JF
天津市地方计量技术规范
JJF(津)04—2020
实时荧光定量PCR仪校准规范
Calibration Specification for Real-Time Fluorescent Quantitative
Polymerase Chain Reaction Analyzer
2020-05-18发布
2020-06-30实施
天津市市场监督管理委员会 发布 JJF(津)04—2020
实时荧光定量PCR仪
校准规范
JJF(津)04-2020
Calibration Specification for Real-Time Fluorescent Quantitative Polymerase Chain
ReactionAnalyzer
归口单位：天津市市场监督管理委员会
主要起草单位：天津市计量监督检测科学研究院
参加起草单位：军事医学研究院医学计量测试研究站
国家体育总局体育科学研究所
北京林电伟业电子技术有限公司
本规范委托天津市计量监督检测科学研究院负责解释 JJF(津)04—2020
本规范主要起草人：
李时鑫 （天津市计量监督检测科学研究院）余松林
（天津市计量监督检测科学研究院）
（天津市计量监督检测科学研究院）（天津市计量监督检测科学研究院）
田昀魏树龙
参加起草人：
王喆 （天津市计量监督检测科学研究院）张辰 （军事医学研究院医学计量测试研究站）宋雪阳 （国家体育总局体育科学研究所）李征 （北京林电伟业电子技术有限公司） JE（津）042020
目
录
引言
(III) (1)
范围 2 引用文件 3 术语 3.1 聚合酶链反应 3.2 聚合酶链反应分析仪 3.3 实时荧光定量聚合酶链反应分析仪 3.4 温度示值误差 3.5 温度均匀度 3.6 温度最大过冲量 3.7 平均升温速率 3.8 平均降温速率 3.9 荧光染料 3.10 荧光强度精密度 3.11 值循环数 3.12 阅值循环数精密度 3.13 熔解温度 3.14 熔解曲线 3.15 熔解温度漂移 3.16 峰值强度 3.17 通道峰值强度一致性 3.18 线性灵敏系数 3.19 熔解温度比 4 概述 5 计量特性 6 校准条件 6.1 环境条件 I
A
..(1) (1)
(1) . (1) (1) (1) .... (1) . (1)
(2) (2)
17
(2) (2) .(2)
17
(2) (2) (2)
.
(2) (2) . (2) (3) (3) . (3) (3) (4) (4)
6 1a
± 2 JJF（津）042020
6.2 测量标准和其它设备
(4) (5) (5) (5) (11) (12) (13) (16)
校准项目和校准方法 7.1 校准项目 7.2 校准方法
7
校准结果表达. 9 复校时间间隔，附录A 荧光定量PCR仪校准原始记录参考格式附录B 荧光定量PCR仪校准证书内页参考格式附录C 温度示值误差和阅值循环数示值误差测量结果的不确定度评定示例.....。（17）
8
II JJF（津）04—2020
引言
本规范依据JJF1071-2010《国家计量校准规范编写规则》和JJF1001-2011《通用计量术语及定义》的要求编写，依据JJF1059.1-2012 2《测量不确定度评定与表示》给出了温度和阈值循环数示值误差测量结果的不确定度评定示例。计量特性等主要参考了YY/T1173-2010《聚合酶链反应分析仪》。
本规范为首次发布，
II JJF（津）04—2020
实时荧光定量PCR仪校准规范
1范围
本规范适用于实时荧光定量聚合酶链反应分析仪的校准 2引用文件
本规范引用下列文件： YY/T1173-2010聚合酶链反应分析仪凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；凡是不注日期的引用文
件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本规范。 3术语
YY/T1173-2010中界定的及以下术语和定义适用于本规范。 3.1聚合酶链反应polymerasechainreaction,PcR。
聚合酶链反应是一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的方法，由变性一退火一延伸三个基本反应步骤构成。（YY/T1173-2010） 3.2聚合酶链反应分析仪（polymerasechainreactionanalyzer,PCRanalyzer）
基于PCR技术原理，模拟DNA或者RNA的复制过程，在模板、引物、聚合酶等存在的条件下，特异扩增已知序列，对其进行检测分析的仪器设备。（YY/T1173- 2010) 3.3实时荧光定量聚合酶链反应分析仪real-timefluorescentquantitativePcR analyzer,RT-PCR analyzer。
