第35卷，第5期 2015年5月
光谱学与光谱分析 Spectroscopy and Spectral Analysis
Vol.35,No.5 -pp1331-1334
May,2015
分级醇沉宣木瓜多糖含量、分子量测定和活性初步研究
田冰梅"，谢晓梅}，2*，沈盼盼"，杨沫"，张圣龙1，唐庆九
1.安徽中医药大学药学院，安徽合肥230012
2.现代中药安微省重点实验室，安微合肥230012 3.上海市农业科学院食用菌研究所，上海201403
摘要采用水提取分级醇沉制得宣木瓜多糖，利用苯酚-硫酸法测定多糖含量，采用高效尺寸排阻色谱-多角度微光光散射-示差折光联用技术（HPSEC-MALLS-RI)分析多糖分子量和分子量分布，用多糖体外刺遗巨噬细胞，Griess法检测NO释放量。系列研究旨在考察宣木瓜多糖含量、分子量和分子量分布以及免疫活性，为宜木瓜多糖研究积累实验资料和科学依据；并为中药多糖研究提供较为简单、系统的方法与思路。结果表明，不同乙醇浓度（g)沉淀宣木瓜多糖含量的高低顺序是：95%>80%>40%≥60%>20%，95%乙醇可较完全地沉淀多糖；当乙醇浓度从20%上升到95%时，粗多糖纯度由35.1%上升至45.0%。宜木瓜多糖主要有3个色谱峰，不同浓度醇沉的多糖经HPSCE分离后出峰位置和数量没有明显差别，表明它们含有的多糖种类相似；重均分子量（M分别为6.570×10"g·moL-"和1.393×10"g·moL-以及小于1万未能获得准确值；前两种多糖的分子量分布指数（M。/M。)分别是1.336和1.639；本试验中宣木瓜多糖对巨噬细胞 Raw264.7产生NO没有明显的促进作用。
关键词宣木瓜多糖；含量；分子量；高效尺寸排阻色谱-多角度激光散射-示差折光；巨噬细胞；NO
中图分类号：R282
引言
文献标识码：A
DOI: 10. 3964/j. issn. 1000-0593 (2015 )05-1331-04
1实验部分
宣木瓜是安徽道地药材，已有文献报道木瓜富含多糖类成分。植物多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、降血糖、降血脂及抗衰老等广泛的药理及生物活性.3。水提醇沉是天然多糖类最为常用的提取纯化方法，沉淀多糖多采用 80%乙醇。XU氏研究发现用乙醇沉淀天然多糖时需要对提取材料进行乙醇浓度的优化试验。目前鲜见木瓜多糖提取、分子量及活性系统研究的报道。本文采用水提分级醇沉制得宣木瓜粗多糖；利用苯酚-硫酸法测定多糖含量；用高效尺寸排阻色谱-多角度激光光散射-示差折光检测联用（high performance size exclusion chromatography connected to multi-angle laser light scattering and refractive index detec-tors，HPSEC-MALLS-RI)分析多糖分子量和分子量分布：用多糖体外刺激巨噬细胞，Griess法检测NO释放量，初步考察其免疫活性。实验结果为置本瓜多糖的深人研究提供了资料和科学依据。
收稿日期：2014-07-28，修订日期：2014-11-08
1.1材料与仪器
木瓜采自安徽省宣城市新田镇，经安徽中医药大学药学院彭华胜教投鉴定为贴梗海棠Chaenomelessepeiosa（Sweet） Nakai近成熟果实。鲜果采后即置沸水中烫至表皮灰白色，对半纵部，晒干备用。
DMEM培养基、RPMI1640培养基、胎牛血清为Gibco 公司产品；青霉素、链霉素为Amersco公司产品；小鼠巨噬细胞株RAW264.7购自于中国科学院上海细胞研究所；其余试剂均为分析纯，实验用水为纯化水。
600型高效液相色谱仪（美国Waters公司），示差折光仪、多角度激光光散射仪（美国Wyatt技术公司）：UV-2550 紫外-分光光度计（日本岛津公司）；SynergyHT酶标仪（美
国Bio-TEK公司）。 1.2方法
1.2.1粗多糖制备
基金项目：国家"十二五"科技支撑计划项目(2011BA104B06)和安徽高校省级自然科学研究项目(KJ2012A188)资助
e-mail:394243884@qq.com
作者简介：田冰梅，1988年生，安徽中医药大学硕士研究生
e-mail : xiexiaomei940@ sina. com
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