JJF
中华人民共和国国家计量技术规范
JJF1974—2022
生物降解试验中接种物活性
定量测量方法
Quantitative Measurement Method for Activity of
Inoculum in Biodegradation Tests
2022-06-28发布
2022-12-28实施
国家市场监督管理总局发布 JJF1974—2022
本规范起草人：
陈晓倩（上海市检测中心）王晶（中国计量科学研究院）傅博强（中国计量科学研究院）杨希晨（上海市检测中心）刘亚楠（上海市检测中心）
唐治玉（中国计量科学研究院）
杨 力（生态环境部固体废物与化学品管理技术中心） JJF1974—2022
目 录
引言
(IⅡ) (1) (1) (1) (2) (2) (2) (2) (2) (2) (3) (3) (3) (4) (4) (4) (5) (6) (8) (13) (15)
范围· 2 引用文件· 3
1
术语和计量单位· 4 概述
测量条件.…· 5.1环境条件。 5. 2 仪器· 5.3 试剂·. 5.4材料 6 测量方法 6.1 标准曲线的建立· 6.2 样品制备 6.3 样品的活性定量 6.4 测量重复性的计算.
5
A
质量控制.. 8不确定度的评定及表述.· 附录A试验溶液的配制附录B生物降解试验中接种物活性定量测量应用实例附录 C 原始记录格式（推荐性表格）附录D测试报告内页推荐格式
- JJF1974—2022
引言
本规范依据JJF1071一2010《国家计量校准规范编写规则》、JJF1001一2011《通用计量术语及定义》和JJF1059.1一2012《测量不确定度评定与表示》制定，主要参考 ASTMD4012一15《水中微生物三磷酸腺苷（ATP）含量标准检测方法》［Standard Test Method forAdenosineTriphosphate(ATP)Content of Microorganisms in Water 和JJF1828一2020《ATP荧光检测仪校准规范》制定。
本规范为首次发布。
Ⅱ JJF1974—2022
生物降解试验中接种物活性
定量测量方法
1范围
本规范适用于环境风险评估中生物降解试验所使用的接种物活性的定量测量。
2引用文件
本规范引用了下列文件： JJG196常用玻璃量具 JJF11351 化学分析测量不确定度评定 JJF1265 生物计量术语及定义 JJF1828ATP荧光检测仪校准规范 HJ/T153化学品测试导则 OECD301化学品测试准则（GuidelinesfortheTestingofChemicals） ASTMD4012水中微生物三磷酸腺苷（ATP）含量标准检测方法［[StandardTest
Method for Adenosine Triphosphate (ATP) Content of Microorganisms in Water]
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本规范。
3术语和计量单位
JJF1135、HJ/T153和OECD中界定的及以下术语和定义适用于本规范， 3.1生物降解试验biodegradationtest
评估受试物被接种物（一般含微生物）分解为CO2、水、矿物盐和新的细胞代谢物的能力的试验。 3.2接种物inoculum
生物降解试验过程中用于接种的含有活性微生物的试验生物，包括地表水、生活污水处理厂二级出水、生活污水处理厂活性污泥等中的微生物群落。 3.3微生物群落microbial community
在特定环境下生长的不同种的微生物，在生理和生存过程中具有一定的联系，通过它们之间相互作用，使群体协调发展：并且具有一定功能的微生物的组合。 3.4相对光单位relativelightunit，RLU
三磷酸腺苷（AdenosineTriphosphate，ATP）水解成一磷酸腺苷（Adenosine Monophosphate，AMP）和焦磷酸盐时释放化学能驱动荧光素在荧光素酶催化下氧化释放的光量子数的测量单位。
注：非SI单位，但与ATP浓度成比例关系。不同的检测仪对于同样的样品可能会产生不同的
RLU读数。
1 JJF1974—2022
4概述
生物降解性用于评估化学物质与接种物接触表现出被生物降解的潜力，是鉴定化学物质的环境危害性和持久性、进行分类和标签、评价和控制环境风险的基本指标。接种物活性是生物降解性中的主要内容。通过接种物活细胞数量的多寡反映微生物能量代谢的活性，判断其活性是否符合生物降解试验的要求，作为接种物影响生物降解结果的指标。
本规范采用ATP法测量接种物中的活细胞浓度。ATP法是将接种物中的ATP经提取后，测量在氧气、ATP和镁离子同时存在下荧光素酶催化荧光素氧化产生的 550nm黄绿色光强度。在一定范围内，光强度与ATP浓度成正比例关系。光强度用发光检测仪（如ATP荧光检测仪、微孔板化学发光检测仪等）测量，结果用相对光单位（RLU）表示。根据相对光单位强度可以推算出接种物中的ATP浓度（nmol/L）。通常每个微生物细胞中的ATP含量相对恒定，约（5X10-16～5X10-15）gATP/cell或（10-9～10-8）nmolATP/cell，由此可以计算得到接种物中的活细胞浓度。
5测量条件
5.1环境条件
温度：（19~27)℃。 5.2仪器 5.2.1发光检测仪：检测范围不低于4个数量级，线性误差小于10%。 5.2.2移液器：（1～10）μL，（10～100）μL或（20～200）μL，（1001000）μL各 1支。 5.2.3电子天平：分度值为0.01mg。 5.2.4高速大容量离心机：离心力不低于1100g。 5.2.5水分仪：分度值为0.1mg。 5.3试剂 5.3.15-三磷酸腺苷（ATP）二钠盐纯度标准物质（以下简称ATP二钠盐）：扩展不确定度≤1%（k=2）。 5.3.2ATP标准工作液：配制见附录A.2。 5.3.3ATP检测试剂：主要包括ATP提取剂、荧光素和荧光素酶。
注：建议使用含有ATP提取剂的商业化ATP检测试剂盒，具体实施依据试剂生产厂家的要求
实施。
5.3.4高压灭菌水或无菌水：无菌、无ATP。 5.3.5矿质培养基：详见附录A.1。 5.4材料 5.4.1无菌塑料离心管：（2～500）mL。 5.4.2不透光的96孔板或其他与发光检测仪适配的器皿。 2