第32卷，第8期 2012年8月
光谱学
与光
分析
请
Spectroscopy and Spectral Analysis
Vol. 32,No. 8, pp2166-2170
August，2012
胶乳微球与抗体蛋白相互作用机理的荧光光谱法分析
俞思明，彭运平1.2*，于淑娟"，吕
丞
欢，郭
1.华南理工大学轻工与食品学院，广东广州510640 2.广州万孚生物技术有限公司，广东广州510640
利用共价偶联的方法制备了胶乳-抗体蛋白复合物，并采用荧光光谱法对复合物的性质进行了研
要
究，以揭示胶乳微球与抗体蛋白之间的相互作用机理。内源荧光光谱分析结果表明，共价偶联后，抗体蛋白的最大发射峰发生显著蓝移，最大发射峰强度显著降低，抗体蛋白的三级结构发生了一定的变化，胶乳微球与抗体蛋白之间的相互作用对抗体蛋白的内源荧光有显著的猝灭作用，猝灭效果随着偶联体系PH值以及胶乳浓度的增加而增强，猝灭机制为静态辞灭。外源荧光光谱分析结果表明，共价偶联后抗体蛋白的最大发射峰强度显著增强，且随着偶联体系pH值的升高，抗体蛋白的疏水性显著降低，随着胶乳浓度的增加，疏水性逐新升高。
关键词
胶乳-抗体蛋白复合物；抗体蛋白；荧光光谱
中图分类号：Q71
引言
文献标识码：A
DOI; 10. 3964/j. issn.10000593(2012)08-216605
蛋白质之间相互作用的方法主要有：荧光光谱法、紫外-可见光诺法(UV-Vis）、园二色谱法(CD)、傅里叶变换红外光谱法(FTIR)及核磁共振法(NMR){-1)，然面，在这些方法中，
近年来，包被有抗体/抗原的胶乳微球已被广泛应用于免疫诊断中[1,幻，免疫诊断的理论基础是抗原与抗体间的特异性反应3，当抗原/抗体连接在胶乳微球表面时，一且抗原/抗体与胶乳微球上的抗体/抗原发生特异性结合，由于胶乳的凝聚作用，免疫反应从宏观上被放大了。所以将不同的抗原/抗体连接在胶乳微球表面，通过免疫检测，可将一些常见疾病，如肝炎、流感等快速检测出来。
常用的制备胶乳-抗体蛋白复合物的方法有两种；物理吸附法和共价偶联法。由于吸附会引起固定于胶乳微球表面蛋白的部分解吸及结构的变化，所以用物理吸附法制备的胶乳-抗体蛋白复合物特异性低，在生物诊断中的应用受到限制[*]，共价偶联法能在最大限度上控制吸附法中出现的间题，成为目前制备胶乳-抗体蛋白复合物的主要方法。
在股乳-抗体蛋白复合物的制备过程中，蛋白与胶乳微球的相互作用总会存在，而这些相互作用会对固定于胶乳微球表面抗体蛋白的功能特性、空间结构、生物活性及其在生物诊断中的应用产生一定的影响，所以研究它们之间相互作用的机理以及这费相互作用对胶乳-抗体蛋白复合物中抗体蛋白性质的影响显得意义重大。近年来，常用于研究微球与
荧光光谱法被认为是一种最简单、最有效的研究微球与蛋白质间相互作用的方法[1113]。
利用共价偶联法制备了胶乳-抗体蛋白复合物，并且采用荧光光谱法研究了胶乳微球与抗体蛋白间的相互作用以及相互作用对抗体蛋白结构性质的影响，以期为胶乳-抗体蛋
白复合物在生物诊断中的应用提供理论基础。实验部分
1.1
材料与试剂
胶乳微球(粒径220nm)，德国莫克公司；HCG-a单克
隆抗体，美国Sigma公司；1-乙基碳酰二亚胺盐酸盐（EDC)， N-羟基珑珀酰亚胺（Sulfo-NHS)，均为美国赛默飞世尔科技公司；1-苯胺基萘-8-硝基苯甲酸盐（ANS)，美国Sigma公司；其余化学试剂均为分析纯；实验用水为去离子水。
主要仪器
1.2
超声波细胞粉碎机（JY-92I型），宁波新芝生物科技股份公司；荧光光谱仪(F-4500)，日本HitachiKoki公司。
1.3
胶乳-抗体蛋白复合物的制备
收稿日期：2012-02-23，修订日期：2012-06-10
基金项目：国家科技部（863计划)项目(2010AA022802)和国家自然科学基金项目(31071564)资助
作者简介：俞思明，1985年生，华南理工大学轻工与食品学院硕士研究生
*通讯联系人
万方数据
e-mail; pyp@wondfo. corm. cn
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