SN ICS 67.050 CCS X 04
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 5450—2022
动物源食品中9种双稠吡咯啶类生物碱的测定 液相色谱-质谱/质谱法Determination of 9 pyrrolizidine alkaloids in animal-origin food—Liquid chromatography tandem mass spectrometry method
2022-03-14发布
2022-10-01实施
发 布
中华人民共和国海关总署
SN/T 5450—2022
动物源食品中9种双稠吡咯啶类生物碱的测定 液相色谱-质谱/质谱法
1 范围
本文件规定了动物源食品中9种双稠吡咯啶类生物碱的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本文件适用于蜂蜜、乳及乳制品、畜禽肉（牛、猪、鸡）及其内脏中野百合碱、克氏千里光宁碱、倒千里光碱、千里光菲灵碱、千里光宁、立可沙明碱、天芥菜碱、毛果天芥菜碱、蓝蓟定9种双稠吡咯啶类生物碱残留量的测定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 方法提要
蜂蜜样品用0.1 mol/L盐酸溶液溶解，乳及乳制品用5%三氯乙酸溶液沉淀蛋白，畜禽肉及内脏制品用5%乙酸乙腈溶液提取，混合型强阳离子交换固相萃取柱富集净化，高效液相色谱-质谱/质谱进行测定，外标法定量。
5 试剂和材料
除另有规定外，所有实验用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682中规定的一级水。5.1 乙腈。5.2 甲酸。5.3 乙酸。
5.4 甲醇：分析纯和色谱纯。5.5 醋酸铵：色谱纯。5.6 浓盐酸（36%～38%）。5.7 浓氨水（25%～28%）。5.8 三氯乙酸。
5.9 标准品：野百合碱（CENO，CAS号：315-22-0），克氏千里光宁碱（CHzNO，CAS号：2318-18-5），倒千里光碱（C，H=NO，，CAS号：480-54-6），千里光菲灵碱（CuHaNOz，CAS号：480-81-9），千里光宁（CHNO，CAS号：130-01-8），立可沙明碱（CHNO，CAS号：10285-07-1），天芥菜碱（CuHzNOz，CAS号：303-33-3），毛果天芥菜碱（CuHasNO，，CAS号：303-34-4），蓝蓟定（C_HaNO-，CAS号：520-68-3），纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。5.10 盐酸溶液（0.1 mol/L）：取9 mL浓盐酸（5.6）用水定容至1000 mL。5.11 5%三氯乙酸溶液：取50g三氯乙酸（5.8）用水定容至1000 mL。5.12 5%氨水-甲醇溶液：取5mL浓氨水（5.7）用分析纯甲醇定容至100mL。5.13 1%乙酸乙腈溶液：取10 mL乙酸（5.3）用分析纯乙腈定容至1000 mL。5.14 甲醇水溶液：取10 mL色谱纯甲醇（5.4），用水定容至100 mL。
5.15 混合型强阳离子固相萃取柱（60 mg 或相当者）：使用前依次用3 mL甲醇、3 mL水、3 mL 0.1mol/L盐酸活化，保持柱体湿润。
5.16 标准储备液：分别称取9种双稠吡咯啶类生物碱标准品（5.9）各10 mg 于10 mL容量瓶中，用色谱纯甲醇（5.4）溶解，配制成1mg/mL的标准储备液。再分别准确吸取1mg/mL的9种单标准储备液，用色谱纯甲醇（5.4）逐级稀释到10 μg/mL和1μg/mL的混合标准溶液，于4℃冰箱保存。5.17 标准工作溶液：吸取适量1μg/mL标准储备液（5.16），用色谱纯甲醇（5.4）释成浓度范围为20 ng/mL～300 ng/mL系列标准工作溶液，现配现用。5.18 滤膜：有机相、水相0.22μm。5.19 定性滤纸。
6 主要仪器和设备
6.1 液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。6.2 天平：感量为0.1mg和0.01g。6.3 氮吹仪。6.4 涡旋振荡混合器。6.5 离心机：转速≥12000r/min。6.6 固相萃取仪。6.7 具塞离心管：50mL。6.8 组织绞碎机。
7 样品制备与保存
取混合均匀蜂蜜、乳及乳制品、畜禽肉及其肝脏代表样品后装入洁净容器内，密封，标明标记，蜂蜜和乳粉于室温避光保存，其他样品于-18℃下保存。
8 测定步骤
8.1 供试样品提取和净化
称取2g蜂蜜样品（精确至0.01 g）于50 mL带盖聚四氟乙烯离心管中，加入10 mL0.1 mol/L盐酸（5.10），涡旋混合均匀后准备净化。
称取5g液态乳或2g乳粉样品（精确至0.01 g）于50 mL带盖聚四氟乙烯离心管中，加入10 mL 5%三氯乙酸溶液（5.11），涡旋1min，超声20min，高速离心后定性滤纸过滤，滤液准备净化。
混合型强阳离子固相萃取柱（5.15）预先用3mL分析纯甲醇和3mL0.1 mol/L盐酸活化，将样品溶液以小于1mL/min流速过柱，依次用3mL水和3mL分析纯甲醇淋洗，加入5mL5%氨水-甲醇溶