ICS75.160.20 E 31
GP
中华人民共和国国家标准
GB/T259632010
含脂肪酸甲酯中间馏分芳烃含量的测定
示差折光检测器高效液相色谱法 Determination of aromatic hydrocarbon types in middle distillates containing fatty acid methyl esters-High performance liquid chromatography method
withrefractiveindexdetection
2011-05-01实施
2011-01-10发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准化管理委员会 发布
数码防优 GB/T25963—2010
前言
本标准修改采用欧洲标准EN12916：2006《石油产品中间馏分芳烃含量测定法示差折光检测器高效液相色谱法》。
本标准根据EN12916：2006重新起草。 为了适合我国国情，本标准在采用EN12916：2006时进行了修改。本标准与EN12916：2006的结
构差异为：本标准13.1第1段的内容对应EN12916：2006第1章第3段的内容；其余章条结构无差异。 本标准与EN12916：2006的主要差异如下：
将EN12916：2006中第1章范围中的警告内容置于本标准的开始部分，以符合我国标准编写规定；将EN12916:2006第2章中的引用标准EN14214《车用燃料用于柴油机的脂肪酸甲酯（FAME）要求和测试方法》，用我国相应国家标准GB/T20828《柴油机燃料调合用生物柴油（BD100）》代替，以方便使用。
本标准还作了如下编辑性修改：
删除了EN12916：2006中目次和前言的内容。 本标准的附录A是资料性附录。 本标准由全国石油产品和润滑剂标准化技术委员会（SAC/TC280）提出。 本标准由全国石油产品和润滑剂标准化技术委员会石油燃料和润滑剂分技术委员会（SAC/
TC280/SC1)归口。
本标准起草单位：中国石化集团洛阳石油化工工程公司。 本标准主要起草人：林玉、白正伟、李译。 GB/T25963—2010
含脂肪酸甲酯中间馏分芳烃含量的测定
示差折光检测器高效液相色谱法
警告：本标准涉及某些危险的材料、操作和设备，但是并未对与此有关的安全问题提出建议。用户在使用本标准前，应建立适当的安全防护措施，并制订相应的规章制度。 1范围
本标准规定了用高效液相色谱法测定含脂肪酸甲酯（FAME）体积分数小于5%的柴油和馏程在 150℃～400℃的石油馏分中单环芳烃、双环芳烃和三环+芳烃含量的方法。多环芳烃含量由双环芳烃和三环+芳烃含量加和求得，总芳烃含量由单环芳烃、双环芳烃和三环+芳烃含量加和求得。
本标准适用于测定含脂肪酸甲酯（FAME）体积分数小于5%的柴油和馏程在150℃400℃的石油馏分中单环芳烃、双环芳烃和三环+芳烃含量。在试样单环芳烃含量（质量分数）为6%~30%，双环芳烃含量（质量分数）为1%~10%，三环+芳烃含量（质量分数）为0~2%，多环芳烃含量（质量分数）为 1%~12%，总芳烃含量（质量分数）为7%～42%的范围，进行了方法精密度确定。试样中含有硫、氮和氧的化合物可能对测定结果有影响。单烯烃对测定结果无影响，但是共轭二烯烃和共轭多烯烃，可能对测定结果有影响。
注1：在本标准中，用%（质量分数）表示质量百分含量，%（体积分数）表示体积百分含量。 注2：通常，芳烃类型是根据它们在特定的液相色谱柱上的洗脱性质与模型化合物相比较来定义的，单环芳烃、双环
芳烃和三环+芳经的含量用外标物的工作曲线进行定量。本标准中单环芳烃、双环芳烃和三环+芳烃各用一个单独的芳烃化合物作为外标物，这些化合物可能代表（也许不能代表）样品中存在的芳烃。其他方法对每种芳烃类型的定义和定量与本方法可能不同。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T4756石油液体手工取样法（GB/T47561998，eqvISO3170：1988） GB/T12806—199实验室玻璃仪器单标线容量瓶（GB/T12806—1991，cqvISO1042:1983） GB/T20828柴油机燃料调合用生物柴油（BD100） SY/T5317石油液体管线自动取样法（SY/T5317—2006，ISO3171：1988，IDT）
