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2016 Vol.35 No.2 Serial No.288
China Brewing
抗单增李斯特菌枯草芽孢杆菌C3增菌培养条件优化
刘宽博2熊利鑫刘慧'张红星
Research Report
（1.北京农学院食品科学与工程学院，微生态制剂关键技术开发北京市工程实验室，食品质量与安全北京实验室北京102206；
2.贵州大学酿酒与食品工程学院贵州贵阳550025）
摘要枯草芽孢杆菌对单增李斯特菌有强烈抑制作用该文对其增菌培养基和培养条件进行优化,为今后将其应用于食品和饲料奠定基础。在对培养基成分和培养条件进行单因素试验的基础上设计5因素4水平正交试验对培养基成分进行优化。结果表明培养基成分优化为葡萄糖1.0%醇母漫粉1.0%NaCI0.5%KH,PO,0.2%MgSO,·7H,O0.2%培养条件优化为pH5.4装液量50mL/250mL，
接种量3%温度37℃，150rmin培养14h在此条件下活菌数可达到7.1x10"CFU/mL比优化前提高了7.89倍关键词枯草芽孢杆菌C3李斯特菌增菌培养基培养条件优化
中图分类号TS201.1
文章编号0254-5071(2016)02-0048-05
doi:10.11882/j.issn.02545071.2016.02.011
Optimization ofproliferationmedium compositionandfermentation conditions of
against Listeria monocytogenes by Bacillus subtilis C3
LIU Kuanbo'2, XIONG Lixia'*, LIU Hui', ZHANG Hongxing
(I.Beijing Engineering Laboratory of Probiotics Key Technology Developmen, Bejing Laboratory of Food Quality and Safety
College ofFood Science and Engineering, Bejing University of Agriculture, Bejing 102206, China;
2.Schoof of Liquor and Food Engineering, Guizhou University, Guiyang 550025, China)
Abstract: Bacillus subtilishas strong inhibitory effect on Listeria monocytogenes, the proliferation medium and culture condition of bacteriocin against L. monocytogenes by B. subtilis C3 were optimized, which will be probably applied in food and feed in the future. On the basis of single factors on the proliferation medium and fermentation conditions, orthogonal experiments with 5 factors and 4 levels was conducted to optimize the number of viable cells of B, subilis C3. The results showed that the optimal medium composition was glucose 1.0%, yeast extract powder 1.0%, NaCI 0.5%, KH,PO, 0.2%, MgSO, - 7H,O 0.2%, and the optimal fementation conditions were initial pH 5.4, fermentation medium with fluid volume of 50 ml/250 ml, inoculum 3%, fermentation temperature 37 °C, shaker speed 160 r/min, fermentation time 14 h. Under the optimized conditions, the number of viable cells of B. subtilis C3 can reach 7.1x10l° CFU/ml, which increased 7.89 times.
Key words: Bacillus subrilis C3; Listeria monocytogenes, proliferation medium; fermentation conditions; optimization
