1S71.040.10 CCSN53
中华人民共和国国家标准
GB/T42753—2023
实时荧光定量PCR仪性能评价通则
General prinsiples for performange cvaluation of guantitative real-tine
polymerase chain reaction amalyzer
2023-05-23发布
2023-12-01实
国家市场监督管理总局
国家标准化管理委员会 发布 GB/T42753-2023
自 次
#宵 1 雅 2 规花性引用文件 3 术语和定义 4 编游语 6 要求
5.1 工作条件 5.2 外藏 5.3资金饼 5.4 环境造应性 5.5老磁效容性 5.6性做要求多评价方送 6.1 外观检查 6.2安全性试验 6.3环境适度性试验 3.4电微兼容性式验 8.5性能试验？评价报告附豪A（资料性》仅婚升降湿错环程摩和样本激试孔位排布 A.1开降摄不程序 A激魔控制性能试验的孔位排布
10
11
11 11 11
A3蒙光检刻性能试验的孔登推布我4整机性能试验的汽位排布财录B（料性）宽光参比搭的制备方法最C（宽料性》 两期教据妞蓄异的新方法 C1两银数摄随著美异的剪斯方法. 心21分布分位数液 C3&分布分位数表附录D（资料性） 报告格式示销参梦文献
13 14 1.5 15
18
16 7
13
4 GB/T42753--2023
前言
本文件接照GB/T1.1-2020标瘦化工作导财第1部分：新推化文件的结稳箱刻草享摄雕的通定越草。
请注家本文件的基盘内容可能沙及专利。本文件的发布机构不承担识制专利的真任。 本文件由中国机城工业联合会摄出。 本文件由金国工业谨器测量控制和自锁化标准化捷术菱员会（5AC/TC124）妇口。 本文件慈草单位：中国检验校康科学研究院，北京市科学技术研究院分新溪城研究所（北京市理化
分析测试中心）、苏州百群基固技术有程公司，中国计量科学研究院、上游作计置测试技水研究院，西安天燃科技有疆公司、苏州雅管生器技术股有限公司、上海宏石医疗科技有限公司、桃州健目科控股有限公司、服融监团（北京）科技有限饪公司，杭州品格科学仪器有限公司·圣游生物科技服份有限公瓦，安图实融仪器（郊州）有限公司、深圳华大智连科技服份有限公司，上海料源电子料技有限公司、安慧瓷微科技股份有限公司，票龙汇智计股检定微试研党院、藏成长（北京生餐技术有限公简、中国疾病酒防控制中心蓄养与健衰所，游尼源试集团股份有限公司，甘案国研检整检测有限公司。
本文件主要超草人：邹明题，社美红，尊蒸，车团纳、李警曼、齐小花，高运华，文，王开、大江、 任秀军、察茶、离览爆、王粹、阮亮降、萃中平、养建翼、李添、郭卷红、邓晨光、丁疼馆、刘兴学、李修、 赵炫，孙服漆、未爱、张堂、陈尔医。
1 GB/T 42753—2023
实时费光定量PCR仪性能评价通则
1巍团
本文规定了实时光定益PCE仅的要求，评价方法和评价报告。 本文件造用于实时荧光定量PCR仪的性能评价：包活医用临床诊断用费光定PCK仅和-般分
析用获光定盘PCR仪。其他基于象合降链式反应原理定量或定性分析范核晚片段的装爱参考本文件找行。
规范性引用文件
2
下残文件中的内容遗过文中的规范性用而构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的用文件：仅该日期对的版本道用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（您括所有的健敢单）适用于本文件。
GB/T11606 分新仪群环境试险方店 GB/T14710医用电器环境费求及试验方装 GB/T18268.1 测量，控制和实整室用的电设备：电微兼容性要求第1部分：遥用要求 GB/T18268.26 测量控制和实验室用的电设备电磁兼容性要求第26部分：特殊要求体外
诊新(IVD）医疗设备
GB/T34065--2017分新仪器的安全要求 GB/T34797 核酸琴急探针纤质意技术婴求 GB/T35542TDNA巍合路 YY0648测盈、控制剂实教案用电气设餐的安全求第2-101梯分：体外诊断（IVD）医用设备