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3. 1
非芳烃 non-aromatichydrocarbon 定义为在特定的极性柱上，保留时间比大多数单环芳烃短的化合物。
3.2
单环芳烃mono-aromatichydrocarbon MAH 定义为在特定的极性柱上，保留时间比大多数非芳烃长但是比大多数双环芳烃短的化合物。
1 GB/T25963—2010
3.3
双环芳烃di-aromatichydrocarbon DAH 定义为在特定的极性柱上，保留时间比大多数单环芳烃长但是比三环+芳烃短的化合物。
3.4
三环+芳烃 trit-aromatic hydrocarbon T+AH 定义为在特定的极性柱上，保留时间比大多数双环芳长但是比菌短的化合物。
3.5
多环芳烃 polycyclicaromatichydrocarbo POLY-AH 定义为双环芳烃（DAH
+芳烃T+AH)的和。
3.6
CHINA
total aroma ydrocarbon 定义为单环芳烃MAH）、双环芳烃（DAH、三环芳烃（T十AH的和。 注：已公开和未公 的# 据表明各种类型的经类主要组成如下！ a) 非芳烃 非环烧 经和环烷烃 （链烷烃、环烧烃）、单烯烃（如果存在）； b) 单环芳 米 四氢蔡和更 高的环烷基苯（如八氢菲）、噻分、苯乙烯、共轭多烯烃： d) 三环
总芳烃
SE 降经酯交换反应制得的脂肪酸甲酶,以 BD100表示。
c) 双环芳
联苯、、荔、 范、苯并膳盼 苯并壁库、花、荧葱、、苯井革 举并惠
3.7
R
脂肪酸甲酯 江 acidmethyl ester FAME 电动植物油脂
D B
4方法概要
已知量的试样用正风烧稀释后，取一定量的试样溶液注人装有极性柱的高效液相色谱系统。极性柱对非芳烃几乎没有亲和流对芳烃有很好的选择性。因此，芳烃与非芳经被分开，并根据环的结构分离成单环芳烃、双环芳烃和外芳烃的谱带。
色谱柱连接到示差折光检测器上，当组分被洗脱出来后进行检测。从检测器产生的电信号被数据处理器持续监测。由试样溶液中势烃产生的信号大小与预先测定的标准潜液的信号进行对比，计算出单环芳烃、双环芳烃和三环+芳烃含量。多环芳烃含量由双环芳烃和之环+芳烃含量加和求得，总芳烃含量由单环芳烃、双环芳烃和三环+芳烃含量加和求得。 5 试剂和材料
警告：在处理芳烃化合物时应该戴防护手套。 注：尽量采用能得到的最高纯度的标准试剂，液相色谱级试剂可以从供应商处购买。
5.1环已烷：纯度（质量分数）不低于99%。
注：环已烷可能含有苯杂质，
5.2正庚烷：高效液相色谱（HPLC)级，作为液相色谱流动相。
注1：流动相的批与批之间水分含量、黏度、折光指数和纯度的变化可能会导致不可预测的柱行为，对流动相脱水
（如通过活化的5A分子筛）和过滤有助于降低微量杂质的影响。
注2：推荐对流动相脱气，可以采用氧气吹扫、真空脱气或者超声波搅动。脱气不好可能导致负峰。
2 GB/T25963—2010
5.3 十二烷基苯，纯度（质量分数）不低于98%。 5.4邻二甲苯：纯度（质量分数）不低于98%。 5.5六甲基苯：纯度（质量分数）不低于98%。 5.6萘：纯度（质量分数）不低于98%。 5.7：纯度（质量分数）不低于98%。 5.8 菲：纯度（质量分数）不低于98%。 5.9 二苯并噻盼：纯度（质量分数）不低于95% 5.109-甲基葱：纯度（质量分数）不低于95%。 5.11 菌：纯度（质量分数）不低于95%。 5.12 脂肪酸甲酯，符合GB/T20828的要求。 6仪器 6.1 液相色谱仪：可以使流动相以0.5mL/min~1.5mL/min的流速进人系统、在第8章规定的条件下精密度优于0.5%、波动小于满偏刻度1%的任何高效液相色谱仪都可以使用。 6.2进样系统：能够注入10μL试样溶液，重复性优于1%的进样系统都可以使用。
注1：试样溶液和标准溶液推荐采用相同的进样量。只要操作正确，满足重复性要求的手动和自动进样系统（可以
是部分充满进样环也可以是全部充满进样环都可以使用。当采用部分充满进样方式时，推荐进样量要小于环体的一半。当采用全部充满进样方式时，至少充满进样环6次才能获得好的结果。 进样系统的重复性可以通过至少注射4次系统校正标准溶液（见8.3)，然后比较它们的峰面积求得。
注2：进样量可以不是10μL（一般是3μL～20μL)，只要满足进样重复性要求、示差折光检测器的灵敏度和线性要
求（见9.4）和柱分辨率要求（见8.9），都可以使用。