单核细胞增生性李斯特菌（Listeria monocytogenes， LM)简称单增李斯特菌被世界卫生组织(WorldHealth Organization,WHO)列为第四大重要的食源性致病菌()，广泛分布于自然界，可污染多种食品如生家离、家畜肉、海产品和发酵香肠等叫）可导致败血症、脑膜炎以及胃肠炎等围该菌引起的死亡率达到20%～30%M在欧美和日本等国家，单增李斯特菌造成的临床疾病以及食物中毒超过以往占第一位的沙门氏菌。
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是一种“公认安全（generally recognized as safeGRAS）"的食品级有益微生物[,已经广泛应用于防治植物病害、养殖业、环境修复医学方面等领域，但在食品防腐保鲜方面研究报道较少目前,关于细菌素的研究主要集中在乳酸菌上[7],国内关
收稿日期2015-12-07
于枯草芽孢杆菌对单核细胞增生性李斯特菌的抑菌研究报导较少许红岩等从土壤分离的枯草芽孢杆菌的发酵液可有效抑制单核细胞增生性李斯特菌
传统肉制品大多都通过人工合成的化学防属剂来进行保鲜具有一定的安全隐患，使用不当会有一定副效应长期过量摄入会对消费者的身体健康造成一定损害，而且造成环境污染。因此研发高效、安全、环境发好的天然肉制品防腐剂是农产品安全的迫切需要。细菌素是由某些细菌产生的一类抑菌物质,是由细菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的一类多肽类物质。在人体内可降解具有高效、无抗药性、无毒、无残留等优点已成为天然食品生物防腐剂研究与开发的热点[-1]
枯草芽孢杆菌C3产抗单增李斯特菌细菌素理化性
基金项目北京市教委面上项目(KM201410020010）北京市属高等学校高层次人才引进与培养计划（CIT&TCD20140315) 作者简介刘宽博(1993-）女颈士研究生研究方向为食品科学
*通讯作者能利露（1975-）文进师博士研究方向为食品微生物及其代谢产物的利用
?1994-2018 China Academic Journal Electronic Publishing House, AIll rights reserved.http://www.cnki.net ICS 03.120
CCS A 00 3303
温
州 市 地 方 标 准
DB3303/T 084—2025
孤独症儿童康复机构建设与管理规范
2025 - 01 - 17 发布
2025 - 02 - 17 实施
温州市市场监督管理局 发 布
DB3303/T 084—2025
目
次
前言 ................................................................................. II
1 范围 ............................................................................... 1
2 规范性引用文件 ..................................................................... 1
3 术语和定义 ......................................................................... 1
4 基本要求 ........................................................................... 1
5 场地环境 ........................................................................... 1
6 设施设备 ........................................................................... 2
7 人员管理 ........................................................................... 3
8 档案管理 ........................................................................... 4
9 安全与应急管理 ..................................................................... 4
10 评估管理 .......................................................................... 5
