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制效果与转染效率密切相关。内源性表达sRNA是将能转录反向重复序列siRNA的DNA模板，克隆至RNA案合酶Ⅲ（PolⅢ）转录单位中，以质粒DNA为载体转染哺乳动物细胞，在细胞中持续转录合成RNA，这种RNA通过内部互补折叠形成发夹样结构，在细胞内酶的作用下迅速形成siRNA，可在更长的时间内抑制靶基因的表达[4]。本研究利用Psilencer2.1 质粒成功构建了针对hTERT基因的siRNA的表达载体，经 DNA测序证实插人的DNA序列正确。该表达质粒转染后的细胞表现出C418抗性，并能富集增殖和传代，表明转染质粒所携带的基因能长时间持续表达。
端粒是真核生物线形染色体末端高度保守的重复核甘酸序列和蛋白质的复合体，对于染色体的稳定及基因组的完整十分重要。端粒酶是一种核糖蛋白酶，能以自身RNA为模板，逆转录合成端粒DNA，保持端粒的长度而维持细胞的分裂能力，使细胞逃脱衰老和死亡面获得永生化。人端粒酶逆转录酶是端粒酶的催化亚基，是端粒酶激活和细胞癌变的限速因素，在甲状腺癌中端粒酶活性和hTERTmRNA量高表达，达80%~ 90%【5】。如能有效地抑制癌细胞hTERT基因的表达，降低端粒酶活性，有望促使癌细胞停止生长增殖，走向衰老和凋亡。本研究构建的针对hTERT基因siRNA的表达质粒转案人甲状
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(GIP Chinese General Practice.Fbrunyi2006,at9.Na
腺癌FRO细胞后，显著抑制了该基因的表达水平，对mRNA 转录水平和蛋白黏译水平的抑制率分别达到76%和81%，提
示RNAi技术在甲状腺癌的基因治疗中具有良好前景。参考文献
Elbashir SM, Harborth J, Lendeckel W, et al. Duplexes of 21 nu-cleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells[J). Nature, 2001, 411 (6836); 494 498.
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（收稿日期：2005-11-05）
(本文编辑：张玮）
·全科医生知识窗
5（三）
临床易混淆的概念及诊治技巧
颈椎间盘突出症的物理诊断方法
刘薇，张祥建
【关键词】
椎间盘移位：诊断
【中图分类号】R681.53
【文献标识码】B
颈椎间盘突出症是由于颈部突然的过度活动或椎间盘发生退行性变使椎间盘后方张力增加，导致纤维环破裂、髓核突出，使颈髓和神经根受损面引起的。
临床上，本病可分为急性和慢性颈椎间盘突出症。前者是指有轻重不等的颈部外伤史，影像学检查证实有椎间盘破裂或突出，面无颈椎骨折或脱位。后者与脊髓型颈椎病不同，一般发病年龄较轻，病情发展较快，病损范围仅1~2个椎间盘， X线检查亦无椎间关节明显退行性变， MRI上可见椎间盘突出，无骨费形成。
此外，根据椎间盘突出的部位及突出作者单位：050000河北省石家庄市，河北
医科大学附属第二医院神经内科
【文章编号】10079572（2006】04029201
物与受压组织结构的关系，可分为中央型和外侧型椎间盘突出。中央型突出者临床表现以颈髓受压为主。在MRI上，椎间盘从后方中央部位呈团块状突出，压追颈髓前方，受压颈髓弯曲、变扁及向后移位。外侧型突出者以神经根受损为主要临床表现。在MRI上，椎间盘从后外侧呈块状或碎片状突出，压迫颈髓前外侧，神经根向后外侧移位或消失。其中以中央型突出者为主。据报道，！
MRI诊断颈椎间盘
突出症的准确率明显高于脊髓造影和CT 检查。MRI可直接显示颈椎间盘突出的部
位、类型及颈髓和神经根的受损程度，
为
颈椎间盘突出症的诊断、鉴别诊断、治疗方法选择和预后判断提供可靠的依据。对颈部疼痛不适，存在颈髓或神经根受压症状，特别是有头、颈部外伤，而X线检
查未见明显异常的患者，如条件许可，最好行MRI检查，以明确是否存在颈椎间盘突出症。另外，诊断颈椎间盘突出症的临床试验包括：（1）颈神经根牵引试验：将患者届曲的上股在肩部尽量向上和向后
使之达到最大程度，然后缓慢伸直
伸展，
如引起放射痛而使前臂伸直受限，
前臂，
即为阳性。
（2）颈椎间孔压追试验：惠
者取坐位，使头过伸并向惠侧倾斜，检查
如使疼痛加剧，为
者以手用力压其头顶，阳性。
指示神经根刺激症状，常见于外割
型颈椎间盘突出。
患者取坐位，
颈椎牵引试验：
(3)
检查者以手托其头部两侧，
沿脊柱织轴方向向上牵引，
如使根痛缓解
即为阳性。
（收稿日期：2006-01-10）
（本文编辑：装燕）