6.3试样过滤器：如果需要（见10.1），推荐采用孔径不大于0.45μm的微过滤器除去试样溶液中的颗粒，要求微过滤器对烃类溶剂是情性的。 6.4柱系统：只要满足8.6、8.7和8.9规定的分辨率要求，任何填充有氨基键合（或者极性氨基/氰基键合）的硅胶固定相、粒径为3μm、5μm或者10um的高效液相色谱不锈钢柱都可以使用。参考附录A来选用合适的柱子。 6.5温度控制：高效液相色谱柱温箱要求能够在20℃~40℃范围内保持恒温（土1℃），可以采用加热块、空气循环或者其他恒温方法，如恒温实验室。
注：示差折光检测器对流动相温度的突然或者逐渐变化都很敏感，建议采取相应的措施保持高效液相色谱系统温
度恒定。根据固定相对温度进行预先进行优化。
6.6示差折光检测器：折光指数检测范围在1.3~1.6内、在测定范围内线性响应并能输出合适的信号到数据系统的示差折光检测器都可以使用。
注：如果示差折光检测器有单独的温控装置，将它设定到与柱温箱相同的温度。 6.7计算机或积分仪：只要与示差折光检测器相匹配、最小采集速率1Hz、能测量峰面积和保留时间的数据系统都可以使用。数据系统要能进行如基线校正和重新积分等后处理基本功能。
注：推荐采用能进行自动峰检测和识别并可以从峰面积计算试样浓度的数据系统，但这不是必须的。 6.8容量瓶：容量为10mL和100mL，准确度满足GB/T12806规定的B级要求。 6.9分析天平：感量为0.1mg。
7取样
用于实验室分析的试样要有代表性，除非在产品标准中另有说明，试样应根据GB/T4756或 SY/T5317或者等同的方法取得。
3 GB/T25963—2010
8仪器准备
8.1根据相应的手册连接（见图1）液相色谱仪（6.1）、进样系统（6.2）、色谱柱（6.4）、示差折光检测器（6.6）、积分仪（6.7）。如果有柱温箱（6.5），色谱柱要装在柱温箱中。进样阀要与试样溶液的温度相同，通常是室温。
注：为保持系统稳定，建议对液相色谱仪以及组件进行定期维护。过滤器、过滤器板、注射器针头、进样阀的泄漏或
者部分堵塞都会引起流动相的流速不稳或者进样系统的进样量重复性变差。
2
6
3
1- 泵；
CHINA
O
进样系统；柱温箱；
2- 3- 4 色谱柱： 5 示差折光 测器 6
S S 山
数据处理
图 液相色谱示意图
8.2调节流动相 速在0.8mL/mm至1.2mL/min之间并保持恒定，保证示差折光检测器的参考
池内充满流动相（ EE 如有温控装置，保持色谱柱的温度和示差折光检测器的 温度稳定。 注：保持参考池内充满流动相，可以使基线漂移最小。有两种合适的方法：1）在分析前使流动相通过参考池，然后
液体挥发（参 0 2)持续向参考池以恒定的流速补充流动相以补偿落剂的挥发。预先优化补充流速以便使由 8.3配制系统校正标准格液1(SCS1)：称量1.0g三0.1g环已烷（5.1)、0.g±0.01g十二烷基苯
封闭以防止军发
温度或压力梯度（参考池或者分析池，取决于检测器类型）引起的参考池和分析池的不匹配可以把补充流速设置为分析流速的十分之一来满足要求。
最小。对一些拉
(5.3)、0.5g±0.05g 苯（5 .1g±0.
甲基苯（5. 5）、0.1g±0.0g茶（5.6）、0.05g±
g士0.005g9-甲基葱（5.10），精确到0.9001 3，置于100mL容量瓶
0.005g二苯并噻盼（5. 中，用超声波的方法使所有组分洛解于环已烷和邻二甲苯中，用正庚烷稀释至刻度。
注：如果容量瓶密封较好，且在令情条件下保存（如冰箱中），系统校正标准溶液SCS1可以使用一年。 8.4配制系统校正标准溶液2(SCS2）：称量0.4g±0.1gPAME（5.12、0.04g士0.01g菌（5.11)，精确到0.0001g，置于100mL容量瓶中，用正庚烷（5.2）补充至刻度，用超声波的方法并保持温度在 35℃溶解标准溶液，确保组分全部溶解，没有残留
注1：25min可以确保组分全部溶解。 注2：如果容量瓶密封较好，且在冷暗条件下保存（如冰箱中），系统校正标准溶液SCS2可以使用一年。
8.5操作条件稳定后（基线水平后），向色谱进样系统注入10μL系统校正标准溶液SCS1（8.3），记录谱图，确保在分析周期内，基线漂移不应超过环已烷峰高的0.5%。
注：如果超出此值，可能是色谱柱和示差折光检测器的温控有间题，和（或）色谱柱上的极性材料流失。 8.6确保系统校正标准溶液SCS1的组分按照以下顺序流出：环已烷、十二烷基苯、邻二甲苯、六甲基苯、萘、二苯并噻吩和9-甲基葱。 8.7确保所有组分达到基线分离（见图2）。