可以实现DNA或者RNA的扩增，并根据PCR过程中荧光染料释放的荧光强度的变化对扩增产物量进行定量分析的仪器设备。 3.4温度示值误差temperatureindicationerror
在温度技术指标校准程序中，实时荧光定量PCR分析仪均热块设定温度与所有采样测量孔温度平均值之差。 3.5温度均匀度temperatureuniformity
在温度技术指标校准程序中，实时荧光定量PCR分析仪均热块所有采样测量孔温度平均值的最大值与最小值之差。 3.6温度最大过冲量temperaturemaximumovershoot
1 JJF（津）04—2020
在温度技术指标校准程序中，荧光定量PCR仪均热块温度升高或降低至设定值过程中，所有采样测量孔温度超出设定值的最大幅度。 3.7平均升温速率mean heatingrate
在温度技术指标校准程序中，实时荧光定量PCR仪均热块升温过程中，所有采样测量孔单位时间上升的平均温度值。 3.8平均降温速率mean cooling rate
在温度技术指标校准程序中，实时荧光定量PCR仪均热块降温过程中，所有采样测量孔单位时间下降的平均温度值。 3.9荧光染料fluorochrome
短波长激发光激发后，能够释放出可见光的试剂。（YY/T1173-2010） 3.1o荧光强度精密度precisionoffluorescenceintensity
均热块测量孔在同一荧光条件下荧光强度重复测量值的一致性。（YY/T1173- 2010) 3.11阅值循环数thresholdcycle
均热块测量孔内的荧光信号到达指数扩增时经历的循环周期数。主要的计算方式是以扩增过程前3到15个循环的荧光值的10倍标准差为阈值，当荧光值超过阈值时的循环数则为阈值循环数。（YY/T1173-2010） 3.12阈值循环数精密度precisionofthresholdcycle
均热块测量孔在同一荧光条件下阈值循环数重复测量的一致性。 3.13熔解温度（melttemperature，Tm)
全总DNA双螺旋结构降解一半时的温度称为熔解温度。 3.14熔解曲线meltcurve
PCR过程中均热块测量孔的荧光强度（纵坐标）与温度（横坐标）形成的曲线。 3.15熔解温度漂移melttemperaturebias
实时荧光定量PCR仪校准时，根据熔解曲线计算的熔解温度值与光学模拟器熔解温度设定值之差。 3.16峰值强度peakintensity
熔解曲线上熔解温度对应的荧光强度。
3.17通道峰值强度一致性（channelpeakintensityconsistency，CPHC) 2 JF
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2020-06-30实施
天津市市场监督管理委员会 发布 JJF(津)04—2020
实时荧光定量PCR仪
校准规范
JJF(津)04-2020
Calibration Specification for Real-Time Fluorescent Quantitative Polymerase Chain
ReactionAnalyzer
归口单位：天津市市场监督管理委员会
主要起草单位：天津市计量监督检测科学研究院
参加起草单位：军事医学研究院医学计量测试研究站
国家体育总局体育科学研究所
北京林电伟业电子技术有限公司
本规范委托天津市计量监督检测科学研究院负责解释 JJF(津)04—2020
本规范主要起草人：
李时鑫 （天津市计量监督检测科学研究院）余松林
（天津市计量监督检测科学研究院）
（天津市计量监督检测科学研究院）（天津市计量监督检测科学研究院）
田昀魏树龙
参加起草人：
王喆 （天津市计量监督检测科学研究院）张辰 （军事医学研究院医学计量测试研究站）宋雪阳 （国家体育总局体育科学研究所）李征 （北京林电伟业电子技术有限公司） JE（津）042020
目
录
引言
(III) (1)
范围 2 引用文件 3 术语 3.1 聚合酶链反应 3.2 聚合酶链反应分析仪 3.3 实时荧光定量聚合酶链反应分析仪 3.4 温度示值误差 3.5 温度均匀度 3.6 温度最大过冲量 3.7 平均升温速率 3.8 平均降温速率 3.9 荧光染料 3.10 荧光强度精密度 3.11 值循环数 3.12 阅值循环数精密度 3.13 熔解温度 3.14 熔解曲线 3.15 熔解温度漂移 3.16 峰值强度 3.17 通道峰值强度一致性 3.18 线性灵敏系数 3.19 熔解温度比 4 概述 5 计量特性 6 校准条件 6.1 环境条件 I
A
..(1) (1)
(1) . (1) (1) (1) .... (1) . (1)
(2) (2)
17
(2) (2) .(2)
17
(2) (2) (2)
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(2) (2) . (2) (3) (3) . (3) (3) (4) (4)
