JJG
中华人民共和国国家计量检定规程
JJG1064—2011
氨基酸分析仪
Automatic Amino Acid Analyzer
2011-04-21实施
2011-01-21发布
国家质量监督检验检疫总局发布 JJG1064—2011
氨基酸分析仪检定规程
JJG 1064—2011
Verification Regulation of
AutomaticAminoAcidAnalyzer
本规程经国家质量监督检验检疫总局于2011年1月21日批准，并自
2011年4月21日起施行。
归口单位：全国物理化学计量技术委员会起草单位：中国计量科学研究院
参加起草单位：天美（中国）科学仪器有限公司
河南省计量科学研究院
本规程委托全国物理化学计量技术委员会负责解释 JJG 1064—2011
本规程主要起草人：
马 康 （中国计量科学研究院）赵 敏（中国计量科学研究院）刘 军（中国计量科学研究院）
参加起草人：
李梅（天美（中国）科学仪器有限公司）孟 洁（河南省计量科学研究院） JJG1064—2011
目 录
范围· 2 概述· 3 计量性能要求
(1) (1) (1) (2) (2) (2) (2) (2) (3) (3) (5) (5) (6) (7) (8) (10)
1
通用技术要求 4.1外观· 4.2工作正常性 5 计量器具控制 5.1 检定条件.. 5. 2 检定项目.. 5.3 检定方法 5. 4 检定结果的处理 5.5 检定周期· 附录A检定证书（内页）参考格式附录 B 检定结果通知书（内页）参考格式附录 C 检定记录参考格式附录 D 流动相密度测量方法
4
. JJG1064—2011
氨基酸分析仪检定规程
1范围
本规程适用于食品安全、医药卫生、临床检验和饲料监察等分析用氨基酸分析仪（以下简称仪器）的首次检定、后续检定和使用中检验。
2概述
氨基酸分析仪是采用阳离子交换色谱法对氨基酸进行分离，并进行定性和定量分析的仪器。样品中的蛋白质经盐酸水解，其产物经离子交换色谱柱分离，分离出的单个氨氢基酸组分与三酮试剂反应，生成紫色化合物，用可见光检测器测量其在570nm的吸光度（脯氨酸和羟脯氨酸在440nm测量），与标准溶液的吸光度比较，即可计算出样品中氨基酸的含量。氨基酸分析仪的基本原理图见图1。
泵1
离子交换柱
衍生单元
自动进样器
流动相
0 泵2
检测器
入入
衍生试剂
图1氨基酸分析仪分析原理图
3计量性能要求
氨基酸分析仪的主要计量性能应符合表1的要求。 JJG1064—2011
表1氨基酸分析仪的计量性能指标计量性能流量设定值误差
序号
技术指标
不大于士2% 不大于2% 苏氨酸丝氨酸 不小于85% 甘氨酸丙氨酸不小于90% 亮氨酸异亮氨酸 不小于80% 不大于0.5mV 不大于1.5mV/60min 不大于1nmol（S/N=2，组氨酸） RSD，不大于1.5%（天冬氨酸和精氨酸） RSD，不大于3.0%（甘氨酸和组氨酸）线性相关系数不小于0.995
输液系统
1
流量稳定性
分离度（峰高分离度）
色谱柱
2
1）基线噪声 2）基线漂移 3）检测限 1）定性测量重复性
检测器
3
整机性能 2）定量测量重复性
4
3）线性
A
通用技术要求
4.1 外观
仪器上应有仪器名称、型号、制造厂名、产品系列号、出厂日期等内容的标牌。 仪器应无影响正常工作的损伤、划痕，各部分连接可靠，紧固件无松动。
4.2工作正常性 4.2.1仪器管路应使用不锈钢、聚醚醚酮（PEEK）、聚四氟乙烯等管材，在规定的压力范围内无泄漏。 4.2.2仪器电源线、信号线等插接紧密，各开关、按键、旋钮、指示灯等功能正常，数字显示清晰。
5计量器具控制 5.1检定条件 5.1.1检定环境 5.1.1.1室内温度为15℃～30℃，湿度为30%～80%RH。室内清洁，无易燃、易爆和腐蚀性气体，排风良好。 5.1.1.2仪器周围无强烈的机械震动和电磁干扰。 5.1.2检定设备
分析天平：最小分度不大于0.1mg；
5.1.2.1
5.1.2.2禾 秒表：最小分度不大于0.1s； 5.1.2.3 游标卡尺：最小分度不大于0.02mm； 5.1.2.4 容量瓶等玻璃器皿。 5.1.3标准物质 2 JJG1064—2011