4 GB/T259632010
0 0 y'
35.00 30.00 25.00
20.00 度 15.00 10. 00
4
0
2
0
5. 00 0. 00
00
4.005.006.007.008.009.0010.001.00120013.0014.0015.00
时间入
环已烷；十二烷基邻二甲苯六甲基茶；
CHINA
2
5
S
6- 二苯并
9-甲基
T
山 R
图2系统校正标准溶液色谱图
8.8 测量环己 二烷基苯、邻二甲苯六甲基苯、、苯并噻盼和9-甲基离的保留时间。 8.9 确保环己完和邻二甲苯的分辨率在5.7~10之间（见11.2）。 8.10 用11.3条所述的方法确定切割时间。
n
8.11 确保系统收正 标准溶液SCS28.4）样品均匀，向色谱进样系统注入10μLSCS2标准溶液，使菌刚好在FAME的单 个峰前流出或者与其一起流出
确保菌的保留时间比9-甲基葱长注：开始使用新的色谱挂色谐柱使用一段时间活性 下降或者要分析含FAME的试样时，先用系统校正标准溶液 SCS2 检查色谱柱的性能
A
9校正 9.1 参照表1的浓度配制标准溶液A、B.C和D.称量标准物质，精确到0.0001g，并置于100mL容量瓶中，用正庚烷（5.2）稀释至刻度
S
注：如果容量瓶（如100mL容量瓶）密封较好，且在冷暗条件下保存（如冰箱中），标准溶液可以使用六个月。 9.2操作条件稳定后（见8.4），进10μL标准溶液A，记录谱图，测量各个标准物质的峰面积（见图3）。
表1标准溶液的浓度
邻二甲苯 g/100mL
菲 g/100mL
标准物质
g/100mL
A B c D
4.0 1. 0 0.25 0.05
2.0 1.0 0.25 0.02
0.4 0, 2 0.05 0. 01
5 GB/T25963—2010
250.00 200.00
10
4
2 921 *8-
Au 150.00 /3/ 100. 00
3
0 '6
50. 00
0.00
D
2.00 4. 00 6.00 8.00 10. 00 12.00 14:00 16.00 18.00 20.00
时间/min
1 邻二甲苯； 2——苏； 3—菲。
图3标准溶液A色谱图
9.3用标准溶液B、C、D重复9.2的步骤，如果标准溶液D中的菲面积太小不能准确测量，制备一个新的、含有较高浓度菲的标准溶液D+（如0.02g/100mL）。 9.4用各个芳烃标准物质（邻二甲苯、荔、菲）的浓度（g/100mL）对峰面积作图。工作曲线应为直线，相关系数要大于0.999，截矩要小于士0.01g/100mL。
注：可以用计算机或数据处理系统来制作工作曲线。 10试验步骤 10.1称量0.9g~1.1g（精确到0.001g）试样，置于10mL容量瓶中，用正庚烷（5.2）稀释至刻度。用力摇动使试样溶液混合均匀后，放置10min，如果有必要，过滤除去试样溶液中的颗粒物（6.3）。
有些试样的芳烃浓度超出工作曲线范围，要根据情况配制更浓（如2g/10mL）或更稀（如0.5g/ 10mL)的试样。
注：如果采用了与上述不同的稀释倍数，可能会使保留时间和算出的含量改变。 10.2当操作条件稳定（见8.4）且与制作工作曲线时的条件相同时（第9章），向色谱进样系统注人 10μL试样溶液（10.1），采集数据。 10.3正确区分单环芳烃、双环芳烃和三环+芳烃：
单环芳烃的保留时间在点和t。点之间（见11.3）；双环芳烃的保留时间在te点和ta点之间（见11.3）：三环+芳烃的保留时间在t点和t.点之间（见11.3）。
10.4从非芳烃峰的开始处（图4中A，t）到三环+芳烃峰的刚结束处（图4中E，t。）作基线，在E处信号回到基线值（等于经过补偿基线漂移后A点处的值，8.5）。
如果试样溶液不含双环芳烃和（或）三环+芳烃，E点应该前移，只要信号回到基线值（等于经过补偿基线漂移后A点处的值，8.5）。 10.5从非芳烃峰和单环芳烃峰的峰谷处（图4中B，t）作基线的垂线（10.4），如果有很多峰谷，选择离最近的那个（见11.3）。 10.6从单环芳烃蜂和双环芳烃峰的峰谷处（图4中C，t）作基线的垂线（10.4），如果有很多峰谷，选择离1。最近的那个（见11.3）。 10.7从双环芳烃峰和三环+芳烃峰的峰谷处（图4中D，ta）作基线的垂线（10.4)，如果有很多峰谷，选择离t最近的那个（见11.3）。 6 ICS75.160.20 E 31
GP
