第32卷第1期 2015年1月
吉林化工学院学报
JOURNAL OF JILIN INSTITUTE OF CHEMICAL TECHNOLOGY
文章编号：1007-2853(2015)01-0001-04
Vol. 32 No. 1 Jan.2015
高效发酵混合糖产乙醇树干毕赤酵母的选育
李力群，王丹
（吉林化工学院生物与食品工程学院，吉林吉林132022）
摘要：使用紫外诱变和梯级别化法进行了菌种选育实验研究，获得一株优良菌株L-1.通过4因素3水平正交实验优化了发酵条件.菌株L-1发醇混合糖（葡葡糖和木糖）经过65.0h，28.0℃，144.rpm，140mL/ 500mL瓶装量的发酵，乙醇浓度达到7.97%（v/v），发酵乙醇能力比出发菌株提高了884%，残余葡萄糖和木糖为0.70%，发酵乙醇效率为理论值的88.1%
关键词：树干毕赤酵母；菌种选育；梯级别化；乙醇发醇
中图分类号：Q78.41
文献标志码：A
以玉米秸秆为原料生产乙醇，其巨大的经济效益和社会效益可以预期，符合我国国情发展需要.使用生物质工业化生产乙醇的研究还面临一些瓶颈间题，其中，选育出对于高混合糖浓度、高酒精度和原料抑制物有较强适应能力的生产菌种,是一类非常重要的课题(12]
实验部分
1
.1.1试剂与仪器
主要培养基（自然pH值）：制备后于121℃， 30.0min灭菌后使用
（1）原种CM0077的保藏培养基（5°Be'麦芽汁琼脂培养基)
(2）TTC(2,3,5-氯化三苯基四氮唑）3)下层培养基（g/L），木糖10.1，蛋白陈2.00，酵母膏 1.50,KH,PO,.001,MgS0。·7H,00.400,柠檬酸 0.270.琼脂20，余量水.
（3）TTC上层培养基（g/L），木糖7.50，琼脂 2.00,TTC0.750，余量水.
主要仪器设备：回转式恒温调速摇瓶柜， HYG-A，太仓市实验设备厂.电子天平，YP600，上海第二天平仪器厂.显微摄像系统，H1731，上海光学仪器厂.不锈钢双层立式电热蒸汽压力消毒器，YX-450A，上海三申医疗器械有限公司.15W 紫外线照射箱（自制）.离心机，TDL-5000B，上海安亭科学仪器厂，
主要测定方法：采用蒸馏法测定乙醇浓度.采
DOl:10. 16039/j. cnki. cn22 1249. 2015. 01. 001 用菲林试剂法测定还原糖浓度[4]，
1.2实验过程 1.2.1出发菌种
树干毕赤酵母（Pichia stipiti）CICC1960，购
于中国工业微生物菌种保藏中心. 1.2.2紫外照射和TTC法筛选
稀释菌液用15W紫外灯照射，波长260nm，距离30.0cm，分别照射40s、50s和60s.平板培养出菌落后使用TTC法筛选出深红色菌落，并测试其发酵能力、
发酵培养液组成（g/L)：葡萄糖30.0，木糖20.0，酵母粉20.0，硫酸铵10.0，KH,PO,2.00，MgS0 2.00.发酵三角瓶装量100mL/500mL，用八层纱布封口，外包皮纸，绳扎紧.湿热灭菌接种后在28.0℃ 摇床内，144rpm发酵，其实验结果列于表1.
表1
实验序号 1 1
1 2 2 2 3 3 4 5
紫外诱变方案与发醇性能测试数据
（发酵温度28.0℃）
诱变时间/s 40 50 60 60 50 60 60 50 60 50 未照射
收稿日期：2014-11-26
基金项目：吉林化工学院2013年度重点资助科技计划项目（No.2012029）
葡落小小小大小小大小大小
时间 42.0 42.0 49.0 50.0 45.0 43.0 43.0 46.0 48.0 46.0 45.0
发酵残糖浓度/% 1.25 0.20 2.10 1.20 0.20 1.50 0.40 0.30 0.30 0.45 0.15
作者简介：李力群（1955-），男，江苏苏州人，吉林化工学院副教授，主要从事现代发酵技术方面的研究
万方数据
乙醇浓度/% (v/v) 0.87 0.85 0.52 1.32 1.41 1.03 1.68 1.55 1.45 1.84 0.81