第12卷第1期 2012年2月
过程工程学报
The Chincse Jourmal of Process Engineering
超顺磁性聚醋酸乙烯酯微球亲和分离纳豆激酶
孔鹏，谢渝春"，魏雪团"，徐林"，杨良嵘"，李鹏飞"，周华从"，刘会洲
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Vol.12 No.1 Feh.2012
摘要：采用改进悬浮聚合法制备了磁性聚醋酸乙烯脂微球，经水解、氮基化修饰，以戊二醛作闻隔臀偶联配基对氨基苯甲滕，制得磁性PVA亲和微球，用于纳豆激酶相酶液的分离纯化，对所制微球进行了表征，研究了纳豆激酶的吸附平衡、吸附和解吸动力学、酶的纯度和酶活问收，结果表明，磁性微球具有较高的比饱和磁化强度(32.4emu/g)， 40min即可达到纳激酶的吸附平衡，15min内完成酶的解吸，酶活同收率接近75%，纯化因子为10.3，酶的分子量为28kDa，电泳分析为一条带
关键调：纳.激酶；磁性PVA微球；亲和分离：吸附：动力学
中图分类号：Q814.1 1前言
文献标识码：A
文章编号：1009-606X(2012)01-0105-07
的亲水性12]，能偶联高容量的亲和配基，增加吸附量，
血栓病严重危害人类健康，目前临床上应用的溶栓剂主要有尿激酶(UK)、链激酶(SK)、组织型纤溶酶原激活剂(t-PA).它们大多为注射用药，削作用大、半衰期短(UK16min,SK15~30min,t-PA5min)，给血栓治疗带来不便"
1987年日本学者Sumi等(2]从纳豆中发现了一种具有高效溶栓活性的酶，将其命名为纳豆激(Natokinase NK)。纳豆激酶具有在体内作用时间长、无抗原性、既可静脉注射又能口服给药、既可预防又能治疗血栓且不易引起出血、价格低等优点围，分离纯化技术是限制其大规模生产的瓶颈向题近年来，国内外许多科研工作者对纳豆激酶的分离纯化进行了研究，如盐析间、有机溶剂苯取5]、层析6]、膨胀床吸附[7]、反胶团萃取围和磁性分离例，传统的分离手段多采用硫酸铵或乙醇沉淀先去除杂蛋白，然后再通过层析柱进一步分离纯化，存在步骤多、时间长、选择性低、过程总产率较低等缺点，膨胀床吸附分离方法虽缩短了纳豆激酶的分离时间，但吸附介质价格昂贵，而反胶团的形成引入大量的有机溶剂，在分离过程中常引起酶失活
磁性亲和高分子微球作为一种新型的分离载体，集磁性分离和亲和分离的优点于一体，能快速、简便、高选择性地从复杂生物体系中分离目标生物分子l0.Yang 等9用超顺磁性案甲基内烯酸甲酯(PMMA)微球从发酵液中直接纯化纳豆激，纯化因子为8.7，酶活可收率为85%.磁性聚乙烯醇(PVA)微球具有合成方便、安全低毒、产品质量易控制、价格便宜、使用方便等特点] PVA微球比PMMA微球表面含丰富的基，具有很好
且使用.总浮聚合法制备的磁性PVA微球具有较商的比饱和磁化强度，便于在分离中应用，至今未见使用该方法分离纯化纳豆激酶的报道.本研究采用改进的悬浮聚合法制备磁性聚酷酸乙烯酯微球，经水解、氨基化修饰。再以戊二醛作间器臂偶联配基对氨基苯甲藤，制得磁性 PVA亲和微球，用其直接对纳豆激酵粗酶液进行纯化，并对纳豆激酶的吸附与解吸进行了研究
2实验 2.1原料与试剂
二乙烯苯(DVB，用5%NaOH溶液清洗去除阻聚剂)，过氧化苯甲酰(BPO)，聚乙烯醇(PVA-1788，分析纯，上海阿拉丁试剂公司)，酯酸乙烯酯(VAc，经减压蒸馏去除阻聚剂)，戊二醛，浓氨水，氯化亚铁(FeCl2-4H,O)，三氯化铁(FeCls-6HzO)，油酸(分析纯，国药集团药业股份有限公司)，对氨基苯甲(PAB)，2-氯乙胺盐酸盐[分析纯，阿法埃莎(天津)化学有限公司]，纳豆激酶标准品(10000FU/g，日本Wako公司)，纤维蛋白原，凝血醉(生化试剂，美国Sigma公司)
纳豆激酶相酶液由本实验室采用固态发酵生产，经
去离子水浸提，离心后得到。 2.2实验设备
Lamdbo紫外-可见分光光度仪(美国Pekin-Elmer 公司)，Vector22型傅立叶变换红外光谱仪(德国布鲁克公司)，Model4HF型振动样品磁强计(美国ADE公司) JSM-6700F型场发射扫描电子显微镜(日本电子公司) X'PertPROMPD型X射线衍射仪(荷兰帕纳科分析仪器
收揭日期：201110-18，修回日期：2011-12-06
作者介：儿孵（1986），男，山东省臻州市人，硕上研究生，化学工程专业：刘会洲，通讯联系人，Tel:010-62554264,E-mail:hzliu@home.ipe.ac.cn 方方数据