6 1a
± 2 JJF（津）042020
6.2 测量标准和其它设备
(4) (5) (5) (5) (11) (12) (13) (16)
校准项目和校准方法 7.1 校准项目 7.2 校准方法
7
校准结果表达. 9 复校时间间隔，附录A 荧光定量PCR仪校准原始记录参考格式附录B 荧光定量PCR仪校准证书内页参考格式附录C 温度示值误差和阅值循环数示值误差测量结果的不确定度评定示例.....。（17）
8
II JJF（津）04—2020
引言
本规范依据JJF1071-2010《国家计量校准规范编写规则》和JJF1001-2011《通用计量术语及定义》的要求编写，依据JJF1059.1-2012 2《测量不确定度评定与表示》给出了温度和阈值循环数示值误差测量结果的不确定度评定示例。计量特性等主要参考了YY/T1173-2010《聚合酶链反应分析仪》。
本规范为首次发布，
II JJF（津）04—2020
实时荧光定量PCR仪校准规范
1范围
本规范适用于实时荧光定量聚合酶链反应分析仪的校准 2引用文件
本规范引用下列文件： YY/T1173-2010聚合酶链反应分析仪凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；凡是不注日期的引用文
件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本规范。 3术语
YY/T1173-2010中界定的及以下术语和定义适用于本规范。 3.1聚合酶链反应polymerasechainreaction,PcR。
聚合酶链反应是一种对特定的DNA或RNA片段在体外进行快速扩增的方法，由变性一退火一延伸三个基本反应步骤构成。（YY/T1173-2010） 3.2聚合酶链反应分析仪（polymerasechainreactionanalyzer,PCRanalyzer）
基于PCR技术原理，模拟DNA或者RNA的复制过程，在模板、引物、聚合酶等存在的条件下，特异扩增已知序列，对其进行检测分析的仪器设备。（YY/T1173- 2010) 3.3实时荧光定量聚合酶链反应分析仪real-timefluorescentquantitativePcR analyzer,RT-PCR analyzer。
可以实现DNA或者RNA的扩增，并根据PCR过程中荧光染料释放的荧光强度的变化对扩增产物量进行定量分析的仪器设备。 3.4温度示值误差temperatureindicationerror
在温度技术指标校准程序中，实时荧光定量PCR分析仪均热块设定温度与所有采样测量孔温度平均值之差。 3.5温度均匀度temperatureuniformity
在温度技术指标校准程序中，实时荧光定量PCR分析仪均热块所有采样测量孔温度平均值的最大值与最小值之差。 3.6温度最大过冲量temperaturemaximumovershoot
1 JJF（津）04—2020
在温度技术指标校准程序中，荧光定量PCR仪均热块温度升高或降低至设定值过程中，所有采样测量孔温度超出设定值的最大幅度。 3.7平均升温速率mean heatingrate
在温度技术指标校准程序中，实时荧光定量PCR仪均热块升温过程中，所有采样测量孔单位时间上升的平均温度值。 3.8平均降温速率mean cooling rate
在温度技术指标校准程序中，实时荧光定量PCR仪均热块降温过程中，所有采样测量孔单位时间下降的平均温度值。 3.9荧光染料fluorochrome
短波长激发光激发后，能够释放出可见光的试剂。（YY/T1173-2010） 3.1o荧光强度精密度precisionoffluorescenceintensity
均热块测量孔在同一荧光条件下荧光强度重复测量值的一致性。（YY/T1173- 2010) 3.11阅值循环数thresholdcycle
均热块测量孔内的荧光信号到达指数扩增时经历的循环周期数。主要的计算方式是以扩增过程前3到15个循环的荧光值的10倍标准差为阈值，当荧光值超过阈值时的循环数则为阈值循环数。（YY/T1173-2010） 3.12阈值循环数精密度precisionofthresholdcycle
均热块测量孔在同一荧光条件下阈值循环数重复测量的一致性。 3.13熔解温度（melttemperature，Tm)
全总DNA双螺旋结构降解一半时的温度称为熔解温度。 3.14熔解曲线meltcurve
PCR过程中均热块测量孔的荧光强度（纵坐标）与温度（横坐标）形成的曲线。 3.15熔解温度漂移melttemperaturebias
实时荧光定量PCR仪校准时，根据熔解曲线计算的熔解温度值与光学模拟器熔解温度设定值之差。 3.16峰值强度peakintensity
熔解曲线上熔解温度对应的荧光强度。
3.17通道峰值强度一致性（channelpeakintensityconsistency，CPHC) 2