的专用要求
3术语和定息
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
实光定墨CR技 quantitative real-tine polymerase chain reachitn analyzer 基于案合障链式度应原理，通过蕴度变化插环登序进行核爱片没的体外扩增，网时对舒环过程中
荧光信导进行实谢采集羽处源，定量成定性分析肥核慰兴没的仪器。 3.2
Ct i Cycle tareshold vahne 每个PCR反应管内的费光信号达到设定的解值时所经历的籍环欢教。
3.3
恒漫阶载 thermostatieprtceas 仅题孔位平均摄度达到设没定值（储签土05七以内）且保持谈温度的一度时间。
1 GB/T 42753-2023
3.4
温庭波动壳tenperaturefiuctgation 收器便摄阶股中，孔设的题度变化餐庭。
3.5
度烤句度tageratuewaiformity 夜器值摄阶发中，各孔位之间的度一教性
3.6
装光服康斯复生fhoncentrepeatabitg 在桶尚盗度和荧光条件下，设馨孔位的费光通健复格潮值的一裂怪。
3.7
美光娱宠的与康fuareentnifority 在相间激度和荧光条件下，仪器各孔位之的荧光强疫检测值的一致性。
4酒
下列缩略语用子本文件。 DNA：m气核精#酸DeoryriboaaleiAcid FC豪合链式友座PolynrieChainRencticn
5要家
复工作鉴件
实附变光定量PCR假（以下简家夜攀在下刻茶件下应能正瓷工作，环摄度15~30 16）相对湿斑：不大于80%。 e> 铁电电源：待合仪器锁定供电电压和额率，电电压装动不超出土V交游频率的变化在
土1H国内。 工作环地光影响夜器性能的机械摄动和神击。
工作环境无影购仪器性能的电磁械干扰
5.2外观
仅器外观应庭妞下爱求 8） 外观平蒸、清滋发丽染、黛展无明显利落，擦节，露磨及污
所有绪牌及标志前久精晰，内容特合相关法摄，标准的要求：所有质件无松裁：各种覆节件灵活，功能正痛：
）掌祥衰面无馨城！ > 仅器可拆部分能无摩碍项拆装。
5.3宽金性
-~整分析用荧光定爱PCF（以下尚称分析仪器）分新仪馨威摄足GB/T34065--2017的要求，医用临床诊断用费光庭量PC假以下情医用仪器》医用仅器还应满是YY064%的要家， 2 GB/T 42753--2023
5.4环魔诺虚性
分折权器度锅足GB/T11608的要求，医用仅摄还应满是GB/T14710的要求， 5.5 电热装容性
分析仅应满起GBT18268.1的要求，感用收仪器还应截点GB/T18268.28的要求， 5.6 性熊求 5.6.1 温安控制性能 5.6.1.1 升湿漆率
在5090C范圆内平均开蕴速率不小于1.5/8 5.6.1.2降速率
在50CS0C滋周内：平地体滋选享房不小于1.5C/8 5.6.1.3 源度玻动皮
在恒想阶教，潮度的被动应不样过士02。 5.6.1.4 温度示保差
实际源度与设置退度之差应不翘过土0.5， 5.6.1.5 温魔均勾废
在恒温度，加热模换不同孔位同一时刻最大值与最小值之差应不大子1℃。 5.6.1.8 温度持续时闯误差
遵度的实脉持端时闻与设置谢间的误热应不超过士5。 5.6.2荧光检谢性能 5.6.2.1 欢光照度盘复性
每费光摄放的载孔换光强度道就检燃，拍对标活锁整应不大于2% 5.6.2.2 爱光照广均勾度
每个费光通遵的孔间费光强度，招对标准偏登康不大子5。 5.8.2.3 荧光蜜瘦疑性
荧光拿比物质各求度的费光摄度值与帮释比需的线性国扫相关系数）成不低于990。 5.6.3發机维能 5.6.3.1不舞道爽光干扰
仪器应舞定相成居标通道装果为阳性或给出Ct值，其能避道给结第为阴性家来检出：
3 GB/T42753—2023
5.6.3.2仪器线性
