81 2018年4月
过程与工艺
过程工程学报
The Chinese Jourmal of Process Engineering
VoL.18 No.2 Apr.2018
DOI: 10.12034/j.issn.1009-606X.217300
人血清转铁蛋白标准物质纯化
孔金隆12，全灿”，王启迪3，罗坚“，
周俊波”，孙永跃"，李增兰4
(1.天津理工大学化学化工学院，天津300384：2.中国计量科学研究院化学计量与分析科学研究所，北京100029 3.北京化工大学机电工程学院，北京100029：4，中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京100190)）
摘要：建立了一种从Cohn血浆分离副产物组分IV中纯化高纯度转铁蛋白(Tf)标准物质的技术，对Cohn组分IV进行复溶、离心和过滤，采用CaptoDEAE朗离子交换色谱进行初分离，再通过穿透式Octyl-Sepharose4FastFlow疏水色谱进一步精制：对纯化产品进行了结构、纯度、活性等表征，采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱高效液相色谱及酶联免疫吸附法对Tf标准物质进行了分析。结果表明，Tf产品纯度大于99%，收率为79%：圆二色光谱分析显
示Tf的二级结构未发生改变，铁离子结合能力实验表明Tf可结合2个铁离子，保持活性关键词：人血清转铁蛋白；标准物质；离子交换色谱：疏水色谱；Cohn组分IV：纯化
中图分类号：Q816
文献标识码：A
文章编号：1009606X(2018)020387-06
PurificationofHumanSerumTransferrinReferenceMaterial
Jinlong KONG'2,Can QUAN2",Qidi WANG,Jian LUO*,Junbo ZHOU,Yongyue SUN',Zenglan LI(l. School of Chemistry and Chemical Engineering, Tianjin University of Technology, Tlanjin 300384, China;
2. Division of Metrology in Chemistry, National Institute of Metrology, Beijing /00029, China,
3. College of Mechanical and Electrical Engineering, Beijing University of Chemical Technology, Beijing 100029, China, 4. National Key Laboratory of Biochemical Engineering, Institute of Process Engineering, CAS, Beijing 100190, China)
Abstract: A two-step chromatographic method of purifying transferrin (Tf) from Cohn fraction IV, a byproduct of the Cohn plasma odepagndigseoaegoaoenyueoenanae sensarodroeuogae DEAE ion-exchange chromatography, then further purified by hydrophobic interaction chromatography. The characterization of purified Tf product was analyzed by SDSPAGE, HPLC and ELISA. The results indicated that the purity of Tf was greater than 99% and the yield was 79%. The circular dichroism spectrum proved that the secondary structure of the purified Tf product have not changed, and iron binding ability experiment proved that the purified Tf product can bind two iron ions.
Key words: human serum transferrin; reference material; ion-exchange chromatography; hydrophobic interaction chromatography: Cohn
fraction IV;purification
1前言
转铁蛋白(Transferrin，Tf)是负责生物体中铁离子传递和调节的一类单链糖蛋白]，包括铁离子结合蛋白整个家族：血清转铁蛋白、卵清转铁蛋白、黑素转铁蛋白及乳转铁蛋白(2-4)，其中人血清转铁蛋白(HumanSerum Transferrin,hTf)是单链糖蛋白，由679个氨基酸组成等电点为5.9，分子量为79kDa，主要在肝脏合成，约占血浆蛋白总量的0.3%~0.5%.Tf具有抗菌作用及作为
哺乳动物细胞增殖的生长因子等许多重要功能(5,6),Tf可结合许多治疗或诊断的相关金属离子，能被在癌症细胞表面过度表达的Tf受体(TfR)识别，由Tf和TfR介导的药物传递系统近年来受到广泛关注，包括Tf作为载体传递金属药物、化疗药物、高分子化合物甚至基因[7-9],
从血浆或Cohn乙醇沉淀法副产物组分IV中纯化 Tf的研究在国内外均有报道[10,]，但Tf产品纯度仅约为95%.常规的Tf纯化方法包括冷乙醇、硫酸铵或利凡诺等沉淀法及离子交换色谱法，其中冷乙醇沉淀法结合
收稿日期：2017-0818，修图日期：20170922
基金项目：中国计量科学研究院基本科研项目(编号：21-AKY1615)：国家重点研发计划资助项目(编号：2017YFF0205803)
作者简介：孔金隆(1992-)：女，山东省案芜市人，硕士研究生，主要研究方向为蛋白纯化：全灿，通讯联系人，Tel:010-64524731,E-mail:
superfluidcan@hotmail.com
引用格式：孔金隆，全始，王启速，等。人血清转铁蛋白标准物质纯化，过程工程学报，2018，18(2)：387-392
Kong JL, Quan C, Wang Q D, et al. Purification of Human Serum Transferrin Reference Material (in Chinese), Chin. J. Process Eng. 2018, 18(2): 387392, DOI: 10.12034/j.issn.1009-606X.217300
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