11 评价与改进 ........................................................................ 5
附录 A（资料性） 儿童康复登记表 ....................................................... 6
附录 B（资料性） 评估结果分析表 ....................................................... 8
参考文献 .............................................................................. 9
I
DB3303/T 084—2025
前
言
本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由温州市民政局提出并归口。
本文件起草单位：苍南县民政局、苍南县教育局、苍南县市场监督管理局、温州市民政局、温州瓯
海区利宝特殊学校、温州小银河特殊教育培训学校、苍南县灵溪镇天爱康复培训学校、中国计量大学、
浙江炬和科技有限公司。
本文件主要起草人：张敏、陈德育、金理胜、池长仙、陈美茹、朱翼、麻煜臻、陈华鑫、陈辉、洪
倩、李倩。
II
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孤独症儿童康复机构建设与管理规范
1 范围
本文件规定了孤独症儿童康复机构（以下简称“机构”）建设与管理的基本要求、场地环境、设施
设备、人员管理、档案管理、安全与应急管理、评估管理及评价与改进。
本文件适用于为18周岁及以下的孤独症儿童提供康复服务的孤独症儿童非定点康复机构。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，
仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本
文件。
GB/T 10001.1 公共信息图形符号 第1部分：通用符号
GB/T 10001.6 公共信息图形符号 第6部分：医疗保健符号
GB/T 10001.9 公共信息图形符号 第9部分：无障碍设施符号
GB 13495.1 消防安全标志 第1部分：标志
GB/T 18883 室内空气质量标准
GB/T 29315 中小学、幼儿园安全防范要求
GB 50016 建筑设计防火规范
GB 50763 无障碍设计规范
建标165—2013 残疾人康复机构建设标准
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 基本要求
机构应具有独立法人资格，业务范围包括孤独症儿童康复训练服务相关内容，相关证照资质在其
公共区域显要位置上墙公示。
应建立康复训练管理、卫生保健、档案管理、安全与应急管理、人力资源管理等规章制度。
机构法定代表人、负责人、主要投资人等应无违法违规失信等不良记录，且不应侵害儿童合法权
益。
5 场地环境
选址
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5.1.1 机构选址应安全、交通便利，远离污染区、灾害易发区，有毒有害、易燃易爆物品的生产经营
与贮存地和高压线、垃圾站及大型机动车停车场。
5.1.2 机构场地宜设置在公共建筑的地面以上部分，具备防滑、防撞、防水、防电、防火等安全措施。
5.1.3 机构建筑应符合 GB 50016 的要求，机构建筑面积宜不小于 500 ㎡，其中康复功能房使用面积
不少于 70％。
环境
5.2.1 机构的场地环境应满足建标 165—2013 相关要求。环境安静、整洁、优美，物品放置有序，墙
面、地面、桌面、窗台洁净。
5.2.2 机构室内设计应符合儿童生理、心理特点，安全、环保、适用、美观。
5.2.3 机构宜配备必要的无障碍设施，无障碍设施应符合 GB 50763 的要求。
5.2.4 机构应保持室内外环境的清洁卫生，定期消毒、杀菌和灭虫，同时保持室内温度适宜。室内空
气质量应符合 GB/T 18883 的要求。
5.2.5 机构的儿童人均面积宜不少于 10 ㎡。
5.2.6 机构宜有专供儿童使用的卫生间，卫生间面积宜不小于 10 ㎡。
5.2.7 机构公共区域的信息标识应符合 GB/T 10001.1、GB/T 10001.6 和 GB/T 10001.9 的要求。
功能房间
5.3.1 康复功能房宜包括康复个别训练室、康复组别训练室、专用训练室、多功能训练室等功能房间。
5.3.2 康复个别训练室应不少于 2 间，每间使用面积宜不少于 8 ㎡；康复组别训练室应不少于 2 间，
每间使用面积宜不少于 30 ㎡。
5.3.3 专用训练室应不少于 1 间，每间使用面积宜不少于 50 ㎡。
5.3.4 多功能训练室应不少于 1 间，每间使用面积宜不少于 20 ㎡。
5.3.5 机构应设立档案室，使用面积宜不少于 20 ㎡，配备档案柜、监控设施，具备防盗、防火、防潮、
