研究报告
中国酿造
2010年第4期总第217期
兼香型自云边酒高温堆积过程主要细菌的分子鉴定
曾驰，张明春3，刘婷婷",缪礼鸿*，熊小毛，向第？
（1.武汉工业学院生物与制药工程学院，潮北武汉430023;2.湖北白云边酒业股份有限公司，湖北检溢434200）
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摘要：采用曲汁培养基和牛肉膏蛋白陈培养基从白云边酒厂堆积消酷中分离细菌，获得了6株有明显特征差异的细菌。用PCR技术对其进行了16SrDNA序列扩增、同源对比和系统发育分析，结果表明：6株分离菌株中W-1、W-3、G-4、G-1、DJ-1C菌株分别与芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens、Bacillus subtilis、Bacillus velezensis、Bacillus lichenifomis、Bacillussporothemodurans有较高的相似性，而菌株4J与5种芽孢杆菌Bacillusvireti、Bacillusbatrviensis、Bacillusdrentensis、Bacillus soli、Bacillusnovalis的标准菌株既有一定的相仪
性，也有一定的遗传距离，可能是一个不同于已知菌的芽孢杆菌新种。关键词：白云边酒；商温堆积；细菌：分子整定
中图分类号：TS261.1
文献标识码：A
文章编号：0254~5071(2010)04-003903
Molecular analysis of bacterial diversity in high temperature stacking fermented grains in Baiyunbian liquor production
ZENG Chi', ZHANG Mingchun’, LIU Tingting', MIAO Libong**, XIONG Xiaomao', XIANG Wei?
(I. School of Biology and Pharmaceutical Engineering, Wuhan Polytechnic University, Wuhan 430023, China,
2. Hubei Baiyunbian Liquor Co., Ld., Songzi 434200, China)
Abstract: Six distinct bacterial strains were isolated from the high temperature stacking fermented grains in Baiyunbian liquor production. The 16S rDNA sequences of the strains were obtained by PCR amplification and were subjected to bomology search and phylogenetic analysis. The strains W-1, W-3, G-4, G-1 and DJ-1C were shown to be phylogenetically similar to the strains of Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subilis, Bacillus velezensis, Bacilus lichenifomis, and Bacillus sporothermodurans, respectively. It was also found that the strain 4J was phylogenetically similar to the strains of Bacillus vireti, Bacillus bataviensis, Bacillus drentensis, Bacillus soli and Bacillus novalis. However, there were considerable genetic
distances between 4J and each of them, These results indicated that the strain 4J may be a new Bacilus species. Key words: Baiyunbian liquor; high temperature stacking fermentation; bacteria; molecular analysis
高温堆积是白云边酒生产工艺的重要环节之一[-]。
其不仅是网罗、筛选、扩大培养某此微生物的过程，而且是形成白云边酒某些香味成分及其前体物质的过程因。实践证明，高温堆积管理得好，酒酪的香气就好，出酒率也高。为了了解高温堆积这个关键工序中主要有哪些细菌参与，白云边酒厂和湖北省轻工研究设计院于20世纪90年代初对白云边堆积酒酪中的细菌进行了分离，对分离的细菌菌株根据形态和生理生化特征进行了初步鉴定
随着DNA序列分析技术的日益成熟和简化，16SrDNA 序列分析被愈米愈多地应用于细菌的分子分类学、分子系统和多样性等方面的研究中。相比传统的依赖于形态特征、生理生化特性的微生物分类方法，16SrDNA序列分析鉴定需要的工作量小，准确度高间。
本研究从白云边堆积酒酪中进行细菌的分离，在获得纯培养菌株的基础上，以16SrDNA序列分析为依据，对
收稿日期：2009-08-30
白云边酒高温堆积过程主要细菌进行分子鉴定，为深入了解白云边酒高温堆积过程中的微生物活动提供基础。 1材料与方法
1.1样品、培养基与试剂
样品：白云边酒厂酿造车间已经高温堆积，即将入池的酒醋。
培养基：①曲汁培养基。配制方法（以配制200mL曲汁培养基为例)：取酒酪20g，加水200mL，煮沸30min，过滤，补水定容至200mL，加煎糖4g，115℃灭菌30min。②牛肉音蛋白陈培养基。如配固体培养基则另外添加总重1.5%的琼脂粉。
TagDNA聚合酶和dNTP购自上海申能博彩公司： DL2000marker购自大连宝生物公司：PCR引物16S-27F、
16S-1492R委托北京奥科生物技术公司合成。 1.2菌株分离
基金项目：潮北省科技攻关计划项日资助(2007AA101C59)
作者简介：普驰（1980-)，男，潮北武汉人，讲师，主要从事应用微生物学的研究工作；绿礼湾*，教授，通讯作者。
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