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GB/T259632010
含脂肪酸甲酯中间馏分芳烃含量的测定
示差折光检测器高效液相色谱法 Determination of aromatic hydrocarbon types in middle distillates containing fatty acid methyl esters-High performance liquid chromatography method
withrefractiveindexdetection
2011-05-01实施
2011-01-10发布
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
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数码防优 GB/T25963—2010
前言
本标准修改采用欧洲标准EN12916：2006《石油产品中间馏分芳烃含量测定法示差折光检测器高效液相色谱法》。
本标准根据EN12916：2006重新起草。 为了适合我国国情，本标准在采用EN12916：2006时进行了修改。本标准与EN12916：2006的结
构差异为：本标准13.1第1段的内容对应EN12916：2006第1章第3段的内容；其余章条结构无差异。 本标准与EN12916：2006的主要差异如下：
将EN12916：2006中第1章范围中的警告内容置于本标准的开始部分，以符合我国标准编写规定；将EN12916:2006第2章中的引用标准EN14214《车用燃料用于柴油机的脂肪酸甲酯（FAME）要求和测试方法》，用我国相应国家标准GB/T20828《柴油机燃料调合用生物柴油（BD100）》代替，以方便使用。
本标准还作了如下编辑性修改：
删除了EN12916：2006中目次和前言的内容。 本标准的附录A是资料性附录。 本标准由全国石油产品和润滑剂标准化技术委员会（SAC/TC280）提出。 本标准由全国石油产品和润滑剂标准化技术委员会石油燃料和润滑剂分技术委员会（SAC/
TC280/SC1)归口。
本标准起草单位：中国石化集团洛阳石油化工工程公司。 本标准主要起草人：林玉、白正伟、李译。 GB/T25963—2010
含脂肪酸甲酯中间馏分芳烃含量的测定
示差折光检测器高效液相色谱法
警告：本标准涉及某些危险的材料、操作和设备，但是并未对与此有关的安全问题提出建议。用户在使用本标准前，应建立适当的安全防护措施，并制订相应的规章制度。 1范围
本标准规定了用高效液相色谱法测定含脂肪酸甲酯（FAME）体积分数小于5%的柴油和馏程在 150℃～400℃的石油馏分中单环芳烃、双环芳烃和三环+芳烃含量的方法。多环芳烃含量由双环芳烃和三环+芳烃含量加和求得，总芳烃含量由单环芳烃、双环芳烃和三环+芳烃含量加和求得。
本标准适用于测定含脂肪酸甲酯（FAME）体积分数小于5%的柴油和馏程在150℃400℃的石油馏分中单环芳烃、双环芳烃和三环+芳烃含量。在试样单环芳烃含量（质量分数）为6%~30%，双环芳烃含量（质量分数）为1%~10%，三环+芳烃含量（质量分数）为0~2%，多环芳烃含量（质量分数）为 1%~12%，总芳烃含量（质量分数）为7%～42%的范围，进行了方法精密度确定。试样中含有硫、氮和氧的化合物可能对测定结果有影响。单烯烃对测定结果无影响，但是共轭二烯烃和共轭多烯烃，可能对测定结果有影响。
注1：在本标准中，用%（质量分数）表示质量百分含量，%（体积分数）表示体积百分含量。 注2：通常，芳烃类型是根据它们在特定的液相色谱柱上的洗脱性质与模型化合物相比较来定义的，单环芳烃、双环
芳烃和三环+芳经的含量用外标物的工作曲线进行定量。本标准中单环芳烃、双环芳烃和三环+芳烃各用一个单独的芳烃化合物作为外标物，这些化合物可能代表（也许不能代表）样品中存在的芳烃。其他方法对每种芳烃类型的定义和定量与本方法可能不同。
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB/T4756石油液体手工取样法（GB/T47561998，eqvISO3170：1988） GB/T12806—199实验室玻璃仪器单标线容量瓶（GB/T12806—1991，cqvISO1042:1983） GB/T20828柴油机燃料调合用生物柴油（BD100） SY/T5317石油液体管线自动取样法（SY/T5317—2006，ISO3171：1988，IDT）
