JJF
中华人民共和国国家计量技术规范
JJF1836—2020
微量分光光度计校准规范
Calibration Specification for Micro-spectrophotometers
2020-07-02发布
2021-01-02实施
国家市场监督管理总局发布 JJF1836—2020
微量分光光度计校准规范
JJF 1836—2020
Calibration Specification for Micro-spectrophotometers
归口单位：全国生物计量技术委员会主要起草单位：中国计量科学研究院
上海市计量测试技术研究院
博奥生物集团有限公司
本规范委托全国生物计量技术委员会负责解释 JJF1836—2020
本规范主要起草人：
高运华 （中国计量科学研究院）许丽 (上海市计量测试技术研究院）武利庆 （中国计量科学研究院）王东（博奥生物集团有限公司）梁 文（上海市计量测试技术研究院）李宝连 （博奥生物集团有限公司） JJF1836—2020
目 录
引言 1 范围 2
(Ⅱ) (1) (1) (1) (1) (2) (2) (2) (2) (2) (2) (3) (3) (3) (4) (6) (7)
引用文件 3 概述·· 4 计量特性 5校准条件. 5.1环境条件。 5.2校准用标准物质及试剂· 6校准项目和校准方法 6.1 示值误差 6.2 重复性·· 6.3 线性和线性范围..
校准结果表达复校时间间隔
7 8
附录A示值误差的不确定度评定示例附录B校准原始记录参考格式附录C校准证书（内页）参考格式 JJF1836—2020
引言
本规范依据JJF1071一2010《国家计量校准规范编写规则》的要求编制，起草中参考了JJG178一2007《紫外、可见、近红外分光光度计检定规程》、GB/T26810一2011 《可见分光光度计》。
本规范为首次发布。
Ⅱ JJF1836—2020
微量分光光度计校准规范
1范围
本规范适用于微量分光光度计的校准，对于其他类型的分光光度计仪，可参照本规范执行。
2引用文件
本规范引用了下列文件： JJG178一2007紫外、可见、近红外分光光度计检定规程 GB/T26810—2011可见分光光度计凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本规范；凡是不注日期的引用文
件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本规范。
3概述
微量分光光度计体积小，样品用量少［（1～2）L，由光源、单色器、吸收池、 检测器以及信号指示系统五个部分组成。原理是基于物质对不同波长光的选择性吸收和朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律对物质进行定量分析和定性鉴别，常用于核酸与蛋白质的定性、定量分析以及菌液浓度的定量。
朗伯-比尔定律的数学表达式为：
A=-lg(I/I.)=-lgT=klc
式中： A——物质的吸光度； I。——人射的单色光强度； I一透射的单色光强度； T——物质的透射比； k——物质的吸光系数； l一一被分析物质的光程； c——物质的浓度。 检测时，用移液器将（1～2）uL样品滴加到检测平台上，仪器自动完成测试，显
示吸光度值，给出样品（核酸、蛋白质和荧光染料）定性和定量结果。
4计量特性 4.1示值误差 4.2重复性 4.3 线性和线性范围
1 JJF1836—2020
5校准条件
5.1环境条件
仪器使用允许的环境条件，温度：（15～35）℃、相对湿度：（10～80）%，校准过程中测量并记录环境的温度、相对湿度。 5.2校准用标准物质及试剂 5.2.1校准用标准物质
校准时应采用有证标准物质，包括：DNA标准物质，其特性量值（10～2000）ng/μL，相对扩展不确定度≤10%（k=2）；RNA标准物质（10～2000）ng/μL，相对扩展不确定度 ≤10%（k=2）或蛋白质标准物质（50～2000）ng/uL，相对扩展不确定度≤10%（k=2）。 5.2.2试剂
电阻率达到18MQ2·cm（25℃）的蒸馏水或三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸（TE）缓冲溶液等，用于仪器空白校准用。 5.2.3移液器
规格：最大量程2uL、2.5uL、10uL，需检定合格。
6校准项目和校准方法
6.1示值误差
选择DNA，RNA或蛋白质含量标准物质，用仪器自动设定的光程在仪器上分别测定260nm、280nm处吸光度值及对应的含量值，记录260nm（DNA或RNA）处或 280nm（蛋白质）处3次含量值的算术平均数与标准值之差，按式（1）计算其示值误差。
X
(1)
ox
X
7
式中： aX—-示值误差，ng/μL; X. 标准值，ng/μL； X,-测定值，ng/μL; n——测定次数。
6.2重复性
选择DNA，RNA或蛋白质含量标准物质，用仪器自动设定的光程在仪器上分别测定260nm、280nm处吸光度值及对应的含量值，记录260nm（DNA或RNA）处或 280nm（蛋白质）处重复测定6次含量值，按式（2）计算含量值标准偏差。
C (X -x) n- 1
(2)
2 JJF1836—2020
式中： s 标准偏差： X6次含量测定值的算术平均值； X,-单次测定值； n—测定的次数; i——测定的序号，i=1～6。
6.3线性和线性范围
选择不同含量的DNA标准物质，浓度范围在（10～2000）ng/μL及合适浓度的 RNA或蛋白质标准物质，至少5个浓度梯度，用仪器自动设定的光程在仪器上测定（260nm处和280nm处）空白和各标准物质的吸光度对应的含量值，每个浓度水平重复测定3次，计算其平均值。以系列标准物质的标称值和对应的吸光度值做标准曲线按式（3）计算其相关系数r，根据测量结果与标准物质标准值的一致程度，给出其线性范围。
(3)
式中：
相关系数：
-
X标准物质的标称值； Y——对应的吸光度值； N 测量次数。
7校准结果表达
校准记录应尽可能详尽地记载测量数据和计算结果，推荐的校准记录格式见附录B。微量分光光度计测量结果的测量不确定度应按JJF1059.1的要求评定，不确定度评定示例见附录A。经校准的微量分光光度计应出具校准证书，校准证书应符合 JJF1071—2010中5.12的要求。 82 复校时间间隔
根据实际使用情况，用户可自行确定仪器复校时间间隔，建议不超过1年。
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