇花糖苷的含量，固定相为：安捷伦C18(4.6mmx250mm，5um)，以乙晴-0.15%磷酸为流动相进行梯度洗脱为流动相，检测波长为210nm；毛花糖普在10~200μg*mL-"范围内呈良好的线性关系；梓醇在50~350μg'mL-范图内呈良好的线性关系。毛落花糖苷和样醇的平均回收率分别为99.3%、99.5%，RSD为0.56%(n=6)、0.55%(n=6);此方法简使、准确、重现性好，可用于地黄中毛范花糖等和释醇的含量测定。
关键词：地黄：毛葛花糖苷；梓醇
地黄因其地下块根为黄白色而得名地黄，最早出典于《神农本草经》。地黄含有益母草试(leonuride）、梓醇（catalpol）、都楠子式（melittoside）、焦地黄武（jioglutoside）A，毛蕊花糖（verbascose）、苏氨酸（threonine）、丙氨酸（alanine）、亮氨酸（leucine）、-氨基丁酸（=aminobotyricacid)等成分p-5i。地黄常用于於血虑萎黄，心悸失眠、月经不调、盗汗、遗精、消渴、眩晕耳鸣、须发早白等。《纲目》记载：“填骨髓，长肌肉，生精血，补五脏、内伤不足，通血脉，利耳目，黑须发，男子五劳七伤，女子伤中胞漏，经候不调，胎产百病。“本文采用高校液相测定了地黄中梓醇和毛荐花糖苷的含量。
1仪器与试药
DC-0506A高精度液晶显示低温恒温槽（上海衡平仪器仪表广)：北京格瑞德曼仪器设备有限公司（北京格瑞德仪器设备有限公司)；WaterPro超纯水系统(照生有限公司);P230高效液相色谱仪(大连依利特分析仪器有限公司);UV-5100H型紫外可见分光光度计（上海元析仪器有限公司）。毛蕊花糖苷和梓醇对照品由中国药品生物制品检定所提供。四氢呋哺（福建省福州市汇丰化工有限公司）、三乙胺（广州市江顺化工科技有限公司）、乙睛（嘉兴市盛德化工有限公司）、甲醇（广州市江顺化工科技有限公司）、醋酸钠（嘉兴市盛德化工有限公司）、磷酸二氢钠（东莞市多正化工有限公司）、溴化四丁基铵（嘉兴市盛德化工有限公司）、磷酸（广州市江顺化工科技有限公司)。
2含量测定
2.1色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如色谱柱为安捷伦C18规格为(4.6mm×250mm，5μm)；流动相下
为在0-16分钟内流动相配比从乙-0.15%磷酸=1：99到乙腈-0. 15%磷酸=1:99，在16-30分钟内流动相配比从乙腈-0.15%磷酸 =1:99到乙腈-0.15%磷酸=2080，在30-50分钟内流动相配比从乙腈-0.15%磷酸=20:80到乙睛-0.15%磷酸=35：75；检测波长为 210nm；流速1.0mL·min"；柱温：30℃。理论板数按梓醇峰计算应不得低于2000。
2.2供试品溶液的制备。取地黄适量，粉碎成粗粉，精密称取，置圆底烧瓶中，加乙睛和0.15%磷酸混合液（比例为1：99)100毫升，回流提取1小时，放置至室温，过滤，将滤液水浴蒸干，残渣加10毫升乙晴和0.15%磷酸混合液（比例为1：99）溶解，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。
2.3对照品溶液的制备。分别精密称取梓醇和毛蕊花糖苷对照 10mg、5mg，置100mL容量瓶中，用乙和0.15%磷酸混合液（比例为1:99)溶解并稀释至刻度，摇勾，即得。
2.4标准曲线的制备。制备浓度为10μgmL"、20μg*mL*、
群品编号
4
表1
毛蒸花糖行合量
2.3mg/k 2.1mg/t 2.2mg/t 2.1mg/k 2.3mg/k
样醇含量 0.51 m4/k 0.52m4/k 0.51 mg/t 0.53 m/z 0.51.m4/k
对照品峰面积积分值的RSD分别为0.56%和0.59%。结果表明，本实验精密度良好。
2.6重现性试验。分别称取同批地黄样品6份，分别依照2.3项下供试品制备方法制备供试品，按质量标准含量测定项下方法测定含量.并计算样品的RSD值，RSD值为0.55%，0.51%.结果表明.此含量测定方法的重现性良好。
2.7稳定性试验。依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0.2.4，8h进样测定，供试品毛蕊花糖苷和梓醇峰面积的 RSD分别为0.55%和0.61%。结果表明毛幕花糖苷和梓醇至少在8h 内稳定。
2.8回收率试验。采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，分精密添加一定量的毛荐花糖苷和梓醇对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率。6次测定的平均回收率分别为99.3%和99.5%，RSD分别为0.56%和0.55%。
2.9样品含量测定。依照上述含量测定方法，测定地黄五批样品中毛蕊花糖苷和梓醇的含量。（表1）
3讨论
分别考察乙腈-0.05%磷酸(14:86),乙睛(A)水(B)为流动相梯度洗脱[0min(18%A)→24min(22%A)→26min(26%A)→30min(32% A)→50min(33.5%A)→55min(38%A)流速为1.0mL/min,以乙睛0. 15%磷酸为流动相进行梯度洗脱，甲醇-水(80:20,含0.1%三乙胺) 甲醇-0.01mol/L磷酸二氢钠缓冲液（每1000mL的缓冲液含0.5 mol/L化四丁基铵45mL，用磷酸调节pH至3.5)(体积比40：60) 不同比例的流动相，结果以以乙睛-0.15%磷酸为流动相进行梯度洗脱为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用以乙睛-0.15%磷酸为流动相进行梯度洗脱为流动相。地黄中毛蕊花糖苷和梓醇的含
量不少于2.0mg/g，0.50mg/g
参考文献
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[2]杨菁,石海燕,李莹,王洪新,金英,刘春娜,地黄寡糖对脑缺血再灌注所致痴采大鼠学习记忆功能的影响[]中国药理学与毒理学杂志，
40 μg*mL-,80 μ g*mL-′,120 μg*mL-*,160 μg*mL-′,200μ g*mL- 的
2008(3)
毛蕊花糖苷对照品溶液，制备浓度为50μg*mL"、100μg*mL-、
[3]李更生,王慧森,刘明,卢鸥伟,石任兵.地黄中环烯醚荫苷类化学成
150 μ g*ml*,200 μ g*mL*,250 μ g *mL-′,300 μ g*mL-*,350 μg*mL--
分的研究[],中医研究，2008(5),
的梓醇对照品溶液。分别按毛蕊花糖苷、梓醇的测定参数继续测定。
[4]张汝学,贾正平,李茂星,王娟,邱建国.地黄寡糖对2型糖尿病大鼠外周血像、激索水平和胰岛病理学的影响[]西北国防医学杂志，
以吸光度为横坐标，浓度为纵垒标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，毛藻花糖苷在10~200μg*mL"范围内呈良好的线性关
2009(3)
系；梓醇在50~350*mL-范围内呈良好的线性关系，
2.5精密度试验。依照2.3项下制备对照品溶液，分别精密吸取毛蕊花糖苷和梓醇对照品溶液重复测定6次，测定峰面积积分值，
万方数据
[5]刘卫欣,卢克伟,杜海涛,吴祖泽,地黄及其活性成分药理作用研究进展[]国际药学研究杂志,2009(4)