SN ICS 65.020.20 CCS B 16
中华人民共和国出入境检验疫行业标准
SN/T 5554—2022
玉米矮花叶病毒检疫鉴定方法Detection and identification of Maize dwarf mosaic virus
2022-07-07发布
2023-02-01实施
中华人民共和国海关总署发布
SN/T 5554—2022
玉米矮花叶病毒检疫鉴定方法
1 范围
本文件规定了玉米矮花叶病毒的DAS-ELISA、RT-PCR检测、免疫电镜及鉴别寄主测定等检测和鉴定方法。
本文件适用于进出境及田间监管期禾本科植物材料包括种子、种苗及其蚜虫等传毒介体携带的玉米矮花叶病毒的检测和鉴定。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
SN/T1840 植物病毒免疫电镜检测方法SN/T 2122 进出境植物及植物产品检疫抽样方法
3 术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4 玉米矮花叶病毒基本信息
中文名：玉米矮花叶病毒。英文名：Maize dwarf mosaic virus。缩写：MDMV。
分类地位：马铃薯Y病毒科（Potyviridac）马铃薯Y病毒属（Potyuirus）病毒。MDMV的其他信息见附录A。
5 原理
PCR 仪、酶标仪、电子天平（1/1 000 g）、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、水浴锅、冷冻离心机、-80℃超低温冰箱、高压灭菌锅、制冰机、微波炉、漩涡振荡器、球磨仪、电子透射显微镜。
6 仪器、设施、用具和试剂6.1 仪器
PCR仪、酶标仪、电子天平（1/1 000 g）、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、水浴锅、冷冻离心机、-80℃超低温冰箱、高压灭菌锅、制冰机、微波炉、漩涡振荡器、球磨仪、电子透射显微镜。
6.2 设施
隔离温室（10℃～30℃）。6.3 用具
可调式微量移液器（2μL、10μL、100μL、200μL、1000μL、5 000μL）及相应的无RNA酶的吸头、无RNA酶的离心管、PCR管和研钵等。6.4 试剂
除有特殊说明外，所有实验用试剂均为分析纯。
血清检测试剂盒、液氮、植物总RNA提取试剂盒、一步法RT-PCR检测试剂盒、琼脂糖、PBS缓冲液等。血清学和分子生物学试剂配制按照附录B和附录C执行。
7 抽样和待检样品制备7.1 抽样
抽样按照SN/T 2122的规定执行。7.2 待检样品制备7.2.1 种子类样品
若样品中存在畸形、不成熟的种子，则从中挑取出来单独作为一个样品进行检测；若无明显异常，则随机取适量种子，研磨仪研磨成粉后，按照1：10（质量：体积）加入抽提缓冲液（符合B.1.5）混合均匀，3 000 g 低速离心取100 pL上清液用于DAS-ELISA或核酸检测，或取约0.1g干粉样品直接提取RNA。7.2.2 种苗类样品
对于有症状的种苗类样品单独检测，重点选取表现症状的幼嫩叶片；无症状样品至少选取 20株的幼嫩叶片进行混样检测。样品研磨后按照1：10（质量：体积）加入提取缓冲液混合均匀，制备的汁液分别盛装于1.5mL离心管中，3000g低速离心后吸取上清液用于DAS-ELISA或核酸检测，或直接将叶片利用液氮进行研磨，取约0.1g干粉样品直接提取RNA。
8 检测与鉴定
8.1 检测鉴定流程
检测流程见图1，在检测过程中应设置合适的对照。当首次检出或某一地区首次发生时，应在分子检测结果的基础上，进一步采用其他方法进行验证。