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高效液相色谱法测表柔比星制剂中乳糖含量
张思雅何敬琦
（哈药集团生物工程有限公司，黑龙江哈尔滨150025）
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摘要：日的：建立注射用盐酸表柔比星制剂中轧糖含量测定方法。方法：采用高子对高效液相色谱法，色谱柱为UltimateNH2柱(250mm*4.6mm,5um），以乙晴：水（57：43）为流动相，流为1.0ml/min，柱温45%。结累：盐股表柔比星不千优乳糖含量测定，耐用性试验符合规定，乳糖溶液的溶度在0.25mg/ml至2.0mg/ml范围内线性关系良好，准确度平均回收率为100.5%，RSD为0.8%，重复性及中间精密度符合规定，溶液稳定性研究结果表明溶液在24小时内稳定。结论：所建立的含量测定方法操作简便、准确，重现性好，可用于注射用盐酸表柔比星含量测定，可更好地控制产品质量
关键词：乳糖；含量测定；方法学；高效液相色请法
乳糖为重要营养物质，在食品加工、医药等领域有广泛的用途。
0.25mg/ml~2.0mg/ml浓度范围内线性关系良好。
乳糖的含量测定方法有多种，如直接滴定法、碘量法、酶法、比色法等。由于前述几种方法往往存在操作繁项、准确度不高等缺点，故本文在参考了有关文献的基础上，建立了HPLC示差折光分析法测定乳糖的含量。该法操作简便、快速，测定结可提高注射剂稳定性。目前，注射剂中对乳糖含量测定控制较少，为更好地控制产品质量，我们对注射用盐酸表柔比星中乳糖进行含量测定，建立乳糖含量限度，测定乳糖方法主要有滴定法-及高效液相色谱法，本文通过方法筛选，建立乳糖含量测定方法
1器与试药
Agilent1260Series高效液相色谱仪（示差检测器），色谱柱 Ultimale氨基柱5μm4.6 x250mm
乳糖及蓝糖对照品购自中国药品生物制品检定所，注射用盐酸表柔比星为市售样品，商品名为法玛新，辉瑞制药（无锡)有限公司，乙为色谱纯，其它试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1对照品溶液制备
乳糖对照品溶液：精密称取乳糖对照品0.2g，置于100mL量瓶
2.5准确度试验
精密称取乳糖对照品，加水落解并稀释制成2mg/ml的落液，作为对照品溶液。精密称取注射用盐酸表柔比星制剂适量各三份，分别置于25ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取对照品溶液及供试品溶液适量，加水移释至10ml，作为供试品溶液80%、100%、120%组。精密量取对照品溶液及各供试品溶液 20μ1,注人液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算乳糖的含量，计算回收率。结果表明平均回收率为98.7%，RSD为1.8%，准确度试验符合试验要求，
2.6重复性及中间精密度试验
分别精密称取注射用盐酸表柔比星供试品6份，分别加水使溶解并稀释制成供试品溶液。按照乳糖含量测定方法进行重复性试验，结果6个供试品本品含量为99.2%，RSD为0.7%，重复性符合规定。
取注射用盐酸表柔比星供试品，照含量测定方法进行试验，变动因素为实验时间、实验人员，考察含量测定结果变化情况。结果6 次测定平均含量为99.7%，RSD为1.6%，中间精密度结果符合规
中。用水配成浓度为2mg/ml的溶波；藻糖对照品溶液：精密称取蓝
定
糖对照品0.2g，置于100mL量瓶中，用水配成浓度为12mg/ml的溶液：混合对照品液：分别取乳糖对照品及蓝糖对照品于同一容量瓶中，加水制成2mg/ml的溶液。
供试品溶液的制备：精密称取注射用盐酸表柔比星样品1瓶，置25ml量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀。
2.2专属性试验
通过筛选，确定色谱条件为色谱柱为UltimaleNH柱，以乙：水（57：43）为流动相，流速为1.0ml/min，柱温45℃。取对照品混合液进行试验。结果乳糖与蔗糖的分离度为2.02，理论塔板数以乳糖计为5900。取盐酸表柔比星及羟苯甲酯适量，加水制成溶渡，进样，结果盐酸表柔比星及羟苯甲酯不于扰含量测定
2.3耐用性试验
更换实验用色谱柱（三根不同氨基色谱柱）、流动相比例（乙睛比例变化±2%）、柱温（35℃、40℃、45℃）及流速（0.8ml/min、 1.0ml/min、1.2ml/min），考察各项指标变化对含量测定影响，同时考察乳糖与蔗糖的分离度，并评价塔板数，结果表明各项指标变化对
2.7溶渡稳定性试验
精密称取供试品适量，按照已拟定的含量测定方法制备乳糖供试品溶液，室温条件下放置放置24小时，分别于0小时、1小时、2 小时、4小时、6小时、8小时及24小时进样。考察乳糖峰面积变化情况，结果乳糖峰面积在24小时内的，表明供试品溶液在室温条件下放置8小时内较稳定。
2.8样品含量测定
取注射用盐酸表柔比星供试品5瓶，加水溶解并转移至25ml 容量瓶中，定容，按照所确定含量测定方法测定供试品含量，结果5 瓶供试品乳糖量分别为50.6mg.51.8mg、49.6mg、52.0mg、53.1mg。考虑到装量差异，供试品中乳糖量基本一致
3讨论
所建立含量测定方法可行，操作简便，结果准确，可以用来测定注射用盐酸表柔比星中乳糖含量，也可为制剂处方筛选提供方法。
参考文献
[1]杨自洁.葬吉军.任国谱.邓放明原料乳与乳制品中碳水化合物质
含量测定结果无明显影响，乳糖与蓝糖分离度符合规定，塔板数较
量控制研究进展[]食品工业科技,2012(22)。
高。耐用性试验符合规定。在各种色谱条件下对称因子在0.9至1.1 之间.塔板数均大于5000。
2.4线性范围试验
[2伍桃英.李梦怡李亦蔚.流娜.曾知章,程云辉3种洲定乳制品中乳据含量方法的比较[J1食品与机械.2010,9.265):71-72
[3]陈少美.HPLC示差折光法测定乳糖含量[J].海峡药学,2011,23
精密称取乳糖对照品适量.加水溶解并稀释至刻度，摇勾.作为
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乳糖的对照品储备液。分别精密量取对照品储备液1.0ml、2.0ml、 3.0ml、4.0ml、5.0ml.分别置于25ml的量瓶中，分别加水稀释至刻度，掘勾。制成系列溶度溶液，作为线性溶液，分别精密量取201，注入液相色谱仪，记录色谱图，以乳糖的浓度为横坐标，乳糖峰面积为纵坐标，计算线性回归方程，结果当进样量为20μ1时乳糖在
作者简介：张思雅(1982,12-)，女，黑龙江哈尔滨市人，頭士研究生，工程师