2010 No.4
·82
SerialNo.217
ChinaBrewing
酶解制备褐藻胶寡糖及其抗氧化活性研究
包华芳，刘磷*，丁五庭
（浙江工业大学生物与环境工程学院，浙江杭州310014）
Research Report
摘要：从本实验室筛选的琼氏不动杆菌中获得褐藻胶裂解酶，酶解制备褐藻胶事糖，用氧自由基吸收能力（ORAC)法测定抗氧化活性，并研究提高其抗氧化效果的方法。结果显示，该酶的最适酶解温度30℃，pH7.5。加入初始浓度为0.75%的海藻酸钠反应，2h达到最大降解率，且此时的平均聚合度(DP)为2：此时的抗氧化能力也达到最大值，平均ORAC值为1374.25μmolTE/g。反应体系中加入 Vc的平均ORAC值有所增加，且随浓度增加先增大后减少，在浓度为0.004g/L时达到最大值。实验表明：视藻胶裂解酶制备的据藻胶
事糖具有较强的抗氧化能力，且抗氧化效果与还原糖含量有关。Vc保护反应能提高抗氧化能力，且与VC浓度有关，关键词：抗氧化：ORAC：褐藻胶：褐藻胶赛糖：VC
中图分类号：TQ925
文献标识码：A
文章编号：0254-5071(2010)04-0082-03
Oligoalginate product by alginate lyase and its antioxidant capacity
BAOHuafang.LIU Lin*,DING Yuting
(College ofBiologyandEnvironmentalEngineering,ZhejiangUniversityofTechnology,Hangzhou310014,China)
Abstract: Algino-oligosaccharide production from alginate was carried out by alginate lyase obtained from a newly isolated Acinetobacter juni. Oxy-gen radical absorbance capacity (ORAC) was used to study the capacity of antioxidation, and to find methods to improve the capacity. The results showed that the optimal temperature and pH of alginate lyase were obtained as 30 °C and pH 7.5, respectively. When alginate was added with an ini-tial concentration of 0.75 %, the largest extent of the reaction happened at 2 h, and the average degrces of polymerization(DP) of alginate-degraded products was about 2 h. The antioxidant capacity also reached to maximum 1374.25 μmol TE/g, In Vc reaction systems, the antioxidant capacities were better than control, and the maximal level was 0.004 g/L. The results suggested that these products had the capacity of antioxidation and it had
relation with DP. The antioxidant capacity could be improved by adding VC reaction Key words: antioxidantion; ORAC; alginate; oligoalginate; VC
褐藻胶是一种来源于褐藻细胞壁的水溶性酸性多糖，主要从海带、巨藻、马尾藻等褐藻中提取得到，具有抗肿痛、增强免疫、促生长等多种生理活性，但由于褐藻胶胶凝性强，不容易被吸收，在应用方面受到很大的限制。其降解产物褐藻胶募糖具有水落性好，有利于人体吸收等优点。近年来，褐藻胶寡糖的制备方法(尤其是酶解方法)，及其生理活性研究已成为新的热点。
目前已有从锈凹螺、菌株Flavobacteriumsp.LXA甲、菌株P.chrysogenum、菌株Vibriosp.510等来源的褐藻胶裂解酶制备褐藻胶寡糖的研究。褐藻胶寡糖的抗肿瘤、抗凝血、降血糖血脂、抗炎症、免疫调节、促生长、抗氧化等多种生理活性闪已经得到证实。本研究用实验室筛选的琼氏不动杆菌的褐藻胶裂解酶，酶解制备褐藻胶寡垂。并用氧自由基吸收能力(ORAC)法研究该产物的抗氧化性能，探索通过添加VC反应，提高酶解褐藻胶寡糖抗氧化
能力的方法。 1材料与方法 1.1材料与仪器
褐藻胶裂解酶：由本实验室筛选的琼氏不动杆菌产的褐藻胶裂解酶，经冷冻干燥制备酶粉；Trolox：购于Sigma aldrich公司：海藻酸钠（化学纯)：购于国药集团有限公司：
收稿日期：2009-12-30
其他试剂国产分析纯。
高速冷冻离心机：日本日立公司：UV-7504型紫外可见分光光度计：上海欣茂仪器有限公司；SpectraMaxM2多功能酶标仪：美国分子仪器公司。
1.2实验方法 1.2.1测定方法
还原糖含量测定：DNS法(67测定还原糖含量。
酶活测定：取4mg酶粉，加入1mL磷酸盐钠缓冲液(0.1mmoL/L、pH7.5)，再加入1mL0.75%藻酸钠底物溶液，于40.0℃反应定时间，沸水10min终止反应，3mL试剂显色后测定ODsom值，通过葡萄糖标准曲线计算还原糖含量。酶活力单位定义为在实验条件下，每分钟催化底物产生1μg还原糖所需要的酶量。
平均聚合度的测定：苯酚-硫酸法测定体系中的总糖浓度。总糖含量与还原糖含量的比值，即为体系的平均聚合度，平均聚合度取整数。
抗氧化能力测定：ORAC法M。在测定反应产物抗氧化能力时，用加入反应体系的海藻酸钠浓度作为测定浓度。将反应后的样品稀释10倍，再以2倍稀释法将样品稀释5 个梯度，测定各个梯度的值。初始荧光强度值记为f，之后各1min测定1次，共测定60min，荧光强度分别记为fi、f、
作奢篇介：包华芳(1984-)，在读硕士研究生，研究方向为生物化工；刘，副教授，通讯作者。