3术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3. 1
非芳烃 non-aromatichydrocarbon 定义为在特定的极性柱上，保留时间比大多数单环芳烃短的化合物。
3.2
单环芳烃mono-aromatichydrocarbon MAH 定义为在特定的极性柱上，保留时间比大多数非芳烃长但是比大多数双环芳烃短的化合物。
1 GB/T25963—2010
3.3
双环芳烃di-aromatichydrocarbon DAH 定义为在特定的极性柱上，保留时间比大多数单环芳烃长但是比三环+芳烃短的化合物。
3.4
三环+芳烃 trit-aromatic hydrocarbon T+AH 定义为在特定的极性柱上，保留时间比大多数双环芳长但是比菌短的化合物。
3.5
多环芳烃 polycyclicaromatichydrocarbo POLY-AH 定义为双环芳烃（DAH
+芳烃T+AH)的和。
3.6
CHINA
total aroma ydrocarbon 定义为单环芳烃MAH）、双环芳烃（DAH、三环芳烃（T十AH的和。 注：已公开和未公 的# 据表明各种类型的经类主要组成如下！ a) 非芳烃 非环烧 经和环烷烃 （链烷烃、环烧烃）、单烯烃（如果存在）； b) 单环芳 米 四氢蔡和更 高的环烷基苯（如八氢菲）、噻分、苯乙烯、共轭多烯烃： d) 三环
总芳烃
SE 降经酯交换反应制得的脂肪酸甲酶,以 BD100表示。
c) 双环芳
联苯、、荔、 范、苯并膳盼 苯并壁库、花、荧葱、、苯井革 举并惠
3.7
R
脂肪酸甲酯 江 acidmethyl ester FAME 电动植物油脂
D B
4方法概要
已知量的试样用正风烧稀释后，取一定量的试样溶液注人装有极性柱的高效液相色谱系统。极性柱对非芳烃几乎没有亲和流对芳烃有很好的选择性。因此，芳烃与非芳经被分开，并根据环的结构分离成单环芳烃、双环芳烃和外芳烃的谱带。
色谱柱连接到示差折光检测器上，当组分被洗脱出来后进行检测。从检测器产生的电信号被数据处理器持续监测。由试样溶液中势烃产生的信号大小与预先测定的标准潜液的信号进行对比，计算出单环芳烃、双环芳烃和三环+芳烃含量。多环芳烃含量由双环芳烃和之环+芳烃含量加和求得，总芳烃含量由单环芳烃、双环芳烃和三环+芳烃含量加和求得。 5 试剂和材料
警告：在处理芳烃化合物时应该戴防护手套。 注：尽量采用能得到的最高纯度的标准试剂，液相色谱级试剂可以从供应商处购买。
5.1环已烷：纯度（质量分数）不低于99%。
注：环已烷可能含有苯杂质，
5.2正庚烷：高效液相色谱（HPLC)级，作为液相色谱流动相。
注1：流动相的批与批之间水分含量、黏度、折光指数和纯度的变化可能会导致不可预测的柱行为，对流动相脱水
（如通过活化的5A分子筛）和过滤有助于降低微量杂质的影响。
注2：推荐对流动相脱气，可以采用氧气吹扫、真空脱气或者超声波搅动。脱气不好可能导致负峰。
2 GB/T25963—2010
5.3 十二烷基苯，纯度（质量分数）不低于98%。 5.4邻二甲苯：纯度（质量分数）不低于98%。 5.5六甲基苯：纯度（质量分数）不低于98%。 5.6萘：纯度（质量分数）不低于98%。 5.7：纯度（质量分数）不低于98%。 5.8 菲：纯度（质量分数）不低于98%。 5.9 二苯并噻盼：纯度（质量分数）不低于95% 5.109-甲基葱：纯度（质量分数）不低于95%。 5.11 菌：纯度（质量分数）不低于95%。 5.12 脂肪酸甲酯，符合GB/T20828的要求。 6仪器 6.1 液相色谱仪：可以使流动相以0.5mL/min~1.5mL/min的流速进人系统、在第8章规定的条件下精密度优于0.5%、波动小于满偏刻度1%的任何高效液相色谱仪都可以使用。 6.2进样系统：能够注入10μL试样溶液，重复性优于1%的进样系统都可以使用。
注1：试样溶液和标准溶液推荐采用相同的进样量。只要操作正确，满足重复性要求的手动和自动进样系统（可以
是部分充满进样环也可以是全部充满进样环都可以使用。当采用部分充满进样方式时，推荐进样量要小于环体的一半。当采用全部充满进样方式时，至少充满进样环6次才能获得好的结果。 进样系统的重复性可以通过至少注射4次系统校正标准溶液（见8.3)，然后比较它们的峰面积求得。
注2：进样量可以不是10μL（一般是3μL～20μL)，只要满足进样重复性要求、示差折光检测器的灵敏度和线性要
