研究报告
中国酿造
绿色木霉固态发酵生产纤维素酶的研究
武香玉，陈存社*,张京，张颖，呼德（北京工离大学化学与环境工程学院，北京100048）
2010年第5期
·93·
总第218期
摘要：以酒精为原料，采用实验室分离的绿色木得固态发酵生产纤维素酶，对发酵培养条件进行了优化。试验结果表明，在250mL 三角瓶中加入酒糖与麸皮(7:3)5g,料水比(发酵料：营养盐液)为1:1，其中营养盐溶液pH值白然，黄豆面1.0%，接种1mL孢子悬液，
30C培养3d，CMCase和FPA分别达到7105.92U/g和1463.97U/g 关键调：纤维素酶：酒箱：固态发酵
中图分类号：TQ925
文献标识码：A
文章编号：0254-5071(2010)05-0093-03
Solid-statefermentationofcellulasebyTrichodermaviride WU Xiangyu, CHEN Cunshe*, ZHANG Jing, ZHANG Ying, HU De
(School ofChemical and EnvironmentalEngineering,Bejing Technology and Business University,Beijing I0037, China)
Abstract: The optimal conditions of cellulase production by Trichoderma viride through solid state fermentation using distiller's grains as the main material were investigated in this paper. The optimal conditions were as follows: the content of distiller's grains and bran 5 g (7:3) in 250 ml shaking flask, the ratio of material to water 1:1, the initial pH natural, the content of soybean meal 1.0%, the inoculum of spore suspension 1ml, fermentation time 3 d and fermentation temperature 30°C, Under these condition, the activities of carboxymethylcellulase and filter paper activity reached 7105.92 U/g and 1463.97U/g, respectively.
Key words: cellulase; distiller's grains; solid-state fermentation
纤维素酶(cellulase)是降解纤维素生成葡萄糖的一组
博的总称，现已广泛用于食品加工、发酵造、制浆造纸、废水处理及饲料等领域，尤其是利用纤维素生产燃料乙醇是解决世界能源危机的有效途径之一，其应用前景十分广阔。
在纤维素酶的发酵生产中，虽然菌种的产酶性能是决定产量的重要因素，但是其营养条件和发酵工艺条件对产酶的影响也不容忽视。因此，在菌株产酶性能提高的条件下，很有必要对发醇工艺条件进行优化。对于固态发酵而言，除液态发酵中经常考察的碳源、氮源、PH值等营养因素和发酵时间、发酵温度等培养因素外，固液比对酶的分泌也有很大的影响。试验考察了各因素对纤维素静合成的影响，并从而确定最佳的发酵工艺。
1材料与方法 1.1试验菌株
实验室分离得到的绿色木霉。 1.2发酵原料
酒精经自然风于后粉释过40目筛，麸皮粉释过40目筛。 1.3培养基间
发酵产酶培养基：酒糟与麸皮共5g，料：水（营养盐液）=1:3，其中营养盐液为（NH)SO,2%，NaCI0.2%， MgSO,7H,00.05%,KH,PO,0.1%,CaCl, 0.05%,121℃灭菌30min。
斜面培养基：PDA斜面培养基。
收稿日期：2009-12-27
1.4霉曲制备冈
接种1mL孢子悬液于发酵培养基中，30℃培养5d。孢子悬液的制备：将10mL无菌生理盐水加入培养5d~6d的绿色木霉PDA斜面上丙，用灭菌接种环在培养基表面轻轻刮动，使孢子悬浮于液体中，将液体无菌移入试管，在混匀器上混匀成均匀悬浊液，血球计数板计数镜检，调整孢子浓度
为10°个/mL。 1.5粗酶液制备
在三角瓶固体曲中称取发酵料，于50℃烘箱中干燥过夜，称取1g干燥发酵料，加入15mL2%的NaC1溶液，于30℃、 150r/min摇床上振荡提取1.5h，3000r/min离心10min，上清
液即为粗酶液。 1.6酶活测定方法
1.6.1葡萄糖标准曲线制作
根据3，5-二硝基水杨酸比色法测定原理，首先进行葡萄糖标准曲线绘制。其方法：取6只试管，分别按表1顺序加入试剂。
配制的混合液混匀后于沸水浴中煮沸10min，取出置于冷水中冷却至室温，蒸馏水稀释至25mL，混匀后在分光光度计上比色。以0号管为空白，在波长540nm处测定吸光度值。以吸光度值为横坐标，葡替糖含量为纵坐标作葡萄糖标准曲线。
1.6.2CMC酶活测定
于A、B试管中分别加入1%CMC缓冲液1.0mL,A试管
作者简介：武香玉(1984-)，山东泰安人，在读硕士研究生，研究方向为微生物学：陈存社*，教授，通讯作者。