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2010 No.12 Serial No.225
China Brewing
响应面优化壳聚糖酶产生菌培养基组分研究
吴楠，祖国仁*,孙浩，宋晓晨
（大连工业大学生物工程学院，辽宁大连116034）
Research Report
摘要：对筛选出的充聚糖酶生产菌进行了系列单因素试验。在此基础上，通过响应面分析法得出培养基最佳组成：葡萄糖添加量
3.0%，壳案糖添加量1.939%，蛋白陈添加量0.171%，培养基初始pH值为7.44。经过优化，壳聚糖酶活可提高至0.354U/mL。关键词：壳聚糖酶：喇应面：优化；曲霉
中图分类号：TQ920.1
文献标识码：A
文章编号：0254-5071(2010)12-0094-04
Optimization of culture conditions of chitosanase-producing microorganism by response surface analysis
WU Nan, ZU Guoren*,SUN Hao, SONG Xiaochen
(School ofBiologicalEngineering,Dalian Polytechnic University,Dalian I16034, China)
Abstract: The optimal fermentation medium of chitosanase-producing microorganisms was investigated through single factor experiments and re-sponse surface analysis. The optimal medium was as follow: glucose concentration 3.0%, Chitosan 1.939%, peptone 0.171% and initial pH 7.44.Un-der these conditions, the activity of chitosanase was 0_354U/ml.
Key words: chitosanase; response surface analysis; optimization; Aspergillus
壳聚糖经过酶解后，得到由2~10个氨基葡糖通过β-1， 4-糖苷键连接而成的低聚糖，称为壳寡糖（chitooligosac charides)。壳寡糖的水溶性更好，分子量更低，易被生物体吸收，光毒尤变异，具有很多独特的生理特性（如脱乙
收稿日期：2010-08-15
酰度较大的壳寡糖具有清除自由基的能力)；壳寡糖还具有增强人体免疫力的作用间，有希望在改善食品结构、提高食品保水性能方面有重要应用。近年来，在农业、提高免疫力间、抗肿瘤图、调节肠道菌群网、化妆品等领域应用
作者简介：吴楠(1985-)，辽宁沈阳人，在读硕士研究生，主要从事微生物及其活性物质方面的研究工作；祖国仁*，教投，通讯作者。
450 400(U.mL") 350
00E 250 PFA酶/ 200
so 0
A,A,A, B,B,B, C,C,C, D,D,D, 图6四因末不同水平试验结果的关系
Figure6.Relationsbetweendifferentlevelsandtestresultoffour
factors
从表4可知，各因素对酶活的影响大小依次是为发酵时间>起始pH值>碳氮比>装液量。A,B,C,D,为最佳组合，即起始pH值5.0、装液量125mL、发酵时间为4d和碳氮比为7:1。
根据衣4可以确定，理论上的最优处理组合是A,B,C,D，这个组合与6号试验获得的最优组合A,B,C,D,相同。因此可以确定最优组合为A,B,C,D，即起始pH值为5.0、装液量125mL、发酵时面为4d和碳氮比为7:1。
从表5可叮知，C(碳氮比)影响极显著，A(起始pH影响显著，B(发醇酵时间)影响不显著。各因素对酶活的影响大小依次是：碳氮比、起始pH值、发酵时间。A,B,C,为最佳组合，即起始pH值5.0、发酵时间为4d和碳氮比为7:1。
表5正交试验方差分析
Table 5. Variance analysis of the orthogonal test
变异来源
A B c 误差总和
3结论
平方和 26014.78 4656.78 105232.96 3596.30 139500.81
自由度 2 2 N 2 8
均方 13007.39 6 52616.48 1798.15
F值 7.23* 1.29 29.26**
d 0.1215 0.4358 0.0330
最优混合菌的组合为D+S,s(1:1)。最佳发酵产酶条件为接种量8%，250mL三角瓶装液量125mL，碱处理秸杆和麸皮为碳源(2:3)，蛋白陈和硫酸铵（1:1)为氮源，碳氮比 7:1，起始pH值为5.0，发酵温度28℃、发酵时间4d.FPA酶活达到535.08U/mL，分别是出发菌黑曲需D的4.45倍、芽饱杆
菌S的4.61倍。参考文献：
[1]杜文娟，正家东，侯红萍.纤维系酶的制备及其应用研究[]酸酒， 2007 (3) :27-28.
[2]刘薇，徐尔尼，徐颗宜，等，申珠霉与链霉菌泥合发醇产纤维系酶条件的研究[],中国酸造，2008(14)：26-29.
[3]阅泊旭，齐飞，张颗舒，等.纤维素酶分子结构和功能研究进展[] 生物化学和生物物理进展[1],1999,26(3)：233-237
[4]张英,筷红萍.微生物混合发醇生产纤维素酶的研究进展[]酿酒, 2010,37 (3) ; 20-23.