求（见9.4）和柱分辨率要求（见8.9），都可以使用。
6.3试样过滤器：如果需要（见10.1），推荐采用孔径不大于0.45μm的微过滤器除去试样溶液中的颗粒，要求微过滤器对烃类溶剂是情性的。 6.4柱系统：只要满足8.6、8.7和8.9规定的分辨率要求，任何填充有氨基键合（或者极性氨基/氰基键合）的硅胶固定相、粒径为3μm、5μm或者10um的高效液相色谱不锈钢柱都可以使用。参考附录A来选用合适的柱子。 6.5温度控制：高效液相色谱柱温箱要求能够在20℃~40℃范围内保持恒温（土1℃），可以采用加热块、空气循环或者其他恒温方法，如恒温实验室。
注：示差折光检测器对流动相温度的突然或者逐渐变化都很敏感，建议采取相应的措施保持高效液相色谱系统温
度恒定。根据固定相对温度进行预先进行优化。
6.6示差折光检测器：折光指数检测范围在1.3~1.6内、在测定范围内线性响应并能输出合适的信号到数据系统的示差折光检测器都可以使用。
注：如果示差折光检测器有单独的温控装置，将它设定到与柱温箱相同的温度。 6.7计算机或积分仪：只要与示差折光检测器相匹配、最小采集速率1Hz、能测量峰面积和保留时间的数据系统都可以使用。数据系统要能进行如基线校正和重新积分等后处理基本功能。
注：推荐采用能进行自动峰检测和识别并可以从峰面积计算试样浓度的数据系统，但这不是必须的。 6.8容量瓶：容量为10mL和100mL，准确度满足GB/T12806规定的B级要求。 6.9分析天平：感量为0.1mg。
7取样
用于实验室分析的试样要有代表性，除非在产品标准中另有说明，试样应根据GB/T4756或 SY/T5317或者等同的方法取得。
3 GB/T25963—2010
8仪器准备
8.1根据相应的手册连接（见图1）液相色谱仪（6.1）、进样系统（6.2）、色谱柱（6.4）、示差折光检测器（6.6）、积分仪（6.7）。如果有柱温箱（6.5），色谱柱要装在柱温箱中。进样阀要与试样溶液的温度相同，通常是室温。
注：为保持系统稳定，建议对液相色谱仪以及组件进行定期维护。过滤器、过滤器板、注射器针头、进样阀的泄漏或
者部分堵塞都会引起流动相的流速不稳或者进样系统的进样量重复性变差。
2
6
3
1- 泵；
CHINA
O
进样系统；柱温箱；
2- 3- 4 色谱柱： 5 示差折光 测器 6
S S 山
数据处理
图 液相色谱示意图
8.2调节流动相 速在0.8mL/mm至1.2mL/min之间并保持恒定，保证示差折光检测器的参考
池内充满流动相（ EE 如有温控装置，保持色谱柱的温度和示差折光检测器的 温度稳定。 注：保持参考池内充满流动相，可以使基线漂移最小。有两种合适的方法：1）在分析前使流动相通过参考池，然后
液体挥发（参 0 2)持续向参考池以恒定的流速补充流动相以补偿落剂的挥发。预先优化补充流速以便使由 8.3配制系统校正标准格液1(SCS1)：称量1.0g三0.1g环已烷（5.1)、0.g±0.01g十二烷基苯
封闭以防止军发
温度或压力梯度（参考池或者分析池，取决于检测器类型）引起的参考池和分析池的不匹配可以把补充流速设置为分析流速的十分之一来满足要求。
最小。对一些拉
(5.3)、0.5g±0.05g 苯（5 .1g±0.
甲基苯（5. 5）、0.1g±0.0g茶（5.6）、0.05g±
g士0.005g9-甲基葱（5.10），精确到0.9001 3，置于100mL容量瓶
0.005g二苯并噻盼（5. 中，用超声波的方法使所有组分洛解于环已烷和邻二甲苯中，用正庚烷稀释至刻度。
注：如果容量瓶密封较好，且在令情条件下保存（如冰箱中），系统校正标准溶液SCS1可以使用一年。 8.4配制系统校正标准溶液2(SCS2）：称量0.4g±0.1gPAME（5.12、0.04g士0.01g菌（5.11)，精确到0.0001g，置于100mL容量瓶中，用正庚烷（5.2）补充至刻度，用超声波的方法并保持温度在 35℃溶解标准溶液，确保组分全部溶解，没有残留
注1：25min可以确保组分全部溶解。 注2：如果容量瓶密封较好，且在冷暗条件下保存（如冰箱中），系统校正标准溶液SCS2可以使用一年。
8.5操作条件稳定后（基线水平后），向色谱进样系统注入10μL系统校正标准溶液SCS1（8.3），记录谱图，确保在分析周期内，基线漂移不应超过环已烷峰高的0.5%。
注：如果超出此值，可能是色谱柱和示差折光检测器的温控有间题，和（或）色谱柱上的极性材料流失。 8.6确保系统校正标准溶液SCS1的组分按照以下顺序流出：环已烷、十二烷基苯、邻二甲苯、六甲基苯、萘、二苯并噻吩和9-甲基葱。 8.7确保所有组分达到基线分离（见图2）。
