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高效液相色谱－蒸发散射检测器法测定
中药钩藤中钩藤碱的含量
尚艳玲
（黑龙江江世药业有限公司，黑龙江哈尔滨150000）
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摘要：本文用高效液相法对钩廉中的钩藤碱的进行了含量测定。固定相为：依利特hypersilBDSC18色谱往(4.6*250*5u)，乙睛和 0.01mol/L酪酸铵溶液梯度洗脱为流动相，漂移管温度为105极氏度；载气流速为3.0ml/min;放大倍数为2；钩藤碱在0.1~1.8mg*mL-范围内呈良好的线性关系。钩藤碱的平均回收率为99.5%。本法简便、重现性好、回收率高，可用于钩藤中约藤碱的含量测定，
关键词：约幕；钧藤碱；测定
钧落,(拉丁学名: Uncaria rhynchophylla(Miq.)Miq. ex Havil.), 别名钩丁、吊藤、鹰瓜风、倒挂刺等，是茜草科钩藤属常绿藤本植物。《本草新缩》记载：“钩藤，去风甚速，有风症者必宜用之。但风火之生，多因于肾水不足，以致木燥火炎，于补阴药中，少用钩藤，则风火易散，简全不补阴，纯用钩赚以祛风散火，则风不能息，而火且愈炽。”钩藤含有异去氧钩碱（isocorynoxeine）、去氢钩藤碱（corynoxeine）、吲噪类生的碱、去氢硬毛钩藤碱（hirsuteine）、二氢柯榭固碱（dihydrocorynantheine）、异长春花武内酰胺（strictosamide,iso vincosidelactam）、金丝桃式(hyperin）、三叶豆武(trifolin）、β（yohim bine）及缝籽木募甲醚（geis-soschizinemethylether）等成分。本文用高效液相法对钩藤中的钩菌藤碱的进行了含量测定。
1仪器与试药
1.1仪器：高端试剂级超纯水机(HQ-50）郑州华新电气公司； ACQUITYUPLCH-Class超高效液相色语(沃特世科技（上海)有限公司)：上海通微蒸发光散射检测器ELSD-UM5000(上海通微分析技术有限公司）；WatenAlliance高效波相色谱系统(乌鲁本齐祥生仪器有限公司)；FA1004万分之一分析天平（上海书培实验设备有限公司);OHAUS奥豪斯STARTER3100PH计(上海泉佰仪器有限公司)；10L-50L大型旋转蒸发仪(北京赛美思仪器设备有限公司）超声波清洗器SCO-10202500W大容量超声波清洗设备（上海声彦超声波仪器有限公司)；SHB-(III)循环水式真空泵（上海楚柏实验室设备有限公司)：JMLABOTW系列通用水浴槽（优莱博技术(北京)有限公司)。
1.2试药：乙睛（东莞市恒科化工有限公司）、磷酸（常州市武进区前黄华茂化工有限公司）、三乙胺（广州市卡朋斯化工科技有限公司）、冰醋酸（杭州萧山创益化工仪器有限公司）、甲醇（杭州萧山创益化工仪器有限公司）、磷酸氢二铵（广州市卡朋斯化工科技有限公司)、四氢呋喃(湖北社文化工科技有限公司)。
2含量测定 2.1色谱条件
依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。色谱柱为依利特hypersil BDSC18色谱柱(4.6*250*5u);以乙睛为流动相A，以0.01mol/L醋酸铵溶液为流动相B，按下表进行梯度洗脱.漂移管温度为105摄氏度；载气流速为3.0ml/min;放大倍数为2。理论板数按钩藤碱峰计算应不得低于2000
时间(分钟) 020
流动相A(%）
20→+40
流动相B(%)
80→60
2.2供试品溶液的制备
取钩藤适量，粉碎，精密称定至容量瓶内，加适量甲醇浸泡10 小时，超声40分钟，放凉，用甲醇定容，过0.45μm的滤膜，即得。
2.3对照品溶液的制备
精密称取钩藤碱对照品约50mg，置10毫升棕色容量瓶中，用甲醇超声波振荡溶解并用甲醇稀释至刻度，掘匀，精密吸取10毫升，置100毫升棕色容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每 1mL溶液中含钩藤碱0.5mg)。
2.4标准曲线的制备
制备浓度为0.1mg*mL*,0.2mg*mL-",0.4mg*mL-",0.6mg*mL-"
0.8mg
*mL-',1.0mg
*mL-",1.2mgomL-",1.4mgomL-,1.6mgomL-
1.8mgomL-的对照品溶液，分别精密吸取10μL注人HPLC，记录色
谱图。以峰面积积分值的对数A(μg)为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，钩幕碱对照品在0.1~1.8mg mL-"范围内线性关系良好。
2.5精密度试验
精密吸取钩藤碱对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.88%。结果表明，本实验精密度良好
2.6重现性试验
分别称取同批钩藤样品6份，分别制备成供试品，按色谱条件测定含量，并计算样品的RSD值为0.53%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.7稳定性试验
取供试品溶渡，分别在0,0.5小时，1.0小时，1.5小时，2.0小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品钩藤碱峰面积积分值的RSD为0.83%。结果表明钩廉碱在2.0小时内稳定。
2.8回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的钩藤碱对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量(同时测定样品含量)，计算回收率。6次测定的平均回收率为99.5%，RSD为0.68%。
2.9样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定钩藤三批样品中钩藤碱的含量，
结果三批样品的含量分别为0.73mg/g.0.83mg/g.0.81mg/g 3讨论
分别考察乙腈和0.01mol/L醋酸铵溶液梯度洗脱，乙-甲醇-水-三乙胺(20:20:60：0.01)，水(0.4%磷酸：0.7%三乙胺)-乙(77：23)，水-甲醇磷酸(30:70:0.01),乙腈-甲醇-四氢呋响水(10:15:35：40)，水-甲醇-乙腈(50:20:30),乙腊-甲醇1%酷酸钠-冰醋酸(18:12:70：0.1)，甲醇-水-三乙胺(70：30：0.2)不回比例的流动相，结果以乙晴和0.01mol/L醋酸铵溶液梯度洗脱为流动相，供试品各峰分离效果最好.故选用乙睛和0.01mol/L醋酸铵溶液梯度洗脱为流动相。本实验方法是一种简便、准确、安全的测定钩藤含量的方法。钩藤中钩藤碱的含量应不少于0.7mg/g
参考文献
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