SN ICS 65.020.20 CCS B 16
中华人民共和国出入境检验疫行业标准
SN/T 5549—2022
庭园象甲检疫鉴定方法
Detection and identification of Phlyctinus callosus(Schoenherr,1826)
2022-07-07发布
2023-02-01实施
中华人民共和国海关总署发布
SN/T 5549—2022
庭园象甲检疫鉴定方法
1 范围
本文件规定了庭园象甲【Ph/yctinus callosus（Schoenherr，1826）】的检疫鉴定方法。本文件适用于植物及植物产品中庭园象甲的检疫鉴定。
2 规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件。
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。3.1
体长 body length
象虫的体长为从复眼的前缘至鞘翅端部的长度，不包括喙、鞘翅的端刺和突起的长度突起。如果臀板的端部超过鞘翅，则臀板应计算在内。3.2
喙 rostrum
喙是由额向前延伸而成象鼻状或鸟喙状的结构，端部具口器。3.3
触角沟 scrobe
触角沟位于喙部，为收纳触角的沟状结构。3.4
行纹 stria
行纹是鞘翅背面纵向排列的沟纹，具成行的刻点。3.5
行间 interval
鞘翅上每相邻两条行纹之间的区域。3.6
臀板 pygidium
露伸出鞘翅外的体节，为可见的腹部末节背板。3.7
鳞片 scale
昆虫体壁由刚毛特化变形而成的扁平外长物。
4 庭园象甲基本信息
中文名：庭园象甲
SN/T 5549—2022
学名：Phlyctinus callosus（Schoenherr，1826）英文名：garden weevil，banded fruit weevil
异名：Phylctinus callosus （Boheman，1984）；Rhyncogonus germamus（Broun，1893）分类地位：鞘翅目Coleoptera，象虫科Curculionidae，斑象属Phlyctinus。
该虫成虫不具飞翔能力，可随受害寄主果实的人为调运远距离传播。其卵、幼虫、蛹和成虫均可随寄主植株的根际土壤传播。
庭园象甲其他信息参见附录A。
5 方法原理
根据庭园象甲的为害状，在检疫现场肉眼观察寄主植物，取得幼虫，饲养至成虫，在体视显微镜下观察，根据形态特征对种类进行判定。或将虫体通过PCR扩增检测，根据PCR测序结果进行种类的辅助判定。
6 仪器、用具和试剂
6.1 仪器和用具
体视显微镜、PCR扩增仪、凝胶成像系统、电泳仪、超净工作台、高速冷冻离心机、纯水仪、高压灭菌锅、制冰机、天平、pH计、水浴锅、冰箱、旋涡振荡器、光照培养箱。养虫笼、小型干燥器、防虫网罩、温湿度计、烧杯（200 mL、500 mL）、白瓷盘（大号、小号）、昆虫还软器、可封口塑料袋、标签、培养皿、吸水纸、镊子、小毛笔、指形管、纱布、三角纸剪刀、昆虫针、滴管、载玻片、盖玻片、饲养缸。6.2 主要试剂
DNA提取试剂盒，琼脂粉，乳酸，SDS，异丙醇，无水乙醇，Tris、HCl，MgCla，EDTA，NaOH，KCl，CTAB，TBE，蛋白酶K，三氯甲烷，苯酚：三氯甲烷：异戊醇（25：24：1）溶液，3mol/LNaAc （pH5.2），10×PCR缓冲液（含25mmoL/L MgSO&），Tag 酶，dNTP、琼脂糖，TAE，上样缓冲液，溴化乙锭（EB），10%KOH。所用试剂均为分析纯。
7 现场检疫
在检疫现场或疑似发生庭园象甲为害的水果，观察有关寄主植物、为害状（见附录A和附录B），解剖样品果实，如发现疑似成虫，用指形管盛装；如发现上述幼虫，连同植物根部，用可封口塑料袋装。上述管、袋均加标签，或编号，记录时间、地点、寄主、采集人等，带回实验室。
8 实验室鉴定
8.1 饲养
将检出的幼虫或卵随寄主果实一同放入饲养缸中，蛹可以放入有湿沙的饲养缸中，置于28℃～30℃、相对湿度70%～75%的光照培养箱中进行饲养观察，待成虫出现后进行鉴定。
SN/T 5549—2022
8.2 成虫标本的制作8.2.1 针插标本
成虫标本可制作为针插标本。标签上注明地点、寄主、时间、采集人等信息。8.2.2 浸泡标本
用无水乙醇浸泡保存成虫标本，常规保存，但如果分子试验用，应冷冻保存。标签上注明地点、寄主、时间、采集人等信息。
8.3 斑象属Phylctinus 成虫鉴定特征
