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2011 No.5 Serial No.230
China Brewing
原生质体融合法构建-癸内酯高产菌株
仲惠，赵玉萍，李文谦，李超
（淮阴工学院生命科学与化学工程学院，江苏淮安223001）
Research Report
摘要：该文确定了亲本原生质体制备的最佳条件为：采用0.3%β-殖基乙醇和0.1mol/LEDTA-Na,的复合预处理剂于28℃预处理10min，高渗稳定剂为1mol/LpH6.0的山梨醇，蜗牛酶浓度为2%、酶解温度为35℃、时间为2h。经过原生质体融合实验，成功
获得了多株高产菌株，其中以QY30-内酯产量最高为1.4852g/L，比亲本Y1-2提高了2.82倍。该菌株遗传性状基本稳定。关键调：耶氏酵母；原生质体：融合;-癸内酯
文章编号：02545071(2011)05010204
中图分类号：Q813.2
文献标识码：A
Construction of high yield -decalactone strains by protoplast fusion technique
ZHONG Hui, ZHAO Yuping' , LI Wenqian, LI Chao
(School of Lijfe Science and Chemical Engineering, Hluaiyin Institute of Technology, Huaian 223001, China)
Abstract:The optimal condlitions for protoplast preparation of parent strain Yarroweie lipolytica were determined as fllows: pretreatment with rea gent of 0. 3% β-mercaptoethanol and 0. 1mol/L EDTA-Na, at 28°C for 10min; sorbitol as hyperoemotic stabilizer with Imol/L at pH 6. 0, hydrol-npod ooeo eon edod ouoaa ss a o easeeus% ss
tion strain, which could reach 1. 4852g/L, increased by 2. 82 times oompared with parent strsin Y1-2. Strain QY 30 was genetic stable. Key words; Yarrowia lipolytics; protoplast; fusion; -decalactone
原生质体融合（protoplastfusion）是20世纪六七十年代发展起来的基因重组技术。自1960年法国的Barski研究小组在混合培养2种不同类型的动物细胞时发现了自发融合现象后），原生质体融合技术不断发展，成为遗传育种的重要手段。Y-类内酯(GDL)广泛存在于水果、肉制品和日常食品中["]，以其诱人的桃香和低香气阀值的特性而得到香料工业的普遍应用")。目前，-内酯普遍采用化学法进行生产，生物法生产的-癸内酯因具有天然等同活性而得到广泛关注，常选用耶罗威亚酵母（Yarrowialipolytica）假丝酵母（Candida lipolytica）、毕赤酵母（Pichialipolytica）和锁掷胞酵母（Sporidioboluslipolytica）等菌株145)进行研究，
收稿日期：2011-0125
但因其产量较低仍未得到广泛工业推广。本试验采用2株耶氏酵母为亲本，通过原生质体融合技术旨在获得GDL高产菌株，为后继试验提供研究基础。
1材料与方法 1.1菌种
亲本Q12和Y1-2，均为耶氏醇母（Yarronia lipolytica），
均由实验室筛选并经过鉴定。 1.2培养基
(1)种子培养基：葡萄糖1.5%，MgS0,·7H,00.075%，酵母膏 0.3%,(NH,),HPO,1.3%,KH, PO, 0. 6%, TW-80 0.2%,pH值为7.5。
基金项目：准安市工业科技计划资助项目（HAC09040），江苏省优秀青年骨于教师项目
作者简介：仲惠（1988-），女，江苏扬州人，本科生，研究方向为生物技术；赵玉萍，，副教授，通讯作者。
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