第30卷，第9期 2010年9月
谱学
与光
光
谱
分
析
Spectroscopy and Spectral Analysis
大鼠肾脏糖胺聚糖的种类及二糖组成分析
皓，于广利*，赵
峡，郝翠，李广生，王培培
主
中国海洋大学医药学院山东省糖科学与糖工程重点实验室，山东青岛
266003
Vol. 30,No. 9,pp2484-2487 September,2010
要采用两步酶解和离子交换色谱从Wistar大鼠肾脏中提取糖胺聚糖，以醋酸纤维素薄膜电冰分析糖摘
胺案糖种类，以弱阴离子交换色谱分离各种糖胺案糖。纯化后的糖胺案糖分别经特定糖胺案糖酶裂解，采用强阴离子交换高效液相色谱(SAX-HPLC)紫外检测分析其二糖组成结果表明，Wistar大鼠肾脏糖胺聚糖主要由硫酸乙酰肝素和少量硫酸皮肤素组成。硫酸乙酰肝素含有8种二糖，其中含有乙酰基二糖总含量高达77.6%，非硫酸化二糖（V-A)含量为59.7%；硫酸皮肤素含有6种二糖，其中单硫酸化二糖总含量为 54.8%，非硫酸化二糖含基为32.9%，
关键词大鼠肾脏；糖胺聚糖；种类；二糖组成
中图分类号：S854.4*3
引言
文献标识码：A
DOI:10.3964/j.issn.1000-0593(2010)09-2484-04
只（体重200~230g)，青岛市药检所实验动物中心提供；透明质酸（hyaluronicacid，HA）、硫酸软骨素（chondroitin sul-fate，CS)、硫酸皮肤素（dermatansulfate，DS)、硫酸乙酰肝
糖胺案糖（glycosaminoglycans，GAGs）是一类由不同的重复二糖结构单元组成的带有股基和硫酸酯基的线性象阴离子长链分子，广泛仔在于细胞表面和细胞外基质中。作为生物体内重要的生物大分子，胺聚糖通过与生物体内各种酶、生长因子及细胞黏附因子等结合，参与细胞增殖、分化和免疫调节等重要的生物学过程1-3)。
研究表明，在不间物种的相同组织中，以及同一组织不同发育阶段，糖胺聚糖结构都不相同[5-]，尤其在病变组织中，糖胺聚糖的含量和结构与正常组织也存在较大差异(。肾脏是动物的重要器官，其糖胺聚糖的结构和含量在肾脏病变过程中发生显著变化[3,10]。因此，对肾脏糖胺聚糖的含量、种类及其结构进行系统研究具有十分重要的意义。
本文以Wistar大鼠肾脏为研究对象，采用酶解法和色谱法从中提取纯化糖胺案糖，综合运用电冰和高效液相色谱紫外检测法对其含量、种类及二糖组成进行分析，为动物组织中微量糖胺案糖的种类和细微结构研究提供参考。
1
实验部分
1.1
试剂与仪器
实验动物：10~12周龄清洁级健康雄性Wistar大鼠4 收稿日期：2009-09-27，修订日期：2009-11-03
素（heparan sulfate，HS)，肝素（heparin，HP)，阿利新蓝 8GX，均由美国Sigma公司；胰蛋白酶，美国USB公司；木瓜蛋白酶，美国Amresco公司；软骨素类不饱和二糖标准品：UA-GalNAc(0S)，UA-GalNAc4S(4S)，UA-Gal NAc6S(6S)，UA2S-GalNAc4S(24S)，△UA2S-GalNAc6S
(26S)，
△UA-GaiNAc4S6S （46S),
AUA2S-GalNAc4S6S
(246S)：硫酸乙能肝素类不饱和二标准品：△UA2SGlc NAc6S(I-A)，AUA2S-GlcN6S(I-H)，AUA2S-GlcNS6S
(I-S).
AUA-GlcN6S （I-H),
AUA-GlcNS6S（I-S),
UA2S-GleN(Ⅲ-H)，△UA2S-GleNS(ⅢI-S)，AUA-GleNAc(IV-A), UA-GleN( IV-H), UA-GleNS( IV-S), UA-Gle NAc6S(I-A)，UA2S-GlcNAc(-A)，均由英国Iduron公司；软骨素酶ABC(ChondroitinaseABC)，肝素酶I（Hepari-naseI），肝素酶（HeparinaseⅢ），均为美国Sigma公司； ZorbaxSAX色谱柱（4.6X250mm，5μm），美国Agilent公司。AG50W-X2，美国Bio-Rad公司；DEAE-SepharoseFF 和SephadexG10凝胶，瑞典PharmaciaBiotech公司；酷酸纤维索薄膜(7X9cm)，北京六一公司；其他试剂均为国产分析纯。
DYCP-38B型电泳精，WD-9404超级加样器，北京六～公司；3000Xi型电冰仪，美国Bio-Rad公司；T10basic组织
基金项目：函家海洋(863计划)项甘(2007AA09Z445)和科技部国际合作项目(2007DFA30980)资助
作者简介：王皓，1984年生，中国海洋大学医药学院研究生
*通讯联系人
万方数据
e-mail; glyu@ouc. edu. cn
e-mail; haorock@163.com