第30卷，第6期 2010年6月
光谱学与光谱分析 Spectroscopy and Spectral Analysis
Vol. 30, No. 6, pp1511-1515
June,2010
组织细胞DNA降解与死亡时间的相关性的显微拉曼光谱分析
熊平1，郭萍2·，张静1 1.南华大学医学院法医教研常，湖南衡阳
日421001
2.南华大学数理学院，湖南衡阳421001
摘要为了给死亡时间推断的研究提供新的途径与数据，探讨了人死亡后组织细胞DNA含量变化与死后时间间隔关系。将离体肾、肝组织置于特定环境中，在不同时间点提取离体组织，利用激光共焦显微拉曼光谱技术和统计学方法，在拉变位移测试范围内，对死后不同时间肾、肝组织DNA含量变化进行拉变光谱检测与统计学分析。结果显示；人死亡后48～72h，随着死亡时间的推移，肾、肝组织Raman光诺的主要散射峰峰位没有明显变化，而其峰高有明显差异；所测组织的激光拉光谱待征峰的相对峰强值（I1%/Iz）随死亡时间的推移面减小。因此可以得出结论：人死亡后肾、肝组织细胞DNA含量随死亡时间延长呈下降趋势，两者之间存在线性关系。
关键词显微拉受光谱；DNA降解；死亡时间间隔(PMI)；相对峰强
中图分类号：O657.3
引言
文献标识码：A
DOI: 10. 3964/j. issn. 1000-0593(2010)06-1511-05
1材料与方法
死亡时间即死后经过时间（postmortemInterval，PMI）的推所是法医检案实践中要解决的重要任务之一，目前，国内外法医学者运用多种技术手段推所死亡时闻，但无论哪一种方法都有其不完善的地方和难以解决的向题(-3)，PMI的精确推定在现代刑事案件的债破等方面起着关键性的作用。人体细胞中的溶酶体含有各种水解酶，特别是组织蛋白水解酶和水解核酸、多糖的酶等。人体在死亡后由于新陈代谢的停止，组织、细胞失去生存功能，落酶体将各种水解酶急剧释出，使组织蛋白质和核酸等高分子化合物以及糖蛋白等复合物逐渐降解。随着分子生物学的飞速发展，尸体组织样本中这此复合物的时间依赖性降解已成为日前研究死亡时间的焦点，国内外的法医学学者开展了根据人体死亡后组织内分子化合物及其他复合物的含量进行死亡时间推断的研究(+9)，本文利用激光共案焦显微拉受光谐技术测定组织内不同的有机分子化学基团的报动光谱，准确地检测出组织中所含的化学基团以及各类化学基团的含量，并通过机体组织内化合物随时间的降解程度PMI变化的的规律来推断时间(PMI)，这
种方法可避免在DNA检测技术中所需检材量大的问题。收稿日期：2009-08-10，修订日期：2009-11-16
1.1样本采集及制备
本实验的样品均取自户检标本，共取8例尸体，其死亡时间及死亡原因（猝死、机械性损伤、中毒或电击等急速死亡的户体)均明确。将人体离体肾、肝组织标本置于温度为 15C，混度为RH65%的实验条件中，以死后48h为第一次取材时间，分别取48，52，56，60，64，68，72h的肺、肝脏、脾脏和肾脏组织标本，大小约2cm×2cm×0.3cm，放人 10%甲醛中固定并编号标记，然后再脱水、透明、浸蜡处理后用石蜡包理，制成蜡块，切片，最后封片，制作成病理切
片标本供激光共聚焦显微拉变光谱仪检测。 1.2试验仪器及测定条件
实验中使用的楚德国Bruker公司生产的Senterra激光共案焦显微拉受光谱仪。采用Ar*激光器的532nm线作为激发源，功率为20W，积分时间为50s，拉受光谱测量范围70~4500cm1，激光聚集光斑范周50m×1000gμm。
把病理切片置于显微镜下，在10倍目镜×20倍物镜下观察人死后不同组织、不同取材时间的病理切片标本，按选定的实验条件对所观察的组织标本进行光谱扫描。测试时室内温度为25℃左右，显度为60%左右。
基金项目：国家自然科学基金项日(30371626)和潮南省科技厅项目(2008FJ3084)资助
作者简介：照平，1959年生，南华大学法医教研室教授
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