第31卷，第6期 2011年6月
光谱学与光谱分析 Spectroscopy and Spectral Analysis
Vol.31,No. 6,pp1611-1614
June,2011
光谱法研究变性剂对苦荞麦蛋白质构象的影响
郭晓娜，姚惠源
江南大学食品学院，江苏无锡214122
摘要采用紫外差示光谱和荧光光谱研究了不同浓度的乙醇溶液和盐酸胍溶液对苦养麦蛋白质(TBWSP31)构象变化的影喇。研究表明，TBWSP31的色氨酸残基和酪氮酸残基有的位于分子内部，有的晕露于分子表面。乙醇溶液使TBWSP31变性时，仅仅是分子的外层结构发生了变化，分子内部疏水核的变化较小，高浓度的盐酸胍使位于TBWSP31分子内部疏水核的酪氨酸和色氨酸转移到分子表面，暴露于溶剂中，所处的微环境发生了很大的变化。
关键词苦养麦；蛋白质；结构；紫外差示光谱；荧光光谱
中图分类号：S157
引言
文献标识码：A
Dl: 10. 3964/i.issn- 1000-0593(20111061611-04
2800紫外-可见分光光度计（海尤尼柯仪器有限公司)；BSZ 100自动部分收集器（上海沪西分析仪器厂）；HD-3紫外检测仪（.上海沪西分析仪器厂)；SP2558多功能光谱测量仪（美
蛋白质分子具有生色基团，生色基团处于不同的微环境，蛋白质的分子构象影响微环境的性质。改变蛋白质的分子构象，其所处的微环境发生变化，生色基团的紫外吸收光谱随之改变。采用紫外差光谱检测生色基团紫外吸收光谱的变化，研究其微环境的改变，可以推断出蛋白质分子在溶液中的构象变化！！。
荧光光谱法可以研究蛋白质分子在溶液中的构象变化。它能够提供许多物理参数，包括激发光谱和发射光谱、荧光强度、荧光寿命和量子产率。通过对这些参数的测定，可推断蛋白质分子在各种环境下的构象变化，研究蛋白质的结构和生理功能的关系["]
在生命活动过程中，不同的蛋白质具有不同的生理活性功能。策自质的活性功能不仅决定于蛋白质分子的一级结构，更决定于其三维结构。因此对蛋白质的结构进行深入的研究是十分必要的，这对于其生理活性功能的解择具有非常重要的意义。
本文采用紫外差示光谱和荧光光谱研究了不同浓度的乙
醇溶液和盐酸胍对苦养麦蛋白质构象变化的影响。 1
实验部分 1.1仪器与试剂
ZOPR-52D冷冻离心机（日本HitachiKoki公司）；UV-收稿日期：2010-06-22，修订日期：2010-09-15
[国 Roper Scientific Inc. ); DEAE-Sepharose FF 和 Sephacryl S-200购自瑞典Pharmacia公司；SephadexG-100购自上海
华美生物工程公司；所用试剂均为分析纯。 1.2苦养麦抗肿瘤蛋白的制备
采用硫酸铵分级沉淀、DEAE-SepharoseFF离子交换色谱、SephadexG-100凝胶过滤色谱对苦养麦水溶性蛋白质逐步分离纯化，并结合细胞实验，筛选出苦养麦蛋白TB WSP31(3]。
1.3紫外差示光谱分析
紫外差示光谱研究了不同浓度的乙醇溶液和盐酸溶液对TBWSP31构象变化的影响。配制1mg·mL-的样品落液（用pH7.0，20mmol·L-的磷酸盐缓冲液解），作为储液，然后分别用乙醇灌液和盐酸胍溶激稀释，最终样品浓度为100μg·ml-。
紫外差示光谱是在紫外-分光光度计上测定的4，采用
匹配的需板式比色■，比色皿宽度1cm，样品按照如下方式置入光路中。
参比光路：样品溶波（未处理)和变性剂溶液；样品光路：含有样品的变性剂溶液和磷酸盐缓冲液；扫描波长范围 200~300 nm。
1.4荧光光谱分析
荧光光谱主要研究了不同浓度的乙醇溶液和盐酸肌溶液对TBWSP31构象变化的影响。样品处理见1.3。分别以280
基金项目：国家自然科学基金项目(30900999)和高等学校博土学科点专项科研基金项目(200802951003)资助
作者简介：郭晓娜，女，1978年生，江南大学食品学院副教投万方数据
e-mail; gxn1978@hotmail. com; xiaonaguo@jiangnan. edu. cn