体长4.0 mm～9.0 mm。喙粗短。触角膝状，着生于喙中部。柄节长，端部膨大呈棒状。索节7节，第1节短于第2节，4节～7节，第3节～第6节长大于宽，第7节长稍大于宽，末端呈棒状。棒节纺锤形，第1节长于第2节，边缘稍弯曲。唇基“V”形，基部可达触角窝，无鳞片。复眼突出，圆形。前胸背板宽略大于长，两侧近圆形，密被瘤突。鞘翅覆盖长形鳞片，行间具贩状突。腹部覆盖亮绿色或亮褐色鳞片，着生有直立刚毛，腹部第1节的长度短于第2节、第3节、第4节之和。腿节粗壮，无刺。跗节不发达，爪离生。
9 庭园象甲的鉴定特征
9.1 成虫9.1.1 整体
体长4.8mm～6.1mm。体色暗红色，头部和前胸背板较暗为黑色，鞘翅表面覆盖长为宽的2倍的长形鳞片，较小的鳞片长为宽的4倍～5倍，鳞片呈棕色、亮绿色、亮棕色，白色鳞片通常在翅鞘的2/3 处形成一个横带，前胸侧边从基部至前胸一半的位置有纵条带，前胸顶端有少量小点【见图 B.1a）】。9.1.2 头部
喙的长宽比为0.68倍，基部是顶部的1.05倍，中部两侧稍凹。额侧片宽度与单个复眼等宽，基部宽度比两复眼之间的距离窄，两侧近平行，上面具纵向脊从基部横向沟延伸到唇基，通过鳞片可见；唇基V形，基部可达触角窝，无鳞片，少量刚毛散生在刺孔处，下颚顶部着生3对长刚毛（2对短，1对长）；从侧面看，触角窝的毛略微弯曲，有一个比复眼直径还窄的鳞片带将触角窝的毛分开，指向眼睛的中部：上颚刚毛3，无鳞片。前额处的复眼，鳞片和刚毛之间有一条纵向的短沟，复眼基部下方的鳞片和刚毛呈中心排列。复眼突出，圆形。触角膝状，着生于喙中部。柄节长，端部膨大呈棒状，是索节的0.75倍；尝节7节，第1节为第2节的0.65倍，第3节～6节长大于宽，顶端圆锥形，第7节长稍大于宽；棒节纺锤形，超过前胸的前缘，第1节长于第2节，边缘稍弯曲【见图B.1a）】。9.1.3 前胸
宽略大于长（宽与长的比率为1.16），中部稍前位置最宽，顶部宽度是基部宽度的0.68倍，两侧近圆形，顶端的一半稍凹；表面密被瘤突，排列方向与中脊平行，在中脊的两侧各有两个轻微凹凸；中脊突起，光滑而有光泽，未达前胸的顶部和基部【见图B.1b）～c）】。9.1.4 鞘翅
有光泽，背面凸出，具刻纹，呈弱网状，么宽与长的比率为0.76，早宽与长的比率为0.80，间纹凸起，是一个鞘翅基部行纹宽度的2倍～4倍；第3、5、7间纹的顶端上有些较大的贩状突，第2、4、6和8间纹有些较小的胝状突；胝状突周围具半直立的白色鳞片【见图B.1e）】。9.1.5 腹部
腹部覆盖亮绿色或亮褐色鳞片；腹部第1节的长度是第2、3、4节之和，中间略凸（早），或凹内生有爪长的直立刚毛（），腹部第5节的长度稍长于第3节与第4节之和，在近顶部和中部有直立刚毛，在顶部附近有一个小结节（早），或在顶部2/3处有一个大孔，在孔的边缘着生长刚毛，在孔的顶部和基部的边缘密生的短卧式刚毛排列呈纵线（含）。9.1.6 足
腿节粗壮，近中部有一圈小白鳞片。胫节笔直，腹侧具2刺，等长，金黄色；爪等长【见图 B.1f）】。9.1.7 雄性生殖器
阴茎的长度是雄性外生殖器的0.7倍，侧凸，距基部1/3处最宽，朝端部逐渐变窄（宽与长的比率为0.45），侧面观，基部1/2和近顶端位置，稍弯曲；右边的阳茎侧叶比左边的宽，左边的阳茎侧叶与身体等长，基部有刚毛，右边的梳与刚毛平行。9.1.8 雌性生殖器
第八腹节，背面观呈三角形，顶部锐尖，基部1/3处最宽，侧面观呈拔针形，近中部最宽，前缘光滑无毛，中部至后缘粗糙。内突短，粗壮，与腹板等长或稍长；生殖节长度是宽度的4倍，扁平，顶端呈圆形，靠近顶部侧边着生长刚毛。受精囊有阔弧形角状结构；有一发达的分支，与囊管平行，长度为囊管的2 倍，圆形结节。9.2 卵
卵小，初产卵乳白色，后两端逐渐变成黑色。长约0.9mm，宽约0.5mm，呈卵椭圆形。9.3 幼虫
体白色，头部呈棕色，下颚、单眼黑色，咀嚼式口器，前额没有隆起。无前足，中胸无气门。体长约5mm，宽约2mm，细圆筒状，呈C形。腹部第1节～第8节有气孔，第8节～第11节没有腹足。刚毛直立。9.4 蛹
白色，体长约8mm，宽约2.5mm，宽椭圆形。离蛹。头部和前胸背板上有圆锥状瘤突，其上着生较长钩状的刚毛。触角膝状；喙长约1mm。
10 庭园象甲与近似种区别
斑象属Phlyctinus全世界已知6种，分别为庭园象甲Phlyctinus callosus（Schoenherr，1826）、Phlyctinus grootbosensis Haran.、Phlyctinus xerophilus Haran、Phlyctinus planithorax Haran、Phlyctinus littoralis Haran、Phlyctinus aloeworusHaran。庭园象甲与其近似种的检索表以及其形态特征、生殖器比较图见附录C。