国家计量行政部门批准的氨基酸标准物质。 5.2 检定项目
检定项目见表2。
表2 检定项目一览表
使用中检验
序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 注：“十”表示应检定项目，“一”表示可不检定项目。
首次检定
检定项目
后续检定
外观及工作正常性检查流量设定值误差流量稳定性分离度基线噪声基线漂移检测限定性测量重复性定量测量重复性线性
+ + + + + + + + + +
+
+
+
+ + + + + +
+ + +
5.3检定方法 5.3.1外观及工作正常性检查
按第4章的要求，目视、手动逐项检查。 5.3.2泵流量设定值误差Ss和流量稳定性S的检定
氨基酸分析仪有2个泵，输送缓冲溶液的泵简称泵1，输送三酮的泵简称泵2。 按仪器说明书的要求设定常用的泵流量，启动泵1，只用缓冲溶液B1，待压力稳定后，从检测器出口用事先清洗、干燥、称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集 20min～30min，在分析天平上称重，按式（1）计算流量实测值F（mL/min）。每测完一次，改变泵流量，几分钟后再恢复到原设定值，待稳定后按上述方法收集流动相、 称重。重复测量3次，3次结果的平均值为流量实测值。按式（2）、式（3）计算泵1 的Ss和SR。
Frm=W,-Wi
(1)
Prt
式中：W, 容量瓶十流动相的质量，g；
W. 容量瓶的质量，g；
实验温度下流动相的密度，g/cm3（密度测量方法见附录D）；收集流动相的时间，min。
PT
Fm- Fs × 100%
(2)
Ss =
Fs
Fmx= Fmin ×100%
(3) 3
SR :
F JJG1064—2011
式中：Fm一3次测量流量的算术平均值，mL/min；
Fs流量设定值，mL/min; Fmax——3次测量中流量最大值，mL/min； Fmin—3次测量中流量最小值，mL/min。 泵1流量测量结束后，启动泵2，按上述方法测量泵1和泵2的流量，由当时测得
的缓冲溶液B1与三酮混合液的密度及流动相搜集时间，按式（1）计算泵1加泵2的流量，扣除泵1的流量，即得泵2的流量，重复测量3次，按式（2）、式（3）计算泵 2的Ss和SR。 5.3.3分离度
按仪器推荐的测量条件设置各项参数，启动仪器待稳定后，由进样系统注人氨基酸标准溶液（浓度为5nmol/mL～20nmol/mL）做色谱分析，由色谱图测量的数据按式（4）计算苏氨酸（Thr）一丝氨酸（Ser）、甘氨酸（Gly）丙氨酸（Ala）、亮氨酸（Leu）一异亮氨酸（Ile）的分离度Rh。
R =Ho=H× 100%
(4)
H.
式中：H。两相邻色谱峰的平均峰高，mm；
H一一两相邻色谱峰交点到基线的距离，mm。
5.3.4基线噪声和漂移
按仪器推荐的测量条件设置仪器参数，启动泵1（只用缓冲溶液B1）和泵2，待仪器稳定后记录基线60min，取一段时间基线峰峰值表示基线噪声，以mV（或uV）表示；60min内基线偏离起始点的值为基线漂移，以mV（uV）/60min表示。 5.3.5检测限
在5.3.3的测量条件下，测量浓度为5nmol/mL左右的氨基酸标准溶液3次，记录色谱图，由组氨酸（His）峰高平均值和基线噪声值，按式（5）计算检测限CL。
CL = 2NC组V
(5)
1000H组
式中：Np基线噪声值，mV或mm;
C组组氨酸溶液浓度，nmol/mL； H组组氨酸色谱峰高的平均值，mV或mm V进样体积，uL。
5.3.6定性、定量测量重复性
在5.3.3的测量条件下，重复测量氨基酸标准溶液（浓度同5.3.3）至少7次，由测量结果按式（6）计算天冬氨酸（Asp）和精氨酸（Arg）保留时间的重复性及甘氨酸（Gly）和组氨酸（His）峰面积的重复性，用RSD定性（定量）表示。
(X; -X)2 n-1
RSD定性（定量）
×100%
(6)
X
式中：X：一一第i次测量的色谱峰保留时间（或峰面积）； 4