第32卷，第7期 2012年7月
谱学与光谱分光
析
Spectroscopy and Spectral Analysis
Vol.32,No.7,pp1780-1784
July，2012
二维红外相关光谱研究温度对卵转铁蛋白构象的影响
任国栋，郭爱玲，耿放，马美湖“，黄群，武小芬
华中农业大学国家蛋品加工技术研发分中心，朝北武汉430070
摘要采用傅里叶变换红外光谱(FTIR)和二维相关光谱分析技术研究了无铁卵转铁蛋白和饱和铁卵转铁蛋白在加热条件下(25～95℃)构象变化规律，结果表明，随着温度升高，无铁卵转铁蛋白在3300cm"处的峰的迁移程度比饱和铁卵转铁蛋白大，说明卵转铁蛋白结合铁后氢键作用增强，对热的抵抗性增强。二维红外图谱分析显水，无铁卵转铁蛋白与饱和铁卵转铁蛋白的二级结构变化顺序为β-折叠>酰胺Ⅱ>-CH-弯曲振动。通过对比无铁卵转铁蛋白和他和铁卵转铁蛋白的二维同步和异步图谱发现，在1652和1688cm-1 处的交叉峰存在差异，卵转铁蛋白结合铁后温度对其二级结构中r螺旋影响变小，而对3转角的影响变大。
同二维红外相关光诺；温度；卵转铁蛋白；氰键
关键词
中图分类号：0657.6
引言
文献标识码：A
DOl; 10. 3964/j. issn. 1000-0593(2012)07-1780-05
实验部分 1
转铁蛋白是一组分子量约为80kDa的单链糖蛋白，主要包括血清转铁蛋白、卵转铁蛋白和乳铁蛋白，在碳酸根高子的协同作用下，能够紧密结合两个三价铁离子)。转铁蛋白是蛋清的主要蛋白质之一，约占蛋清蛋白的12%，远离于其他来源的转铁蛋白，近年来国内对卵转铁蛋白的研究局限于分离纯化(2.3)，国外报道更多侧重于释放铁的结构机理[15]、天然构象变化(68]、抗菌能力[9,]和结合部分金属(]的能力，对外扰条件下构象变化研究较少。二维相关光谱技术是近二十年来迅速发展的一种新技术，1989年No da[13首次将二维相关技术引入红外光谱，1993年他又将二维相关光谱的概念推广到拉受、近红外以及荧光光谱等广义二维相关光谱4)
。二维相关光谱的主要优势为：相比一维光
谱有更高的分辨率并能区分不同基困对外界扰动条件的响应顺序，在提供传统的峰位归属之外，能提供更多的信息，已成为研究白质构象的一种重要方法。本工作以温度作为外扰条件，利用二维相关傅里叶变换红外光谱研充无铁卵转铁蛋白（Apo-Ovotransferrin）和饱和铁卵转铁蛋白（Holo-Ovo
transferrin)的构象变化以及它们变化过程中的差异。收稿日期：2011-12-06，修订日期：2012-02-25
基金项目：现代农业产业技术体系建设专项项目(CARS41-K23)资助
1.1材料与仪器
无铁卵转铁蛋白(Apo-OTf)根据文献[15]制备，凝胶分析软件(Gel-proanalyzer)分析纯度为95.56%。
VERTEX70型傅里叶变换红外光谱仪（德国Bruker公司)；2216e型精密变温附件（英国Specac公司)；FE20型pH
计(瑞士梅特勒)；AR2140型分析天平（美国奥豪斯)， 1.2饱和铁卵转铁蛋白(Holo-OTT)的制备
将无铁卵转铁蛋白100mg溶解于50mLTris-HCl缓冲液(pH8.5，含0.01mol·L-1NaHCO),和0.1mol ·L-NaCI)。加人400μL0.01mol·L-1的FeCl（理论饱和值为 256.4μL)，4℃冰箱放置2h后，每6h用二次蒸馏水透析一次，透析四次，至透析液用AgNO，滴定无沉淀，冻干获得饱和铁卵转铁蛋白(Holo-OTf)。
红外光谱检测(FTIR)
1.3
将蛋白样品与液化钾压片，置于红外光谱仪的变温附件中，光谱扫描范围为4000～400cm1，光谱分辨率为4 cm-1，扫描信号累加32次。变温附件温度控制范围为25~ 95C，每10℃测量一次光谱，每个温度测量点的平衡时间为5min。
作者简介：任国栋，1987年生，华中农业大学食品科学技术学院硕士生
e-mail;renet312@163.com
e-mail; guoailing@mail. hzau. edu. cn
任国栋，郭爱玲；并列第一作者
*通讯联系人
万方数据
e-mail; mameihuhn@yahoo. com cn