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2011 No.10 Serial No.235
China Brewing
微波结合盐酸羟铵诱变选育高产醋酸菌
贺小贤，赵会芳，孙福林，刘苗苗
（陕西科技大学生命科学与工程学院，陕西西安710021）
Research Report
摘要：以酮酸菌AFA-01为出发菌株，首先利用微波诱变菌株，之后再采用盐酸胫铵点式平板法处理，获得产酸性能较好的突变株 AFA-WH3，其产酸量为7.35g/100mL，较出发菌株提高了43.55%，乙醇脱氢酶（ADHD活力达2786U/mL，较出发菌株提高94.83%。该菌株经8次传代，产酸稳定，可进行下一步的研究。
关键调：酷酸菌：微波诱变：盐酸羟铵诱变；乙醇脱氢酶
中图分类号：TS201.3
文献标识码：A
文章编号：0254-5071(2011)100074-03
Breeding of high yield acetic acid bacteria by bydroxylamine bydrochloride combined with microwave mutagenesis
HE Xiaoxian, ZHAO Huifang, SUN Fulin, LIU Miaomiao
(College of Life Science and Engineering, Shaanxi University ofScience and Technology, Xi'an 71002, China)
Abstract: A high yield of acetic acid mutant strain Acetobacter pasteurianus AFA-WH3 was bred from its parent strain AFA-01 by hydroxylamine hy-drochloride combining with microwave mutagenesis. The results showed that the acetic acid production was increased by 43.55%, up to a concentra tion of 7.35 g/100ml. Moreover, alcobol dehydrogenase(ADH) activities reached 2786U/ml, increased by 94.83%. The strain remained the character-
istics of high acetic acid production affer 8 times passage , and the mutant strain could be used as experiment strain for further studies. Key words: acetic acid bacteria; microwave mutagenesis; hydroxylamine hydrochloride mutagenesis; ADH
高酸度醋具有独特的杀菌、保鲜等功能，正被广泛应用到食品、医药保健及日常生活等诸多领域。适合发酵高酸度醋的优良醋酸菌应具备高效氧化酒精的酶系，以及耐高酸和产高酸的性能，因此选育和别化产高酸、耐高酸的醋酸菌意义深远。
野生型醋酸菌产酸量一般都很低，国内外学者利用物理化学诱变因子及基因工程等方法进行醋酸菌改良，取得了较好的效果。微波作为一种超高频电磁波，已被用于农作物、禽兽和工业微生物等多个领域的诱变育种。微波诱变克服了紫外诱变易产生光修复的现象且具有操作简单、安全、辐射损伤轻等优点，具有广泛的应用前景。近几年，微波诱变用于微生物诱变育种研究的报道越来越多，而用于诱变醋酸菌的研究尚未见报道。盐酸经铵对细菌具有特异的诱变效应，能专一地诱发G：C→A：T的转换。同时，羟铵还能和细胞中的其他物质反应产生过氧化氢，而
收稿日期：2011-07-01
基金项目：陕西省教育厅自然基金项目(11JK0638)
过氧化氢又具有非专一性的诱变作用。研究发现，相对于其他化学诱变剂，盐酸羟铵对醋酸菌的诱变效果最好。因此本研究通过微波与盐酸羟铵复合诱变对AFA-01醋酸菌株进行遗传改良，以期获得产高酸的优良醋酸菌。
1材料和方法 1.1出发菌株
醋酸菌AFA-01,本研究室保藏。 1.2培养基
1.2.1种子培养基
酵母膏1g，葡葡糖1g，KH,PO,0.5g，6°Brix麦芽汁定容至100mL，pH值为5.5，121℃灭菌30min，冷却至50℃，加入 3mL无水乙醇。
1.2.2斜面保裁培养基
酵母膏1g，葡萄糖1g，CaCO,0.5g，琼脂1.8g，蒸馏水定容至100mL，pH值为5.0~6.0，121℃灭菌30min，冷却至
作者简介：贺小贤（1962-)，女，陕西户县人，教授，主要从事微生物发酵工程研究工作。
佳模型可靠。 3结论
试验采用超声波辅助提取银查酸，并用响应面设计优化法进行优化，得到最佳提取条件为：超声功率为250W，液料比为43:1(mL:g)，超声时间为44min，银否酸得率最大值为1.45%。与索氏提取银杏酸（液料比为150:1(mL:g）、提取时间3h、温度90℃，提取率1.18%)相比，此方法简单，时间短，提取充分，适于银杏茶中银杏酸的提取。
参考文献：
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