4 GB/T259632010
0 0 y'
35.00 30.00 25.00
20.00 度 15.00 10. 00
4
0
2
0
5. 00 0. 00
00
4.005.006.007.008.009.0010.001.00120013.0014.0015.00
时间入
环已烷；十二烷基邻二甲苯六甲基茶；
CHINA
2
5
S
6- 二苯并
9-甲基
T
山 R
图2系统校正标准溶液色谱图
8.8 测量环己 二烷基苯、邻二甲苯六甲基苯、、苯并噻盼和9-甲基离的保留时间。 8.9 确保环己完和邻二甲苯的分辨率在5.7~10之间（见11.2）。 8.10 用11.3条所述的方法确定切割时间。
n
8.11 确保系统收正 标准溶液SCS28.4）样品均匀，向色谱进样系统注入10μLSCS2标准溶液，使菌刚好在FAME的单 个峰前流出或者与其一起流出
确保菌的保留时间比9-甲基葱长注：开始使用新的色谱挂色谐柱使用一段时间活性 下降或者要分析含FAME的试样时，先用系统校正标准溶液 SCS2 检查色谱柱的性能
A
9校正 9.1 参照表1的浓度配制标准溶液A、B.C和D.称量标准物质，精确到0.0001g，并置于100mL容量瓶中，用正庚烷（5.2）稀释至刻度
S
注：如果容量瓶（如100mL容量瓶）密封较好，且在冷暗条件下保存（如冰箱中），标准溶液可以使用六个月。 9.2操作条件稳定后（见8.4），进10μL标准溶液A，记录谱图，测量各个标准物质的峰面积（见图3）。
表1标准溶液的浓度
邻二甲苯 g/100mL
菲 g/100mL
标准物质
g/100mL
A B c D
4.0 1. 0 0.25 0.05
2.0 1.0 0.25 0.02
0.4 0, 2 0.05 0. 01
5 GB/T25963—2010
250.00 200.00
10
4
2 921 *8-
Au 150.00 /3/ 100. 00
3
0 '6
50. 00
0.00
D
2.00 4. 00 6.00 8.00 10. 00 12.00 14:00 16.00 18.00 20.00
时间/min
1 邻二甲苯； 2——苏； 3—菲。
图3标准溶液A色谱图
9.3用标准溶液B、C、D重复9.2的步骤，如果标准溶液D中的菲面积太小不能准确测量，制备一个新的、含有较高浓度菲的标准溶液D+（如0.02g/100mL）。 9.4用各个芳烃标准物质（邻二甲苯、荔、菲）的浓度（g/100mL）对峰面积作图。工作曲线应为直线，相关系数要大于0.999，截矩要小于士0.01g/100mL。
注：可以用计算机或数据处理系统来制作工作曲线。 10试验步骤 10.1称量0.9g~1.1g（精确到0.001g）试样，置于10mL容量瓶中，用正庚烷（5.2）稀释至刻度。用力摇动使试样溶液混合均匀后，放置10min，如果有必要，过滤除去试样溶液中的颗粒物（6.3）。
有些试样的芳烃浓度超出工作曲线范围，要根据情况配制更浓（如2g/10mL）或更稀（如0.5g/ 10mL)的试样。
注：如果采用了与上述不同的稀释倍数，可能会使保留时间和算出的含量改变。 10.2当操作条件稳定（见8.4）且与制作工作曲线时的条件相同时（第9章），向色谱进样系统注人 10μL试样溶液（10.1），采集数据。 10.3正确区分单环芳烃、双环芳烃和三环+芳烃：
单环芳烃的保留时间在点和t。点之间（见11.3）；双环芳烃的保留时间在te点和ta点之间（见11.3）：三环+芳烃的保留时间在t点和t.点之间（见11.3）。
10.4从非芳烃峰的开始处（图4中A，t）到三环+芳烃峰的刚结束处（图4中E，t。）作基线，在E处信号回到基线值（等于经过补偿基线漂移后A点处的值，8.5）。
如果试样溶液不含双环芳烃和（或）三环+芳烃，E点应该前移，只要信号回到基线值（等于经过补偿基线漂移后A点处的值，8.5）。 10.5从非芳烃峰和单环芳烃峰的峰谷处（图4中B，t）作基线的垂线（10.4），如果有很多峰谷，选择离最近的那个（见11.3）。 10.6从单环芳烃蜂和双环芳烃峰的峰谷处（图4中C，t）作基线的垂线（10.4），如果有很多峰谷，选择离1。最近的那个（见11.3）。 10.7从双环芳烃峰和三环+芳烃峰的峰谷处（图4中D，ta）作基线的垂线（10.4)，如果有很多峰谷，选择离t最近的那个（见11.3）。 6