防虫等措施，确保档案安全。
5.3.6 机构宜设立评估室，配备专业评估工具、评估资料、评估档案。
6 设施设备
机构应配备专业康复设备，专业康复设备应包括但不限于以下内容：
—— 康复训练设备；
—— 日常生活活动设备。
康复个别训练室配备的设施，应包括但不限于以下内容：
—— 个别训练桌椅；
—— 康复训练用具。
康复组别训练室配备的设施，应包括但不限于以下内容：
—— 儿童桌椅；
—— 黑（白）板；
—— 多媒体设备；
—— 康复训练用具；
—— 康复组别训练所需的专业用具和器材。
2
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专用训练室配备的设施，应包括但不限于以下内容：
—— PT 软垫；
—— 木条台；
—— 滑板车；
—— 大滑板；
—— 吊筒；
—— 钻滚筒；
—— 羊角球；
—— 大龙球；
—— 布袋跳；触觉球；
—— 按摩地垫；
—— 按摩大龙球；
—— 平衡木；
—— 平衡踩踏车万象组合包；
—— 精细运动训练用玩具。
多功能训练室配备的设施，应包括但不限于以下内容：
—— 接待用桌椅、电脑、电脑桌椅；
—— 供家长学习、借用的康复普及读物。
7 人员管理
机构应配备机构现场主要管理人员、康复教师、康复指导师，宜配备康复评估师、保育员、社会
工作者等机构人员。
机构人员应满足以下要求：
—— 具备康复服务意识，注重仪容仪表，耐心热情，尊重、关心儿童；
—— 自觉遵循孤独症康复服务专业伦理；
—— 具有健康证明，且每年至少体检一次并记录。
机构现场主要管理人员应具有大专及以上学历，具有 2 年以上的机构现场管理工作经验，宜获得
教师资格证和医学、康复、教育或心理类专业相关资质证书。
康复教师应具有大专及以上学历，宜取得“教师资格证”或从事智障、孤独症康复的资格证书，
负责对儿童理解能力、运动能力、社交能力、情绪障碍和语言沟通能力等方面的能力进行康复训练，与
儿童数量的配比应不低于 1：5。
康复指导师应有相关专业大专及以上学历，负责康复训练分析、康复训练总结、儿童康复训练的
信息收集、整理、建档等工作。
康复评估师应具有大专及以上学历，接受过孤独症儿童专业评估培训，负责对儿童进行全面能力
发展的评估，确定其具体能力发展阶段，制定个别化的康复训练服务方案。
保育员应接受过幼儿教育职业培训，宜取得保育员资格证。
社会工作者应具有大专及以上学历，宜取得心理咨询师证或社会工作者职业资格证书，具有一定
的心理咨询工作经验。负责儿童心理健康咨询。
机构应定期开展针对员工的培训，培训情况建立档案，包含培训人员姓名、职务、职称、培训时
间、培训单位、培训内容、培训证书、培训成绩、培训效果等情况。
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8 档案管理
儿童档案
8.1.1 机构应为儿童建立个人档案，档案形式可包括文字、图像、影音资料。档案的内容包括但不限
于以下内容：
—— 基础资料。基本信息、诊断证明、能力检测、儿童康复登记表（见附录 A）等；
—— 协议资料。康复服务协议、保险协议等；
—— 评估资料。标准化评估报告、评估结果分析表（见附录 B）等；
—— 康复训练资料。康复训练方案、训练记录、康复训练总结等；
—— 其他应当记录的内容。
8.1.2 与儿童相关的档案应保存至其离开机构 5 年。
员工档案
8.2.1 机构员工档案的内容应包括但不限于以下内容：
—— 入职登记表；
—— 学历证明；
—— 身份证复印件；
—— 相关证书；
—— 健康证；
—— 劳动合同；
—— 无犯罪证明；
—— 保密协议。
8.2.2 机构应为家长培训及家庭康复指导建立档案，包含培训时间、地点、培训人员、培训签到单、
培训照片等资料。
9 安全与应急管理
安全管理
9.1.1 机构的安全技术防范应符合 GB/T 29315 中的要求。
9.1.2 机构应建立健全安全管理制度。安全管理制度应包含康复安全、消防安全、食品安全、用水用
电、交通安全、网络安全等内容。
9.1.3 机构应明确安全管理部门，且有明确的责任人，负责日常的安全管理工作。日常安全制度宜包
含但不限于以下内容：
—— 儿童接送制度；
—— 访客管理制度；
—— 儿童信息管理制度；
—— 康复操作规范。
9.1.4 机构应在公共区域、重点部位、出入口及儿童活动区域安装紧急报警装置、监控系统，监控录
像资料保存不少于 30 天。
9.1.5 应配置消防设施和器材，设置消防安全标志并符合 GB 13495.1 的要求，定期对消防设施和器材
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进行检查和维护保养，确保消防设施和器材的完好、有效。
9.1.6 应定期开展安全检查，对发现的问题有记录、有追踪、有整改措施。
9.1.7 电器在使用过程中发生事故应立即切断电源，并向安全主管部门报告，采取有效措施。
