2012年2月
过程工程学报
The Chinese Joumal of Process Engineering
黄鳝血清转铁蛋白的提取及表征王博文"，任天瑞“2，董亚明"，王丰12
(1.上海师范大学生会与环境科学学院：2.上海师范大学资源化学教育部重点实验室，上海200234)
Vol.12 No.1 Feh. 2012
摘要：对从黄鳝血液中提取的蛋白层析纯化后进行生物质诺测试，确定为血清转铁蛋白.利用十二烷基酸酸钠-聚内烯酰胶双胶电泳、原子力暴微镜、圆二色语法对蛋白的分子量、表面形貌、二级结构进行了表征。结果表明，该转铁蛋白分子量为74kDa，含为0.750mg/mL，含α-螺旋29.8%，β-折介6.6%
关键词：黄鳞：转铁蛋白：十二烷基硫酸钠-聚内烯酰胺凝胶电冰：生物质谱：原子力显微镜
中图分类号：R284.2：Q956 1前言
文献标识码：A
黄鳝(Monoprerusalbus)属合鲲鱼日，合鳃鱼科，黄鳞属，亦称罗鳝、蛇鱼、长鱼，为热带及暖温带鱼类，主婴分布于中国东南部和泰国、印度尼西亚等东南业地区，黄鳝有补血补气[1,2]、消炎消毒[3]、除风湿等功效，其富含二十二碳六烯酸(DHA)和卵磷脂，这些物质是人类脑细胞生长不可缺少的营养成分，黄鳝所特有的黄鳍系能调节血糖，其肉质所含脂肪极少，是糖尿病人、体虑、产后患者的理想食品，此外，黄鳝血还可治疗口眼歪斜，在中医药方面有很多用途。
黄鳝在中医学领域的药用价值很大，同时随若分子
生物学和生物技术的飞速发展，具有生物活性的黄等蛋白和多肽的分离、纯化和鉴定已有报道，皮建华等5制备了鳞鱼抗H血清：尹绍武6观察了黄鳝的红细胞，测定了其脱氧核榭核酸(DNA)含量；李联泰等I7综述了黄鳝研究现状及其活性物质研发的前景，归纳总结了黄鳍遗传学、分子生物学、氮代谢及活性物质的最新研究成果；诸葛燕比较了7种淡水鱼中天然色素和酪氨酸酶的活性；Siripan等[比较了亚洲鳗鱼、鳝鱼的血细胞值，并观察了其形态；李连0从全血中提取出鲜鱼凝血酶，具有相当高的凝结活性
血清转铁蛋白(Serotransferrin，Tf)具有很好的增强机体免疫力的生理功能(，能促进婴幼儿对铁及营养物的吸收，能有效防止贫血(12)、抑制肠道致病菌和病毒体内自由基的生成3]、缓解类风湿关节炎和抗衰老.Tf是体液中不可缺少的成分，不仅参与呼吸、细胞增殖和免疫系统的调节，还能调节铁离子平衡和能量平衡，更具有抗菌杀菌的保护功能415]，龙华等3]用硫酸铵分级沉淀法及十二烧基硫酸钠-聚内烯乾胺激胶电冰(SDS-PAGE)法获得了含鲤(Cyprinuscarpio)血清转铁蛋白的
文章编号：1009-606X(2012)01-0125-06
条带，同时除去SDS及考马斯亮蓝，分离纯化了转铁蛋白，并进行了铁离子结合实验及光谱分析，结果表明，转铁蛋白结合铁离子后的特异吸收峰为467nm，说明去 SDS后蛋白仍具有很强的结合能力，用SDS-PAGE法测得锂血清Tf分子量约为74000Da.杨严俊等(6采用固定化金属整合亲和色谱法(IMAC)从蛋清中分离和提取卵转铁蛋白(OVT)，OVT纯度达96%，远高于商品 OVT纯度，分子量为76500Da.截至目前，未见对黄结体内的蛋白质进行生物质谱鉴定、原子力显微(AtomicForceMicroscope，AFM)表面形貌表征及圆二(CircularDichroism,CD)色谱测定.
黄鳞在我国南方分布广泛，人们主要是食用其肉，所以黄鳝血液来源相对丰富且价格便宜，利用率较低，是一种极为重要的天然药物开发资源，同时也足一种很好的药物原材料。本研究通过研究黄鳝血清蛋白，提取具有药理活性的蛋白质化学组分，开发黄鳞的药用成分，提高黄鳍的利用价值.准确测定了黄鳝血清转铁蛋白的分子量及相对含量，并对血清转铁蛋白进行表征，首次对黄鳍体内的蛋白质进行了生物质谱鉴定、AFM 表面形貌的表征及CD色谱的测定，得到的蛋白结构数据可为进一步对其进行药理研究打下基础。
2实验 2.1原料和仪器
实验材料：新鲜黄鳞购自超市：硫酸铵、聚乙二醇(Carbowax4000W)、氯化钠、三羟甲基氨基甲烷(Tris)，十二烷基硫酸钠(SDS)、过硫酸铵、甘氨酸、巯基乙醇、甘油、溴酚蓝、考马斯亮蓝R250、甲醇、冰醋酸、氨水、氟化钾、磷酸二氢钾、浓盐酸购于上海国药有限公司：丙烯酰胺(Acr)、双甲叉基内烯酰胺(Bis)、四甲基乙二胺溴化乙啶(TEMED)、预染色蛋白质分子量标准
收瑞日期：20110603，修回日期：2011~1220
基金项目：国家自然科予基金资励项H(编号：20872093)：上海市教委本全资助项日(编号：1122122)：上海市重点实验审基金资路项目(编号：07dZ22303) 作者简介：土博文(1989-)，女，山西省临分市人，锁上研究生，高分子化孕了物理专业：任天瑞，通i联系人，Tel:021-64328850,E-mail:tren@gshmu.edu.cn
方方数据