JJF
山东省地方计量技术规范
JJF（鲁）138—2022
实时荧光定量PCR仪校准规范
Calibration Specification for Real-Time Fluorescent Quantitative Polymerase
Chain Reaction Analyzer
2022—06—24发布
2022—07—01实施
山东省市场监督管理局 发布 JJF（鲁）138—2022
实时荧光定量PCR仪
JJF(鲁) 138.
校准规范
2022
Calibration Specification forReal-TimeFluorescent QuantitativePolymerase Chain ReactionAnalyzer
归口单位：山东省温湿度计量技术委员会
主要起草单位：潍坊市计量测试所
山东省计量科学研究院
参加起草单位：青岛市计量技术研究院
北京林电伟业电子技术有限有限公司
本规范委托山东省温湿度计量技术委员会负责解释 JJF（鲁） 1382022
本规范主要起草人：
刘文敏（潍坊市计量测试所）
尹遵义（山东省计量科学研究院）
张娟 (潍坊市计量测试所）参加起草人：张华文（山东省计量科学研究院）孙爽 (潍坊市计量测试所）李莉 (青岛市计量技术研究院）朱娟 （北京林电伟业电子技术有限公司） JJF（鲁） 138—2022
目 录
引言
(II) (1) (1) (1) (3) (4) (5) (5) (5) (6) (6) (6) (13) (13) (14) (18) (19) (22)
范围. 2 引用文件
1
术语和计量单位 4 概述.
3
计量特性 6 校准条件 6.1 环境条件. 6.2 测量标准及其他设备 7 校准项目和校准方法 7.1 校准项目， 7.2 校准方法. 8 校准结果表达 9 复校时间间隔附录A 校准原始记录格式. 附录B 校准证书内页格式，附录 C 温度示值误差测量不确定度评定示例. 附录D 阈值循环数示值误差测量不确定度评定示例
5 JJF（鲁） 1382022
引言
JJF1071《国家计量校准规范编写规则》、JJF1001《通用计量术语及定义》、JJF1059 《测量不确定度评定与表示》共同构成支撑校准规范制修订工作的基础性系列规范
校准方法及计量特性等主要参考了JJF1527-2015 《聚合酶链反应分析仪校准规范》、 YY/T1173-2010《聚合酶链反应分析仪》编制。
本规范为首次发布
II JJF（鲁）138—2022
实时荧光定量PCR仪校准规范
1范围
本规范适用于实时荧光定量PCR仪的校准，其他类型PCR仪相同原理部分可参照本
规范执行。 2引用文件
本规范引用了下列文件： JF1527-2015聚合酶链反应分析仪校准规范 YY/T1173-2010聚合酶链反应分析仪凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；凡是不注日期的引用文件，
其最新版本（包括所有的修改单）适用于本规范。 3术语
YY/T1173-2010中界定的及以下术语和定义适用于本规范
3.1PCR（聚合酶链反应）polymerasechain reaction
PCR即聚合酶链反应是一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的方法，由变性一退火一延伸三个基本反应步骤构成。[YY/T1173-2010,术语和定义3.1] 3.2PCR仪（聚合酶链反应分析仪）polymerasechainreactionanalyzer,PCRanalyzer
基于PCR技术原理，模拟DNA或者RNA的复制过程，在模板、引物、聚合酶等存在的条件下，特异扩增已知序列，对其进行检测分析的仪器设备。[YY/T1173-2010，术语和定义3.2]
3.3实时荧光定量PCR仪real-timefluorescentquantitativePCRanalyzer，RFQ-PCR analyzer
可以实现DNA或者RNA的扩增，根据PCR过程中荧光染料释放的荧光强度的变化对扩增产物量进行定量分析，并通过对荧光的采集和分析以达到对原始模板量进行分析的仪器设备。 3.4温度示值误差temperatureindicationerro1
温控装置（如均热块）的设定值与所有采样孔实际温度平均值之差。单位：摄氏度，符号：℃。 JJF（鲁）138—2022
3.5温度均匀度temperatureuniformity
均热块所有采样测量孔温度在某一瞬时任意两点温度之间的最大差值。单位：摄氏度，符号：℃。 3.6温度波动度temperaturevolatility
在被检设备稳定的状态下，在规定的时间间隔内，均热块所有采样点中任意一点温度随时间的变化量。单位：摄氏度，符号：℃。 3.7温度最大过冲量temperaturemaximumovershoot
均热块温度升高或降低至设定值过程中，所有采样测量孔温度超出（高于或低于）设定值的最大幅度。单位：摄氏度，符号：℃。 3.8平均升温速率meanheatingrate
升温过程中模块单位时间内上升的平均温度值。单位：摄氏度每秒，符号：℃/s。
3.9平均降温速率mean coolingrate
降温过程中模块单位时间内下降的平均温度值。单位：摄氏度每秒，符号：℃/s。 3.10荧光染料fluorochrome
由短波长激发光激发，释放出可见光的试剂。[YY/T1173-2010,术语和定义3.12]。 3.11荧光强度精密度precisionoffluorescenceintensity
对多个检测孔在同一荧光条件下重复荧光强度检测，其检测值的一致性。 3.12阅值循环数Ct（Cp）cyclethreshol，crossingpoint
均热块测量孔内的荧光信号到达指数扩增时经历的循环周期数。主要的计算方式是以
扩增过程前3～15个循环的荧光值的10倍标准差为阈值，当荧光值超过阈值时的循环数则为阈值循环数(Ct)。[YY/T1173-2010,术语和定义3.15] 3.13阅值循环数精密度precisionofthresholdcycle
均热块不同测量孔在同一荧光条件下，阈值循环数重复测量的一致性，
3.14熔解温度melttemperature，T
全总DNA双螺旋结构降解一半时的温度称为熔解温度。单位：摄氏度，符号：℃。
3.15熔解曲线meltcurve
PCR过程中均热块测量孔的荧光强度（纵坐标）与温度（横坐标）形成的曲线，
3.16熔解温度漂移melttemperaturebias
根据熔解曲线计算的熔解温度值与光学标准器熔解温度设定值之差。单位：摄氏度，
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