中国康复医学杂惠，2005年，第20看，第11期Chinese Joernal gf Rehabilitation Medicine，Nov.2005，Vol.20，No.11
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·基础研究：
新生和成年大鼠雪旺细胞培养、纯化的实验研究
潘良春：尹宗生13王
勇1高荣保2王明丽2
伤1
胡
目的：比较新生和成年大鼠雪旺细胞(Schwanncells，SCs)的体外培养和纯化方法。方法分别取新生和成年SD
摘要
大鼠的垒骨神经，用混合酶消化法、差速贴壁法和低浓度胰酶快速消化法进行培养和纯化通过形态学观察和S-100 免疫细胞化学鉴定，并行MTT法检测细胞增殖能力。结果：两组细胞生长状态良好，均呈S-100免疫细煦化学反应阳性，纯度均达95%以上；由生长曲线显示新生鼠SCs生长更快，第2代SCs倍增时间：新生鼠3d、成年鼠4d。结论：从
新生和成年大鼠坐骨神经能成功分离培养出大量高纯度的SCs，新生鼠SCs增殖能力更强。关键调雪旺细胞；大鼠；坐骨神经；细胞培养；增殖
中图分类号：R329.2，R49
文献标识码：A文章编号：1001-1242(2005)-11-0817-03
Experimental study of methods of culturing and purifying newborn and adult rat Schwann cells/PAN Liangchun,YIN Zongsheng,WANG Wei,et al.//Chinese Journal of Rehabilitation Medicine,2005,20(11):817-—819
AbstractObjective:To compare
the
methods
The sciatic nerves of newbom(aged
12 days)
lagenase were used to separate SCs.
Purifying
of
culturing
adult(aged
and
SCs
trypsin in the course of passage.
purity
The
ofSC
immunocytochemical
proliferating function
The
stain.
in the two groups were in
and S100-
state
purifying newbom and adult rat SCs.Method: and
months) SD rat were harvested. Trypsin and col-
after a differential adhesion and low concentration
obtained
identified through the phase contrast microscope and S100
s assessed by MTT assay. Result: The cells
oostive
by
immunocytochemistry, and the purity of SCs was
, The doubling time of the 2nd passage of cells
more than 95%. The newbom SCs
grew faster than the adult SCs.
was 3 days for the newbom SCs and 4 days for the adult SCs
Conclusion:These findings indicate that a great
number of highly purified SCs can be acquired from newbom and adult rat. The proliferation eapacity of SCs iso lated from newbom rat is higher than those from adult rat
Author's address Dept of Orthopedics,First Affiliated Hospital,Anhui Medical University,Hefei,230022 Key wordsSchwann cells; nat; sciatie nerve; eell culture: proliferation
雪旺细胞(Schwanncells,SCs)为周围神经胶质细胞,包绕周围神经的轴突,形成髓鞘川。现已证明周围神经的再生能力主要归功于SCs,它能分泌少量神经营养因子促进神经轴突的发芽再生；其分泌的细胞外基质能够形成类轴突髓鞘的管状结构，为再生轴突的延伸和生长提供隧道。SCs可以起到神经轴突的“导管”、“导向"作用。而在周围神经损伤修复的研究中，自体神经移植已应用于周围神经缺损，但是可利用的移植神经长度有限。随着组织工程的兴起许多关于为培养SCs而准备的人工神经也已经被研究3。神经再生直接能力被认为大部分是由于SCs的移植促进周围神经再生。但如何快速获取大量SCs 是移植的关键。为此，我们比较了新生和成年大鼠 SCs培养和纯化方法，旨在寻找一个最佳培养方法，为临床应用提供实验基础。
1材料与方法 1.1实验动物
新生SD大鼠（出生1一2d)和4月龄的成年SD 大鼠（体重约300g)均购自中国科学技术大学实验
动物中心。
1.2试剂与材料
DMEM培养液（Gibco)：胎牛血清(FCS.Hy clone)；胰蛋白酶和胶原酶I(Gibco)；多聚赖氨酸(Sigma);S-100抗体（S2644,Sigma)；羊抗兔IgG FITC（TBD)；8倍手术放大镜(天津医用光学仪器
厂.CSX-IⅡI型);35mm培养皿及离心管。 1.3方法
1.3.1SCs原代培养：新生SD大鼠7只和成年SD 大鼠1只，分为新生组和成年组。新生组：乙醛吸入麻醇，新洁尔灭酊消毒皮肤3遍：置于无菌冰浴操作台上，切取双侧坐骨神经，放入盛有DMED的35mm 培养血中；8倍手术放大镜下剩离神经外膜，将神经组织剪成0.5mmx0.5mmx0.5mm大小碎块：0.25%胰蛋白酶和0.03%胶原酶I37℃水浴混合消化
安徽医科大学第一附属医院骨科，安徽合肥，230022
安徽医科大学徽生物教研室 2
3通讯作者：尹案生(安徽医科大学第一附属医院骨科，安徽合肥， 230022)
作者简介：潘良春，男，硕士研究生，住院医师收稿日期：20050725