9.1.8 儿童出现康复意外（如癫痫发作、外伤、坠床、摔伤等情况）时应立即中止康复训练。
应急管理
9.2.1 机构应制定自然灾害、事故灾难、公共卫生、社会安全等应急处置预案并定期演练。
9.2.2 应急处置预案的主要内容应包括：组织机构、人员、物资、事件等级、报告程序、事故处置方
法、快速疏散方法、紧急救护措施、现场保护、清理和善后工作等。
9.2.3 机构每年应至少进行一次自然灾害、事故灾难、公共卫生、社会安全的集中应急演练，有相应
工作计划和记录，针对演练中的问题，修改和完善应急预案。
10 评估管理
应由康复评估师采用《孤独症儿童心理教育评核（PEP-3）》《言语行为里程碑评估及安置程序
（VB-MAPP）》《孤独症儿童发展评估表（C-PEP）》等对儿童进行评估。
每年评估宜不少于 4 次。
评估档案包括但不限于以下内容：
—— 基本信息；
—— 测评量表；
—— 评估结果分析表；
—— 评估过程动态变化图表。
11 评价与改进
评价方式
机构可采用满意度调查、自查评定、召开家属或监护人会议、上门家访等方式对服务进行评价。
改进
应针对评价结果进行分析、归纳、总结，针对存在的问题制定改进措施并实施。
5
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附 A A A
录
（资料性）
儿童康复登记表
儿童康复登记表见表A.1。
表A.1 儿童康复登记表
儿童 信息 姓名 性别 出生日期
临床诊断 诊断时间
诊断机构 建档时间
户籍所在地
现居住地址 家庭电话
家庭 情况 父亲姓名 年 龄 文化 程度 工作单 位/职务 联系 电话
母亲姓名
其他成员
家庭模式 大家庭（ ） 核心家庭（ ） 单亲家庭（ ） 寄养家庭（ ）
居住社区 花园、小区（ ） 独家居住（ ） 租住房（ ）
教养方式 教育型（ ） 娇惯型（ ） 放任自流型（ ）
语言环境 普通话（ ） 地方方言 （ ）
抚养/带教人 父母（ ） 爷爷奶奶（ ） 外公外婆（ ） 保姆（ ） 其他（ ）
儿童 自身 情况 介绍 妊娠史 母妊娠年龄 胎教情况 先兆流产
心理状态 生理状况 环境状况
分娩史 足 月 产 程 分娩方式
早产或过期 窒 息 出生体重
儿童 自身 情况 介绍 生长 发育史 母乳喂养 人工喂养 高热抽搐
会抬头时间 会翻身时间 会爬行时间
会笑时间 会坐的时间 会走时间
会发音时间 说单词时间 说词语时间
既往病史 （心脏病、癫痫等） 过敏史 （含药物、食物等）
特殊的饮食习惯 特殊的睡眠时间
最喜欢 的活动 室内 最爱吃的零食
室外 最常玩的玩具
独处时常做事情 经常一起的玩伴
语言表达能力 认知/认字能力
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表A.1 儿童康复登记表（续）
儿童 自身 情况 介绍 数 数 穿 衣 服
吃 饭 大 小 便
特殊 行为 伤害自己/他人
逃 跑
其 他
目前主要障碍情况
既往康复教育情况
说明 本人 是孩子之父（母），如实反映了孩子的病情和行为状况，如有隐瞒，愿承担相应责任。
填表时间： 填表人： 注册日期： 审核人：
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附 B B B
录
（资料性）
评估结果分析表
评估结果分析表B.1。
表B.1 评估结果分析表
儿童姓名： 性别： 出生日期： 年 月 日
领域 能力分析 训练目标
优势：
感知觉
弱势：
粗大运动 优势：
弱势：
精细动作 优势：
弱势：
语言与沟通 优势：
弱势：
认知 优势：
弱势：
社会交往 优势：
弱势：
生活自理 优势：
弱势：
情绪与行为 优势：
弱势：
家长建议与希望
分析人员签名
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参 考 文 献
[1] 中华人民共和国未成年人保护法（中华人民共和国主席令第24号）
[2] 中华人民共和国残疾人保障法（中华人民共和国主席令第16号）
[3] 预防残疾和残疾人康复条例（中华人民共和国国务院令第703号）
[4] 中华人民共和国教育法（中华人民共和国主席令第80号）
[5] 中华人民共和国民办教育促进法（中华人民共和国主席令第24号）
[6] 中华人民共和国教师法（中华人民共和国主席令第18号）
[7] 国家卫生健康委办公厅关于印发0～6岁儿童孤独症筛查干预服务规范（试行）的通知（国卫
办妇幼发〔2022〕12号）
[8] 民政部关于贯彻落实<国务院关于建立残疾儿童康复救助制度的意见> 的通知（民函〔2018〕
154号）
[9] 省残联等六部门单位关于推进全省残疾儿童定点康复机构规范化提升建设的通知（浙残联发
〔2021〕9 号）
[10] 浙江省残疾儿童定点康复机构建设与服务评估标准（2021年版）
[11] 温州市民政局关于组织实施 2024年“添翼计划”项目的通知（温民福〔2024〕17号）
9