ICS 11.040.30
YY CCS C 30
中华人民共和国医药行业标准
YY/T 1805.3—2022
组织工程医疗器械产品胶原蛋白第3部分：基于特征多肽测定的胶原蛋白
含量检测
液相色谱-质谱法
Tissue engineering medical device products—Collagen protein—Part 3:Quantification of collagen based on marker peptide detection—Liquid chromatography-mass spectrometry
2022-08-01实施2022-01-13发布
国家药品监督管理局
发 布
YY/T 1805.3—2022
组织工程医疗器械产品胶原蛋白第3部分：基于特征多肽测定的胶原蛋白含量检测 液相色谱-质谱法
1 范围
本文件规定了用液相色谱-质谱法测定不同类型胶原蛋白特征多肽含量的方法。
本文件适用于组织提取纯化的胶原蛋白及其胶原类产品中不同类型胶原蛋白特征多肽含量的测定。
注：重组胶原蛋白、脱细胞基质经胶原蛋白提取后的样品可参考本方法进行相应的胶原蛋白特征多肽含量测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
YY/T1453 组织工程医疗器械产品 Ⅰ型胶原蛋白表征方法中华人民共和国药典（2020年版）
3 术语和定义
YY/T 1453界定的术语和定义适用于本文件。
4 概述
将胶原蛋白试样溶解，加热变性后进行胰蛋白酶酶解，释放特征多肽；再用液相色谱-质谱法测定。以不同类型胶原蛋白特征多肽的保留时间和二级子离子碎片的质荷比进行定性和确证，用外标法或内标法进行定量。
用合成的不同类型胶原蛋白特征多肽作为标准品，实现外标法定量检测；用合成的相同特征多肽序列的同位素标记特征多肽与非同位素标记特征多肽按一定比例混合，实现内标法定量检测。同位素内标法有助于改善基质效应对测定准确性的干扰。
本文件以同位素内标法为例，分别给出牛工型、牛Ⅱ型和猪Ⅰ型胶原蛋白特征多肽含量检测的标准操作规程和要求。其中，牛工型胶原蛋白特征多肽含量检测按附录A，牛Ⅱ型胶原蛋白特征多肽含量检测按附录B，猪工型胶原蛋白特征多肽含量检测按附录C进行测定。针对不同动物来源或不同型别的胶原蛋白，也可自行筛选合适的特征多肽经验证后进行定量检测。