各浓度梯度的DNA标准物质测得的Ct值与浓度对数值的线性回归相关系数（r）的绝对值应不低于0.990。 5.6.3.3DNA浓度区分度
置信水平99.9%时能有效分辨不同浓度DNA样本（浓度相差不大于2倍）的差异。 5.6.3.4定量重复性
相同DNA样本在不同孔位测得的浓度对数值的相对标准偏差应不大于2%。 5.6.3.5定量示值误差
测得的DNA标准物质浓度对数值与标称浓度的对数值的相对误差应不超过士15%。 5.6.3.6稳定性
相同DNA样本在同一仪器上多次测得的Ct值的相对偏差应不大于5%。
6评价方法
6.1外观检查
以目视和手感进行检查。
6.2 安全性试验
分析仪器标识检查、接触电流试验、介电强度试验、保护接地电阻的试验方法按GB/T34065一 2017第5章、6.2、6.3、6.4执行；医疗仪器按YY0648相应试验方法执行。 6.3 环境适应性试验
分析仪器按GB/T11606相应试验方法执行，医疗仪器按GB/T14710相应试验方法执行。 6.4 4电磁兼容性试验
分析仪器按GB/T18268.1相应试验方法执行，医疗仪器按GB/T18268.26相应试验方法执行。 6.5 5性能试验 6.5.1 温度控制性能 6.5.1.1 仪器和材料
至少包括下列仪器和材料。 a) 计量标准专用测温仪：可测量温度范围0℃～120℃，分辨力0.01℃，示值误差在士0.1℃范
围内，采集频率不小于每秒一次。 矿物油等导热介质。
b) GB/T42753—2023
6.5.1.2试验步骤
按仪器说明书预热，将计量标准专用测温仪的温控探头表面涂抹适量的导热介质，放入待测样本反
应孔中。测试孔位在仪器中均匀分布（包含各方向边缘和中间的孔位，孔位排布参照图A.1)；当仪器少于8个孔时，应全部检测；当仪器具有8个孔至48个孔时，应检测不少于8个；当仪器具有48个孔以上时，应检测不少于12个。
开启测温仪，确认运行正常。参照仪器说明书设置并运行45℃（1min）、95℃（1min）的循环程序，3次循环；再运行45℃（1min）、72℃（1min）、95℃（1min）的循环程序，5次循环。用计量标准专用测温仪记录循环程序运行时相应的温度和时间。
当仪器温控模块为分区设置，各独立控温区域单独测试，孔位分布均按上述要求执行。 6.5.1.3升温速率的计算
在45℃（1min）、95℃（1min）循环程序的第3次循环升温过程中，计算各测试孔位每秒的温度平均值。取最接近50℃的温度点，记为T.取最接近90℃的温度点，记为T，得出T.、T，以及T.到达 T。的时间t1，按照公式(1)计算平均升温速率。
Vi = Tb- T.
(1)
t1
式中： V1平均升温速率，单位为摄氏度每秒(℃/s)； T—各孔位温度平均值中最接近90℃的温度点，单位为摄氏度（℃）； T。一各孔位温度平均值中最接近50℃的温度点，单位为摄氏度（℃）； t1T.到达T,的时间，单位为秒(s)。
6.5.1.4降温速率的计算
在45℃（1min）、95℃（1min)循环程序的第3次循环降温过程中，计算各测试孔位每秒的温度平均值。取最接近90℃的温度点，记为T。，取最接近50℃的温度点，记为Ta，得出T。、T。以及T。到达 Ta的时间t2，按照公式(2)计算平均降温速率(V2)。
T.-Ta
V, =
..(2)
t2
式中： V2—平均降温速率，单位为摄氏度每秒(℃/s)； T。—各孔位温度平均值中最接近90℃的温度点，单位为摄氏度(℃)； T。各孔位温度平均值中最接近50℃的温度点，单位为摄氏度（℃)； t2—T。到达Ta的时间,单位为秒(s)。
6.5.1.5温度波动度的计算
在45℃（1min）、72℃（1min）、95℃（1min）循环程序中，分别在3个温度点进入恒温阶段15s后开始计时，统计30s内同一孔位的最高温度和最低温度，其差值的一半为该测试孔位的温度波动度，按照公式(3)计算。
AT, = Tamur _ Tann
...(3)
2
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