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2012 Vol.31 No.12 Serial No.249
ChinaBrewing
酒曲中一株不产毒黄曲霉的分离与鉴定
惠明，尚小利，田青，张开平
(河肃工业大学生物工程学院，河南郑州450001）
Research Report
摘要：从8个酒曲样品中分离筛选到一株糖化能力较强的曲霉菌株D-57，对其菌落形态、色泽、菌丝及产孢子特征观察分析和ITS遗传序列测定。结合Clustal软件分析，综合判定该菌为子囊菌门，丝孢菌纲，丛梗孢目，丛梗孢科，曲霉属，黄曲莓。利用该菌株制备的麸曲糖化酶活力(糖化力)可达1015.3mg/(h*g)。经农业部农产品质检中心(郑州)检测，麸曲中黄曲霉毒素B,的含量小于5μg/kg，符合国家标准，认为该菌是安全的。
关键词：黄曲霉：酒曲；糖化：分离；鉴定
中图分类号：TS261.1
文献标识码：A
文章编号：02545071(2012)12-0080-03
Isolation and identification of a non-toxigenic Aspergillus flavus strain inkoji
HUI Ming, SHANG Xiaoli, TIAN Qing, ZHANG Kaiping
(College of Biological Engincering, Henan University of Technology, Zhengzhou 450001, China)
eoseoeaeeeoeesogeosanesessa analysis, it was identified as Aspergillus flavus, which belongs to Ascomycota, Hyphomycetes, Moniliales, Moniliaceae, Aspergillus by its colony aseanonseeeeanaesaoseono wheat bran koji, reached 1015.3mg *h'g’ and contents of aflatoxin B, was less than 5μg/kg which was determined by the Agricultural Products
Quality Inspection Center (Zhengzhou), in line with the national standards. The strain was safe Key words: Aspergillus flavus; koj; saccharification; isolation; identification
黄曲霉（Aspergillusflavus）在自然界分布十分广泛，用其制曲来酿造黄酒、豆酱等在中国、日本具有悠久的历史。黄曲霉群微生物包括黄曲霉、米曲霉及寄生曲霉等，部分株系在一定条件下产生黄曲霉毒素，对人和动物具有很强的致癌作用，但有些株系不产毒素（如苏-16、AS3.800、 A.flavusYA4.9等)，并且能产生丰富的液化型淀粉酶和蛋白酶，用于麦曲、米曲制作中起糖化、蛋白分解等作用叫。“以麦制曲，用曲酿酒”是中国黄酒的特色，制曲质量的好坏在黄酒酿造中具有极其重要的地位围。黄酒界有以黄曲霉制曲，因其曲种苦涩味较轻，酿酒品质好、风味独特，但糖化酶活力低，因此分离和筛选高糖化酶活力的黄曲霉菌株已成为黄酒业当务之急。
1材料与方法 1.1材料与试剂 1.1.1材料
样品：镇平五朵山大曲、香花镇散曲、安徽双轮白酒曲、镇平大曲、米曲、丹溪红曲米、苏州甜酒药等；原料：马
铃薯、麸皮、玉米粉，市售。 1.1.2 试剂
蛋白陈、葡萄糖、牛肉膏、琼脂粉、可溶性淀粉生化试剂：由北京奥博星生物技术责任有限公司提供：氯化钠、脱氧胆酸钠盐、酒石酸钾钠、硫酸亚铁、3，5-二硝基水杨酸等(分析纯试剂)：由天津科密欧化学试剂开发中心提供。
收稿日期：2012-02-24
1.1.3培养基
(1)PDA培养基闪；取新鲜马铃薯，去皮后称取200g，加入1000mL水，煮沸20min后，用4层纱布过滤，清液中加入 20g葡翻糖和20g琼脂，煮沸，补足失水。121℃灭菌20min；(2)透明圈培养基(67；可溶性淀粉4g，蛋白陈10g，氯化钠 5g，牛肉膏3g，脱氧胆酸钠1g，琼脂20g，水1000mL，pH7.2， 121℃灭菌15min：(3)孟加拉红培养基：蛋白陈5g，葡莓糖 10g，磷酸二氢钠1g.硫酸镁0.5g，1:3000孟加拉红100mL，氯霉素0.1g，脱氧胆酸钠1g，琼脂粉20gpH6.5，水1000mL， 121℃灭菌15min：（4)麸皮培养基：称取新鲜麸皮10g，加水 12mL充分拌匀，润料30min后，装于250mL三角瓶中，塞好
棉塞，121℃高压灭菌30min，取出摇瓶打散。 1.1.4主要仪器
HZQ-Q全温振荡器（哈尔滨东联电子有限公司)，UV 1100紫外/可见分光光度计（上海美谱达），PYX-DHS-40 型恒温培养箱（上海跃进），YS100摄像显微镜（日本 NiKon），GZX-GF-MBS-1型干燥箱（上海跃进），JSM-
6390LV型扫描电子显微镜(日本电子株式会社)等。 1.2方法
1.2.1分离方法
称取各酒曲样品1.0g，在无菌条件下分别加入装有 99mL的无菌生理盐水和着干玻璃珠的三角瓶中，振荡处理24h，经无菌脱脂棉过滤后得到菌悬液，分别稀释到
基金项目：河南工业大学校基金招标项目（10XZP004)；河南工业大学研究生教育创新计划项目(10YJS029) 作者篇介：惠明(1969-)，男，河南南阳人，副教授，研究方向为工业微生物与发醇工程。